發(fā)布時(shí)間：2017-04-17 05:08

  本文關(guān)鍵詞：腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子對(duì)小鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞的重構(gòu)作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)是神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子家族的重要成員之一。在中樞及周?chē)窠?jīng)系統(tǒng),BDNF通過(guò)與其高親和力受體酪氨酸激酶受體B (tropomyosin-related kinase B, TrkB)結(jié)合,發(fā)揮調(diào)節(jié)神經(jīng)元的發(fā)育、再生、修復(fù)、突觸重構(gòu)等生理作用。近年來(lái),BDNF對(duì)胃腸動(dòng)力的調(diào)節(jié)作用引起越來(lái)越多的關(guān)注。多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)表明BDNF可以增加健康成年人的排便頻率及增強(qiáng)大鼠粘膜刺激引起的離體結(jié)腸蠕動(dòng)反射。結(jié)腸平滑肌細(xì)胞(smooth muscle cell, SMC)作為結(jié)腸收縮的重要效應(yīng)器官,BDNF對(duì)其是否有重構(gòu)作用尚未見(jiàn)報(bào)道。目的本研究通過(guò)引入BDNF基因敲除(BDNF+/-)小鼠,觀(guān)察BDNF+/-小鼠結(jié)腸SMC超微結(jié)構(gòu)的改變及結(jié)腸組織平滑肌α-肌動(dòng)蛋白(smooth muscle a-actin, α-SMA)表達(dá)水平的變化,并應(yīng)用BDNF和TrkB受體阻滯劑(K252a)體外干預(yù)C57bl/6小鼠結(jié)腸SMC,檢測(cè)SMC形態(tài)及α-SMA、相關(guān)信號(hào)通路蛋白、細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化,研究BDNF是否可以直接引起小鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞的重構(gòu),進(jìn)而影響腸道動(dòng)力。方法1.實(shí)驗(yàn)選用健康野生型C57B1/6(BDNF+/+)小鼠和BDNF基因敲除(BDNF+/-)小鼠：電鏡檢測(cè)BDNF+/+小鼠和BDNF+/-小鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的差異；利用Western blotting方法檢測(cè)BDNF+/-小鼠和BDNF+/+小鼠α-SMA表達(dá)水平的差異。2.培養(yǎng)原代小鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞：細(xì)胞免疫熒光鑒定原代結(jié)腸SMC是否有TrkB受體的表達(dá)；BDNF及K252a分別干預(yù)結(jié)腸平滑肌細(xì)胞,根據(jù)干預(yù)不同,分為三組①對(duì)照組②BDNF組K252a組,三組細(xì)胞均于干預(yù)24小時(shí)后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)；細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)BDNF及K252a干預(yù)后結(jié)腸平滑肌細(xì)胞形態(tài)的改變；Western blotting檢測(cè)干預(yù)后SMC中α-SMA, TrkB-PLC-Ca2+信號(hào)通路蛋白表達(dá)量的變化；鈣離子成像檢測(cè)BDNF和K252a干預(yù)下SMC中細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的瞬時(shí)改變。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS 17.0軟件,計(jì)量資料以x±s表示。BDNF+/-小鼠和BDNF+/+小鼠結(jié)腸組織α-SMA表達(dá)水平、干預(yù)前后細(xì)胞內(nèi)鈣離子相對(duì)熒光強(qiáng)度值的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；BDNF和K252a干預(yù)SMC,對(duì)照組、BDNF組及BDNF+K252a組細(xì)胞核大小、細(xì)胞密度、α-SMA表達(dá)水平、TrkB信號(hào)通路蛋白表達(dá)水平總體采用單因素方差分析,若總體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,以Bonferroni法進(jìn)行組間兩兩比較。P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.與BDNF+/+小鼠相比,BDNF+/-小鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞細(xì)胞間隙增寬,充填了大量的膠原纖維；平滑肌細(xì)胞的邊界呈多個(gè)球狀突起；胞體內(nèi)肌絲的密度減少；2.與BDNF+/+小鼠相比,BDNF+/-小鼠結(jié)腸α-SMA表達(dá)水平明顯降低；3.小鼠原代結(jié)腸SMC表達(dá)TrkB受體；4.在BDNF作用下,免疫熒光結(jié)果顯示SMC細(xì)胞核體積增大,細(xì)胞密度增加,骨架蛋白熒光強(qiáng)度增強(qiáng),BDNF+K252a干預(yù)組細(xì)胞的形態(tài)改變相反；5. BDNF組SMC中α-SMA蛋白表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組和BDNF+K252a組;6. BDNF組結(jié)腸平滑肌細(xì)胞中TrkB-PLC-Ca2+信號(hào)通路蛋白表達(dá)水平明顯升高,且在BDNF干預(yù)下SMC內(nèi)鈣離子濃度明顯升高,K252a可阻斷以上變化。結(jié)論1.BDNF+/-小鼠與BDNF+/+小鼠相比,結(jié)腸平滑肌細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)和功能均發(fā)生了改變。2.小鼠原代結(jié)腸平滑肌細(xì)胞表達(dá)TrkB受體,且BDNF干預(yù)SMC后,小鼠結(jié)腸SMC的形態(tài)和功能均發(fā)生了改變,K252a可以阻斷以上變化。3.BDNF可能通過(guò)TrkB-PLC-Ca2+信號(hào)通路引起小鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞的重構(gòu),進(jìn)而影響腸道動(dòng)力。
【關(guān)鍵詞】：腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 平滑肌細(xì)胞 TrkB-PLC-Ca~(2+)信號(hào)通路 重構(gòu) 腸道動(dòng)力
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R574.62
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 符號(hào)說(shuō)明12-13
• 前言13-17
• 材料與方法17-27
• 結(jié)果27-29
• 討論29-34
• 結(jié)論34-35
• 附圖35-39
• 參考文獻(xiàn)39-45
• 致謝45-46
• 攻讀碩士期間發(fā)表的文章46-47
• 附件47

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 陳林,王建國(guó);功能性便秘的診斷與現(xiàn)代治療[J];中國(guó)醫(yī)師雜志;2005年09期

  本文關(guān)鍵詞：腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子對(duì)小鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞的重構(gòu)作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：312467