本文關(guān)鍵詞：臍帶血干細(xì)胞及臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對失代償期肝炎后肝硬化患者肝臟功能恢復(fù)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：近年來,患者自體骨髓干細(xì)胞移植在肝硬化治療中的良好效果已經(jīng)得到認(rèn)可,但該治療方法存在諸多限制,比如：采集過程痛苦,數(shù)量不足,分化能力不足等。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)提示臍血干細(xì)胞及臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在自我更新,增殖分化和擴(kuò)增潛能方面均優(yōu)于骨髓干細(xì)胞。本研究的目的是建立分離臍血干細(xì)胞及臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)的方法,并觀察兩者植入對失代償期肝炎后肝硬化的臨床效果,以尋求一種安全、有效的治療肝炎后肝硬化的方法。 第一步無菌條件下采用負(fù)收集法分離臍血干細(xì)胞,同時(shí)采用酶消化法分離臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。觀察兩種干細(xì)胞的形態(tài),并通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行進(jìn)一步鑒定。 第二步選擇47例失代償期肝炎后肝硬化患者,在抗病毒治療的基礎(chǔ)上,其中臍血干細(xì)胞治療組(27例),將臍血干細(xì)胞通過肝固有動脈介入和靜脈輸注途徑植入。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療組(20例),采用同樣方法植入。 觀察干細(xì)胞植入前和植入后半個(gè)月、1個(gè)月、3個(gè)月及6個(gè)月時(shí)患者血清學(xué)指標(biāo)改變,主要包括肝功能指標(biāo)：血漿白蛋白水平(ALB)、總膽紅素(TBIL)水平及血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST),血常規(guī)指標(biāo)：血小板(PLT)、白細(xì)胞(WBC)及凝血功能指標(biāo)：凝血酶原時(shí)間(PT),腫瘤標(biāo)記物：甲胎蛋白(AFP)。并對患者治療前及治療后3個(gè)月B超結(jié)果進(jìn)行比較,同時(shí)觀察患者臨床癥狀、體征(乏力、納差、肝病面容、蜘蛛痣等)改善情況和術(shù)后不良反應(yīng)。 采集的臍血量約為110ml(100-130ml),通過負(fù)收集法單份臍血可分離獲得干細(xì)胞平均數(shù)為2.31×108。倒置顯微鏡下觀察,細(xì)胞分布均勻,大小均勻,呈圓形,透亮,折光性強(qiáng),細(xì)胞活性95%。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果：CD34+細(xì)胞占0.23%,活率為72.71%。無細(xì)胞污染事件發(fā)生。 通過酶消化法,從臍帶組織中成功獲得間充質(zhì)干細(xì)胞,細(xì)胞分離培養(yǎng)至貼壁生長至80-90%融合約需10-14天。后大約3-5天傳代一次。倒置顯微鏡下觀察,原代細(xì)胞呈扁平條索狀。P1、P2、P3、P4代細(xì)胞形態(tài)觀察：細(xì)胞形態(tài)較均一,折光度好。細(xì)胞膜表面有小的突起,胞核位于胞體的中央,為圓形或橢圓形,胞質(zhì)豐富,呈成纖維樣細(xì)胞形態(tài),平行排列生長或渦旋狀生長。 在臍血干細(xì)胞治療組中我們發(fā)現(xiàn),術(shù)前與術(shù)后3個(gè)月、6個(gè)月AST、 TBIL、CHE和ALB水平比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。白細(xì)胞計(jì)數(shù)在第3個(gè)月后顯著增加(P0.05),第6個(gè)月出現(xiàn)下降。血小板計(jì)數(shù)無明顯變化,但逐漸改善。AFP在第3個(gè)月較治療前有明顯差異(P0.05),第6個(gè)月出現(xiàn)下降。細(xì)胞植入后3個(gè)月左右行腹部超聲檢查,門靜脈直徑減小13例,增大12例,不變2例。脾臟厚度16例減小,11例增大。在治療過程中無臟器衰竭及急性或慢性GVHD的病例。發(fā)熱病例4例,皮疹3例。植入細(xì)胞半個(gè)月,患者的精神、飲食改善明顯。腹脹、乏力不適好轉(zhuǎn)。植入后6個(gè)月者腹腔積液減少率為81.48%(22/27),食欲、乏力好轉(zhuǎn)率為88.89%(24/27),肝掌及蜘蛛痣減輕率為51.85%(14/27)。 臍帶間充質(zhì)治療組,術(shù)前與術(shù)后ALB水平在第1個(gè)月即有顯著差異(P0.05),持續(xù)到第6個(gè)月。術(shù)后3個(gè)月,6個(gè)月時(shí)AST、TBIL和PT水平較術(shù)前比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。白細(xì)胞及血小板計(jì)數(shù)無顯著變化,但逐漸改善。AFP水平術(shù)后第1個(gè)月,第3個(gè)月較術(shù)前比較,有顯著性差異(P0.05),第6個(gè)月下降,無顯著性差異�；颊呒�(xì)胞植入后3個(gè)月左右行腹部超聲檢查,門靜脈直徑減小7例,增大9例,不變4例。脾臟厚度11例減小,9例增大。在治療過程中無臟器衰竭病例,無急性或慢性GVHD的病例。發(fā)熱病例8例。植入細(xì)胞半個(gè)月后,腹脹、乏力不適逐漸緩解,食欲較輸注前好轉(zhuǎn)。植入后6個(gè)月,患者腹水減少率為80%(16/20),腹脹、乏力不適改善率90%(18/20),肝掌及蜘蛛痣減輕率為50%(10/20)。通過兩種治療方案對患者臨床癥狀及體征、腹部B超結(jié)果(門靜脈直徑、腹水、脾臟厚度)有效率的分析,兩種治療方法無明顯差異(P0.05)。 總之,臍血干細(xì)胞分離及臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)方法安全、高效、穩(wěn)定,兩者對失代償期肝炎肝硬化患者的肝功能恢復(fù)效果顯著,且無明顯差異。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離、培養(yǎng)過程時(shí)間長、容易污染、難度較大,且成本較高,而臍血干細(xì)胞臨床應(yīng)用時(shí)間長,分離方法操作簡便、安全性較高,因此更適合于臨床應(yīng)用。
【關(guān)鍵詞】：肝硬化 臍血干細(xì)胞 植入 失代償 間充質(zhì)干細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R575.2
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12
• 材料和方法12-23
• 結(jié)果23-26
• 附圖26-34
• 附表34-38
• 討論38-50
• 結(jié)論50-52
• 參考文獻(xiàn)52-58
• 綜述58-68
• 參考文獻(xiàn)63-68
• 致謝68-70
• 個(gè)人簡歷70

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：臍帶血干細(xì)胞及臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對失代償期肝炎后肝硬化患者肝臟功能恢復(fù)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：314839