目的通過研究賁門失弛緩癥患者的食管組織中硫化氫合成酶的表達情況、外源性硫化氫治療賁門失弛緩癥動物模型的相關機制初步探討及治療效果以及應用硫化氫供體（富露施）對賁門失弛緩癥患者的治療作用三個實驗,探索賁門失弛緩癥的發(fā)病過程中硫化氫可能扮演的角色以及硫化氫對于本病治療作用的可行性。方法（1）隨機選取賁門失弛緩癥患者18例與鱗狀細胞食管癌患者8例分別作為實驗組與對照組進行實驗。實驗組患者于POEM術中通過內鏡直視下獲取食管組織標本,對照組則于食管切除術過程中獲取標本;實驗組取材部位從上至下依次為LES上4cm,2cm,LES及賁門四處,對照組則依照實驗組取材大小取食管中段與LES部位。將實驗組與對照組所獲標本進行硫化氫合成酶胱硫醚-β-合酶（cystathionine-β-synthase,CBS）和胱硫醚-γ-裂解酶（cystathionine-γ-lyase,CSE）組化染色、Western Blot（WB）實驗以及上述兩種酶分別與神經(jīng)特異性抗體sox-10的免疫熒光雙染實驗來觀察CBS與CSE的表達情況;（2）取30只Balb/c小鼠隨機分為造模組和對照組,記錄初始體重。造模組給予水合... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

賁門失弛緩癥患者臨床癥狀Eckardt評分標準食管高分辨率測壓檢查被檢查者停用抑酸藥、胃腸動力藥等3-5天，禁食

圖 2 不同濃度 10ml分離膠配置成分圖⑦封閉：轉膜后用事先配置好的 TBST 對 PVDF 膜進行清洗 3 次，每次 10分鐘，清洗后放入抗體孵育盒，加入 5%脫脂牛奶做封閉液，室溫下封閉 1 個小時；⑧一抗與二抗孵育：將棄去封閉液并且用 TBST 清洗后的 PVDF 膜加入到用牛奶稀釋到適宜比例（按照一抗說明書）的一抗中，排盡氣泡后封閉，4℃下?lián)u床過夜 12 小時；棄去一抗，TBST 清洗 3 次后加入到標記好的二抗中室溫環(huán)境下?lián)u床孵育 1 小時；棄去二抗，TBST 清洗 PVDF 膜 3 次，每次 10 分鐘；⑨顯影定影：避光環(huán)境下取 ECL 試劑盒中 A、B 液各 0.5ml 配置 ECL 顯色液，關閉顯影夾后進行曝光顯影定影的顯色反應；將結果進行蛋白分子定量和光密度值分析，并通過軟件分析條帶灰度值來計算樣本蛋白的相對表達量。1.1.5 硫化氫合成酶與 sox-10 在賁門失弛緩癥患者中免疫熒光雙染實驗1.1.5.1 實驗儀器食管高分辨率測壓檢查儀 Medical Measurement Systems恒溫培養(yǎng)箱 上海躍進醫(yī)療器械

天津醫(yī)科大學碩士學位論文為Ⅰ級 3 例，Ⅱ級 5 例，Ⅲ級 5 例，Ⅳ級 5 例；LES 上 2cm處表Ⅰ級 4 例，Ⅱ級 6 例，Ⅲ級 5 例，Ⅳ級 3 例；LES 上 4cm處表達級 10 例，Ⅱ級 5 例，Ⅲ級 3 例，Ⅳ級 0 例；與上述 LES 處表達得CBS 在賁門處、LES 上 2cm 處、LES 上 4cm處表達得分情況的差學意義（t 值分別為-4.61、-5.72、-8.04，P 值均<0.05）。CSE 在實賁門處表達結果分級為Ⅰ級 3 例，Ⅱ級 6 例，Ⅲ級 5 例，Ⅳ級 4 處表達結果分級為Ⅰ級 4 例，Ⅱ級 5 例，Ⅲ級 6 例，Ⅳ級 3 例；表達結果分級為Ⅰ級 11 例，Ⅱ級 5 例，Ⅲ級 2 例，Ⅳ級 0 例；與上得分情況相比，CSE 在賁門處、LES 上 2cm 處、LES 上 4cm處表差異均具有統(tǒng)計學意義（t 值分別為-5.17、-6.65、-9.22，P 值均<布情況見圖 4。

【參考文獻】：
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本文編號：3221449