目的:主要研究在小鼠肝臟缺血再灌注損傷的過程中,PGAM5與Caspase-1表達對細胞焦亡活性的變化,探討PGAM5/Caspase-1調(diào)控細胞焦亡對缺血再灌注處理誘導(dǎo)肝臟細胞損傷的影響。方法:對于體內(nèi)實驗,我們喂養(yǎng)C57小鼠并建立肝臟缺血再灌注模型,通過HE染色和免疫組織化學(xué)的方法檢測小鼠肝組織是否有氣球樣變、炎性浸潤、淤血和壞死等病理學(xué)的變化,用實時聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）檢測肝臟IRI中PGAM5 mRNA的表達,用末端尿苷-鎳標(biāo)記（TUNEL）凋亡染色的方法檢測AML12細胞的凋亡情況,用免疫印跡技術(shù)檢測PGAM5、Caspase-1、GSDMD、NLRP3等細胞焦亡和炎癥因子的蛋白表達量;對于體外實驗,我們體外培養(yǎng)肝臟AML12細胞,分小組轉(zhuǎn)染PGAM5 siRNA質(zhì)粒和Caspase-1因子抑制劑,并創(chuàng)建肝臟缺血缺氧再灌注損傷的模型,細胞蛋白提取之后,通過免疫印跡（western blot）技術(shù)檢測各細胞焦亡因子蛋白的表達量,通過細胞免疫熒光來檢測肝臟AML12細胞焦亡因子表達的強弱。結(jié)果:在C57小鼠肝臟缺血再灌注中,通過HE染色觀察發(fā)現(xiàn),Blank組的老鼠肝臟組... 

【文章來源】：河南科技大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 肝臟缺血再灌注損傷的概述
    1.2 肝臟缺血再灌注損傷的發(fā)生機制
        1.2.1 肝臟缺血再灌注損傷的相關(guān)信號通路
    1.3 細胞焦亡
        1.3.1 細胞焦亡的途徑
    1.4 細胞焦亡與缺血再灌注損傷
第2章 前言
第3章 材料與方法
    3.1 實驗相關(guān)材料
        3.1.1 實驗級動物
        3.1.2 實驗細胞
        3.1.3 實驗儀器
        3.1.4 實驗試劑
        3.1.5 試劑配方
    3.2 實驗方法
        3.2.1 qRT-PCR法檢測肝臟(IRI)中PGAM5mRNA在每個時間段的表達
        3.2.2 HE染色和免疫組化檢測
        3.2.3 TUNEL一步法凋亡試劑盒檢測肝組織的凋亡情況
        3.2.4 細胞培養(yǎng)與處理
        3.2.5 qRT-PCR和免疫印跡法檢測PGAM5siRNA和 si-NC的表達水平
        3.2.6 細胞上清液的采集及生化指標(biāo)的測定
        3.2.7 免疫印跡法檢測在肝臟(IRI)中細胞焦亡因子在各分組中的表達情況
        3.2.8 通過免疫熒光檢測肝臟(IRI)中細胞焦亡因子在各分組中的表達
        3.2.9 實驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)分析
第4章 結(jié)果
    4.1 用qRT-PCR法檢測肝臟(IRI)中PGAM5mRNA在各個時間段的表達量
    4.2 HE染色觀察C57 小鼠肝臟缺血再灌注損傷后的組織結(jié)構(gòu)病理學(xué)變化
    4.3 免疫組織化學(xué)染色觀察肝臟(IRI)后,細胞焦亡因子在肝臟中的表達
    4.4 TUNEL凋亡試劑盒檢測肝組織在肝(IRI)中各時間段的凋亡情況
    4.5 qRT-PCR和免疫印跡法檢測PGAM5siRNA和 PGAM5si-NC蛋白的表達
    4.6 在C57 小鼠肝臟缺血再灌注損傷中檢測細胞上清液在各時間段的變化
    4.7 免疫印跡法檢測在肝臟(IRI)中細胞焦亡因子在各分組中的表達情況
    4.8 免疫熒光檢測肝臟(IRI)中細胞焦亡因子在各分組中的平均熒光表達強度
第5章 討論
    5.1 PGAM5 對細胞焦亡的影響
    5.2 Caspase-1 對細胞焦亡的影響
    5.3 PGAM5與Caspase-1 對細胞焦亡的影響
    5.4 細胞焦亡在肝臟缺血再灌注損傷中的影響
    5.5 問題與展望
第6章 結(jié)論
參考文獻
縮略詞語詞匯表
附錄
致謝
攻讀學(xué)位期間的研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
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[2]細胞焦亡與感染性疾病研究進展[J]. 游宇來,王濤,龔建平.  檢驗醫(yī)學(xué)與臨床. 2018(24)
[3]肝臟缺血再灌注損傷分子機制的研究進展[J]. 賴金惠,劉忠忠,李玲,鐘自彪,葉少軍,王彥峰,葉啟發(fā).  中華移植雜志(電子版). 2018(04)
[4]細胞焦亡的研究進展[J]. 王星星,宋虎,杜晨陽,王振,張建軍.  天津醫(yī)藥. 2018(11)
[5]微小RNA-182-5p調(diào)控焦亡參與肝缺血再灌注損傷[J]. 杜晨陽,宋虎,王星星,王振,張建軍.  天津醫(yī)藥. 2018(10)
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[9]NLRP3炎癥小體在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注時細胞焦亡中的作用[J]. 邱珍,夏中元,雷少青,趙博,吳洋.  中華麻醉學(xué)雜志. 2018 (06)
[10]細胞焦亡在糖尿病心肌缺血再灌注損傷的變化及作用機制[J]. 邱珍,夏中元,周斌,吳洋,孟慶濤,冷燕.  武漢大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2017(01)

博士論文
[1]丁苯酞通過抑制PGAM5介導(dǎo)的壞死性凋亡對實驗性自身免疫性腦脊髓炎小鼠發(fā)揮保護作用[D]. 王穎.河北醫(yī)科大學(xué) 2018



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