本文關(guān)鍵詞：維生素D對細(xì)菌誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎的影響及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：研究維生素D（Vitamin D, VD）對鼠傷寒沙門氏菌Salmonella typhimurium誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative colitis, UC）的影響，并初步探討其可能的作用機(jī)制，為維生素D的臨床應(yīng)用及UC的營養(yǎng)治療奠定理論基礎(chǔ)。 方法：將40只3w齡雌性C57BL/6小鼠按體重隨機(jī)分為正常組、模型組、VD缺乏組、低劑量VD補(bǔ)充組、高劑量VD補(bǔ)充組，共5組。給予正常組和模型組富含VD的正常飼料在正常光照下喂養(yǎng)，其余三組在不含紫外線的黃光燈照射下給予VD缺乏的飼料喂養(yǎng)。7w后，尾靜脈采血，檢測小鼠血清中25-OH-D3和鈣離子的含量。VD缺乏模型建立后，，小鼠禁食4h，除正常組外，每只小鼠給予7.5mg/ml的鏈霉素溶液0.1ml灌胃，正常組給予等量無菌水溶液。鏈霉素處理20h后，小鼠再次禁食4h，正常組給予0.1ml無菌Luria-Bertani（LB）溶液灌胃，其余四組每只小鼠給予等量含1×106CFU Salmonellatyphimurium的LB溶液灌胃，繼續(xù)禁食2h后，自由飲水?dāng)z食。實(shí)驗(yàn)期間密切監(jiān)測小鼠體重、精神狀態(tài)、糞便性狀等。3d后，低劑量VD補(bǔ)充組和高劑量VD補(bǔ)充組分別給予1μg/kg、10μg/kg的1,25(OH)2D30.1ml灌胃，其余三組給予等量溶劑：含0.12%乙醇的磷酸鹽緩沖液，連續(xù)3d后禁食24h處死。采集小鼠血清、結(jié)腸并無菌地取出肝臟和脾臟。評價各組小鼠的體重變化、肝脾重量、結(jié)腸的長度與重量、組織學(xué)損傷，HE染色后觀察結(jié)腸組織的炎癥程度等；酶聯(lián)免疫吸附法檢測小鼠血清中25-OH-D3，1,25(OH)2D3，白介素（Interluekin, IL）-17和IL-23的含量；微板法檢測血清鈣離子濃度；微生物平板計(jì)數(shù)法測定肝脾中沙門氏菌負(fù)荷；免疫組織化學(xué)法檢測小鼠結(jié)腸組織維生素D受體（Vitamin D receptor, VDR）蛋白表達(dá)；Real-time PCR法檢測小鼠結(jié)腸組織中核因子-κB（Nuclear factor, NF-κB）p65，IL-17和VDR mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果： 1.維生素D缺乏小鼠模型成功建立，在黃光燈照射下喂養(yǎng)VD缺乏飼料的小鼠在第7w時血清25-OH-D3水平，顯著低于正常喂養(yǎng)的小鼠（P0.001）。 2. Salmonella typhimurium處理的小鼠精神萎靡不振，體重下降明顯（P0.05），部分出現(xiàn)粘液便和血便；肉眼大體損傷評分增加（P0.05），可見充血和潰瘍等損傷；HE染色顯示粘膜受損、上皮細(xì)胞丟失、粘膜下水腫、中性粒細(xì)胞浸潤等，病理組織學(xué)評分顯著增加（P0.05）；結(jié)腸長度變短，結(jié)腸濕重指數(shù)增加（P0.05）。 3. VD缺乏組HE染色顯示結(jié)腸粘膜結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞，病理組織學(xué)評分均高于模型組（P0.05）；與VD缺乏組相比，低劑量VD補(bǔ)充可顯著降低體重?fù)p失（P0.05）、結(jié)腸長度損失（P0.01）和病理組織學(xué)評分（P0.05）；而高劑量VD補(bǔ)充組病理組織學(xué)評分與VD缺乏組無差異（P0.05）。 4.模型組和VD缺乏組小鼠肝脾體積增大，呈暗紅色，質(zhì)量高于正常組（P0.01），肝臟和脾臟內(nèi)Salmonella typhimurium細(xì)菌負(fù)荷增加（P0.05）；低劑量VD補(bǔ)充組肝脾重低于模型組和VD缺乏組，細(xì)菌負(fù)荷減少（P0.05）；高劑量VD補(bǔ)充組無改善（P0.05）。 5. VD缺乏組小鼠血清25-OH-D3和1,25(OH)2D3水平低于正常組和模型組（P0.05），低劑量VD補(bǔ)充組高于VD缺乏組（P0.01），與正常組無差異，高劑量VD補(bǔ)充組高于正常組（P0.01）。 6.