C57BL/6小鼠乙型肝炎病毒感染模型中細(xì)胞因子研究
發(fā)布時(shí)間：2021-06-08 03:50
背景與目的建立C57BL/6小鼠乙型肝炎病毒HBV感染的動(dòng)物模型,參考基因芯片結(jié)果,檢測(cè)模型肝組織中趨化因子IL-18、Mig、IP-10、CXCL12、CCR7、CCL19及部分急性期蛋白基因、免疫相關(guān)蛋白的基因表達(dá)差異,為進(jìn)一步研究炎性因子在HBV感染中作用及其機(jī)制奠定基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)方法1.建立C57BL/6小鼠HBV感染的動(dòng)物模型:pBluescript-HBV質(zhì)粒轉(zhuǎn)化超級(jí)感受態(tài)細(xì)菌DH5α,提取大量質(zhì)粒,高壓水動(dòng)力法于小鼠尾靜脈注射,建立感染模型,同時(shí)設(shè)立空載對(duì)照組（pBluescript）動(dòng)物模型。2.建模第4天取模型動(dòng)物外周血,ELISA試劑盒檢測(cè)外周血中HBsAg的表達(dá)水平,驗(yàn)證感染模型是否成功建立,收取肝組織凍存。3.參考基因芯片檢測(cè)結(jié)果,挑選感興趣的差異表達(dá)趨化因子,設(shè)計(jì)引物。Trizol法提取肝組織總RNA,逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,Real-time PCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組對(duì)應(yīng)因子的基因拷貝數(shù)量,RT-PCR凝膠電泳分析。4.免疫組織化學(xué)法對(duì)表達(dá)差異較明顯的因子IP-10進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果1.HBV感染C57BL/6小鼠模型的建立:ELISA檢測(cè)尾靜脈高壓注射HBV C57BL...
【文章來(lái)源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
空載組和實(shí)驗(yàn)室的比較分析散點(diǎn)圖
圖 2. ELISA 檢測(cè) HBsAg 表達(dá)Negtive(-)：試劑盒內(nèi)陰性樣品，Positive(+)：試劑盒內(nèi)陽(yáng)性樣本，norm未處理小鼠，pBluescript：pBluescript 注射小鼠模型，pBluescript-HBVpBluescript-HBV 注射小鼠模型。三、HBV 感染模型鼠趨化因子的表達(dá)1. Real-time PCR 結(jié)果Trizol 法提取組織中總 RNA，逆轉(zhuǎn)錄酶將 RNA 逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA，在 96 孔板式 PCR 儀器上 58℃退火擴(kuò)增基因，以各組的 β-actin 為內(nèi)參進(jìn)行數(shù)據(jù)整理。3 結(jié)果可見(jiàn)溶解曲線顯示為單峰，圖 4 結(jié)果顯示擴(kuò)增曲線的上升期在 15-30cy之間，表明實(shí)驗(yàn)引物間無(wú)二聚體形成，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠，可以作為分析參考數(shù)據(jù)
圖 5 空載組（pBluescript）和實(shí)驗(yàn)組（pBluescript-HBV）趨化因子的表. RT-PCR 結(jié)果為驗(yàn)證 Real-time PCR 結(jié)果，設(shè)計(jì)針對(duì)差異表達(dá)明顯的 IL18，Mig， IPxcl12，Ccl19，Ccr7 引物，以 Trizol 法提取組織中的總 RNA 為模板，進(jìn)一 RT-PCR 擴(kuò)增目的基因，同時(shí)擴(kuò)增 β-actin 基因。PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖泳，結(jié)果如圖 6 所示，在泳道 1 和泳道 8 近 200bp 處可見(jiàn)擴(kuò)增條帶，與-actin171bp 大小一致。在泳道 9-14 可見(jiàn) 300-400bp 擴(kuò)增條帶，分別與引物增的 IL-18（395bp），Mig（487bp），IP-10（403bp），cxcl12（377bp），422bp），ccr7（380bp）大小相符，提示 HBV 感染模型組均有上述趨化因達(dá)，與定量 PCR 所測(cè)目的基因表達(dá)變化趨勢(shì)一致，而空載 pBluescript 組因子的表達(dá)，RT-PCR 結(jié)果亦表明 HBV 感染可誘導(dǎo)肝細(xì)胞表達(dá) IL18，MP10，Cxcl12，Ccl19，Ccr7。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Role of chemokines and their receptors in viral persistence and liver damage during chronic hepatitis C virus infection[J]. Juan R Larrubia,Selma Benito-Martínez,Miryam Calvino,Eduardo Sanz-de-Villalobos,Trinidad Parra-Cid. World Journal of Gastroenterology. 2008(47)
本文編號(hào)：3217631
【文章來(lái)源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
空載組和實(shí)驗(yàn)室的比較分析散點(diǎn)圖
圖 2. ELISA 檢測(cè) HBsAg 表達(dá)Negtive(-)：試劑盒內(nèi)陰性樣品，Positive(+)：試劑盒內(nèi)陽(yáng)性樣本，norm未處理小鼠，pBluescript：pBluescript 注射小鼠模型，pBluescript-HBVpBluescript-HBV 注射小鼠模型。三、HBV 感染模型鼠趨化因子的表達(dá)1. Real-time PCR 結(jié)果Trizol 法提取組織中總 RNA，逆轉(zhuǎn)錄酶將 RNA 逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA，在 96 孔板式 PCR 儀器上 58℃退火擴(kuò)增基因，以各組的 β-actin 為內(nèi)參進(jìn)行數(shù)據(jù)整理。3 結(jié)果可見(jiàn)溶解曲線顯示為單峰，圖 4 結(jié)果顯示擴(kuò)增曲線的上升期在 15-30cy之間，表明實(shí)驗(yàn)引物間無(wú)二聚體形成，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠，可以作為分析參考數(shù)據(jù)
圖 5 空載組（pBluescript）和實(shí)驗(yàn)組（pBluescript-HBV）趨化因子的表. RT-PCR 結(jié)果為驗(yàn)證 Real-time PCR 結(jié)果，設(shè)計(jì)針對(duì)差異表達(dá)明顯的 IL18，Mig， IPxcl12，Ccl19，Ccr7 引物，以 Trizol 法提取組織中的總 RNA 為模板，進(jìn)一 RT-PCR 擴(kuò)增目的基因，同時(shí)擴(kuò)增 β-actin 基因。PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖泳，結(jié)果如圖 6 所示，在泳道 1 和泳道 8 近 200bp 處可見(jiàn)擴(kuò)增條帶，與-actin171bp 大小一致。在泳道 9-14 可見(jiàn) 300-400bp 擴(kuò)增條帶，分別與引物增的 IL-18（395bp），Mig（487bp），IP-10（403bp），cxcl12（377bp），422bp），ccr7（380bp）大小相符，提示 HBV 感染模型組均有上述趨化因達(dá)，與定量 PCR 所測(cè)目的基因表達(dá)變化趨勢(shì)一致，而空載 pBluescript 組因子的表達(dá)，RT-PCR 結(jié)果亦表明 HBV 感染可誘導(dǎo)肝細(xì)胞表達(dá) IL18，MP10，Cxcl12，Ccl19，Ccr7。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Role of chemokines and their receptors in viral persistence and liver damage during chronic hepatitis C virus infection[J]. Juan R Larrubia,Selma Benito-Martínez,Miryam Calvino,Eduardo Sanz-de-Villalobos,Trinidad Parra-Cid. World Journal of Gastroenterology. 2008(47)
本文編號(hào)：3217631
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