目的:主要研究在小鼠肝臟缺血再灌注損傷的過(guò)程中,PGAM5與Caspase-1表達(dá)對(duì)細(xì)胞焦亡活性的變化,探討PGAM5/Caspase-1調(diào)控細(xì)胞焦亡對(duì)缺血再灌注處理誘導(dǎo)肝臟細(xì)胞損傷的影響。方法:對(duì)于體內(nèi)實(shí)驗(yàn),我們喂養(yǎng)C57小鼠并建立肝臟缺血再灌注模型,通過(guò)HE染色和免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)小鼠肝組織是否有氣球樣變、炎性浸潤(rùn)、淤血和壞死等病理學(xué)的變化,用實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）檢測(cè)肝臟IRI中PGAM5 mRNA的表達(dá),用末端尿苷-鎳標(biāo)記（TUNEL）凋亡染色的方法檢測(cè)AML12細(xì)胞的凋亡情況,用免疫印跡技術(shù)檢測(cè)PGAM5、Caspase-1、GSDMD、NLRP3等細(xì)胞焦亡和炎癥因子的蛋白表達(dá)量;對(duì)于體外實(shí)驗(yàn),我們體外培養(yǎng)肝臟AML12細(xì)胞,分小組轉(zhuǎn)染PGAM5 siRNA質(zhì)粒和Caspase-1因子抑制劑,并創(chuàng)建肝臟缺血缺氧再灌注損傷的模型,細(xì)胞蛋白提取之后,通過(guò)免疫印跡（western blot）技術(shù)檢測(cè)各細(xì)胞焦亡因子蛋白的表達(dá)量,通過(guò)細(xì)胞免疫熒光來(lái)檢測(cè)肝臟AML12細(xì)胞焦亡因子表達(dá)的強(qiáng)弱。結(jié)果:在C57小鼠肝臟缺血再灌注中,通過(guò)HE染色觀察發(fā)現(xiàn),Blank組的老鼠肝臟組... 

【文章來(lái)源】：河南科技大學(xué)河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 肝臟缺血再灌注損傷的概述
    1.2 肝臟缺血再灌注損傷的發(fā)生機(jī)制
        1.2.1 肝臟缺血再灌注損傷的相關(guān)信號(hào)通路
    1.3 細(xì)胞焦亡
        1.3.1 細(xì)胞焦亡的途徑
    1.4 細(xì)胞焦亡與缺血再灌注損傷
第2章 前言
第3章 材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)相關(guān)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)級(jí)動(dòng)物
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.5 試劑配方
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 qRT-PCR法檢測(cè)肝臟(IRI)中PGAM5mRNA在每個(gè)時(shí)間段的表達(dá)
        3.2.2 HE染色和免疫組化檢測(cè)
        3.2.3 TUNEL一步法凋亡試劑盒檢測(cè)肝組織的凋亡情況
        3.2.4 細(xì)胞培養(yǎng)與處理
        3.2.5 qRT-PCR和免疫印跡法檢測(cè)PGAM5siRNA和 si-NC的表達(dá)水平
        3.2.6 細(xì)胞上清液的采集及生化指標(biāo)的測(cè)定
        3.2.7 免疫印跡法檢測(cè)在肝臟(IRI)中細(xì)胞焦亡因子在各分組中的表達(dá)情況
        3.2.8 通過(guò)免疫熒光檢測(cè)肝臟(IRI)中細(xì)胞焦亡因子在各分組中的表達(dá)
        3.2.9 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第4章 結(jié)果
    4.1 用qRT-PCR法檢測(cè)肝臟(IRI)中PGAM5mRNA在各個(gè)時(shí)間段的表達(dá)量
    4.2 HE染色觀察C57 小鼠肝臟缺血再灌注損傷后的組織結(jié)構(gòu)病理學(xué)變化
    4.3 免疫組織化學(xué)染色觀察肝臟(IRI)后,細(xì)胞焦亡因子在肝臟中的表達(dá)
    4.4 TUNEL凋亡試劑盒檢測(cè)肝組織在肝(IRI)中各時(shí)間段的凋亡情況
    4.5 qRT-PCR和免疫印跡法檢測(cè)PGAM5siRNA和 PGAM5si-NC蛋白的表達(dá)
    4.6 在C57 小鼠肝臟缺血再灌注損傷中檢測(cè)細(xì)胞上清液在各時(shí)間段的變化
    4.7 免疫印跡法檢測(cè)在肝臟(IRI)中細(xì)胞焦亡因子在各分組中的表達(dá)情況
    4.8 免疫熒光檢測(cè)肝臟(IRI)中細(xì)胞焦亡因子在各分組中的平均熒光表達(dá)強(qiáng)度
第5章 討論
    5.1 PGAM5 對(duì)細(xì)胞焦亡的影響
    5.2 Caspase-1 對(duì)細(xì)胞焦亡的影響
    5.3 PGAM5與Caspase-1 對(duì)細(xì)胞焦亡的影響
    5.4 細(xì)胞焦亡在肝臟缺血再灌注損傷中的影響
    5.5 問(wèn)題與展望
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
縮略詞語(yǔ)詞匯表
附錄
致謝
攻讀學(xué)位期間的研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[7]腸缺血再灌注損傷的發(fā)病機(jī)制、診斷及治療研究進(jìn)展[J]. 鄒燕,肖凱強(qiáng),何雪梅,周翔宇.  山東醫(yī)藥. 2018(31)
[8]細(xì)胞焦亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制及其在腎臟疾病發(fā)病中作用的研究進(jìn)展[J]. 劉建銘,曹靈.  山東醫(yī)藥. 2018(30)
[9]NLRP3炎癥小體在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注時(shí)細(xì)胞焦亡中的作用[J]. 邱珍,夏中元,雷少青,趙博,吳洋.  中華麻醉學(xué)雜志. 2018 (06)
[10]細(xì)胞焦亡在糖尿病心肌缺血再灌注損傷的變化及作用機(jī)制[J]. 邱珍,夏中元,周斌,吳洋,孟慶濤,冷燕.  武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2017(01)

博士論文
[1]丁苯酞通過(guò)抑制PGAM5介導(dǎo)的壞死性凋亡對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠發(fā)揮保護(hù)作用[D]. 王穎.河北醫(yī)科大學(xué) 2018



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