與正常組相比，模型組和VD缺乏組血清IL-17和IL-23蛋白含量均增加（P0.01），且VD缺乏組水平較模型組高（P0.01）；低劑量和高劑量VD補(bǔ)充組IL-17和IL-23水平明顯降低（P0.01），且高劑量組最低。 7.模型組和VD缺乏組小鼠結(jié)腸組織IL-17A，NF-κB p65和VDR mRNA表達(dá)水平較正常組明顯增加（P0.01）；低劑量和高劑量VD補(bǔ)充組可顯著降低其表達(dá)水平（P0.01），且高劑量VD補(bǔ)充組IL-17A，NF-κB p65和VDR mRNA表達(dá)均低于低劑量VD補(bǔ)充組的表達(dá)（P0.01）。 8.模型組VDR蛋白表達(dá)高于正常組（P0.01），VD缺乏組結(jié)腸組織VDR蛋白的表達(dá)水平顯著低于模型組（P0.01）；低劑量和高劑量VD補(bǔ)充組VDR蛋白表達(dá)高于VD缺乏組（P0.01），且高劑量組較高。 結(jié)論： 1.成功建立Salmonella typhimurium誘導(dǎo)的小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎。 2.維生素D缺乏的小鼠炎癥因子的表達(dá)增加，腸道Salmonella typhimurium細(xì)菌負(fù)荷增加，加劇腸道炎癥。 3.低劑量補(bǔ)充維生素D后能明顯改善小鼠結(jié)腸炎癥狀，降低結(jié)腸炎癥，減少腸道和肝脾中Salmonella typhimurium的含量；而高劑量補(bǔ)充維生素D結(jié)腸炎癥并未得到改善，可能與過度抑制炎性因子的表達(dá)有關(guān)。 4.補(bǔ)充活性維生素D后，VDR蛋白含量和mRNA表達(dá)水平升高。 5.維生素D對細(xì)菌誘導(dǎo)的結(jié)腸炎的調(diào)節(jié)可能與VDR介導(dǎo)的對NF-κB的抑制作用有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：維生素D 潰瘍性結(jié)腸炎 維生素D受體 鼠傷寒沙門氏菌 NF-κB p65 IL-17
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R574.62
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 中英文縮寫詞對照表10-11
• 前言11-14
• 材料與方法14-23
• 1. 實(shí)驗(yàn)動物14
• 2. 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器14-15
• 2.1 主要試劑14
• 2.2 主要儀器14-15
• 3. 實(shí)驗(yàn)方法15-22
• 3.1 實(shí)驗(yàn)飼料與培養(yǎng)基15-16
• 3.2 實(shí)驗(yàn)動物分組16
• 3.3 維生素 D 缺乏模型制備16
• 3.4 動物 UC 模型制備和活性維生素 D 干預(yù)16
• 3.5 樣品采集及指標(biāo)測定16-17
• 3.6 指標(biāo)評價與方法17-22
• 4. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理22-23
• 結(jié)果23-30
• 1. VD 缺乏小鼠模型成功建立23
• 2. 小鼠一般狀況23-24
• 3. 結(jié)腸大體損傷形態(tài)學(xué)評分及小鼠結(jié)腸長度的變化24-25
• 4. 結(jié)腸組織病理學(xué)損傷評分25
• 5. 小鼠肝臟和脾臟質(zhì)量及細(xì)菌負(fù)荷25-26
• 6. 小鼠血清鈣和維生素 D 濃度26-27
• 7. 小鼠血清 IL-17 和 IL-23 表達(dá)水平變化27-28
• 8. 小鼠結(jié)腸組織 mRNA 表達(dá)28-29
• 9. 小鼠組織 VDR 蛋白表達(dá)29-30
• 討論30-37
• 1. 沙門氏菌誘導(dǎo)的結(jié)腸炎模型的建立30-31
• 2. IL-23/IL-17 信號通路與潰瘍性結(jié)腸炎31-33
• 3. 維生素 D 通過 VDR 作用于潰瘍性結(jié)腸炎33-34
• 4. NF-κB p65 在潰瘍性結(jié)腸炎炎癥反應(yīng)中的作用34-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-44
• 綜述44-53
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 個人簡介及攻讀學(xué)位期間研究成果53-54
• 致謝54

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：310437