發(fā)布時間：2021-03-20 13:25

　　研究目的高甘油三酯血癥是急性胰腺炎的發(fā)病原因之一，但目前對其發(fā)病機制仍未完全明確。本實驗通過體內(nèi)試驗和體外試驗，分別觀察：胰腺腺泡細胞在游離脂肪酸棕櫚酸存在的情況下對細胞的損傷、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激通路在細胞損傷中的作用及其產(chǎn)生的機制；通過高脂飲食誘導建立高脂（以血甘油三酯升高為主）大鼠動物模型，雨蛙肽誘發(fā)急性胰腺炎，研究內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激通路在發(fā)病中的作用。從而闡明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激在高甘油三酯血癥合并急性胰腺炎大鼠發(fā)病中的作用。研究方法一、體外試驗部分：1、膠原酶法分離大鼠的胰腺腺泡細胞，給予八肽膽囊收縮素（cholecystokinin-octopeptide，CCK-8）刺激胰腺腺泡細胞，測定細胞的淀粉酶釋放比例，觀察胰腺腺泡細胞的外分泌功能。2、膠原酶法分離大鼠的胰腺腺泡細胞，分別與0.05mmol／L、0.1mmol／L的棕櫚酸共同培育1、2、3小時后，再給予CCK-8刺激胰腺腺泡細胞半小時，測定細胞淀粉酶釋放比例，觀察胰腺腺泡細胞在棕櫚酸存在的情況下，細胞外分泌功能的改變情況。3、透射電鏡觀察在棕櫚酸存在下，胰腺腺泡細胞的凋亡情況。4、半定量RT-PCR檢測GRP78／Bip、XBP-1、GADD... 

【文章來源】：復旦大學上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1一1分離的胰腺腺泡細胞(X400倍)

穿月大1貸麟Z研夕之里‘不甘丈第一淑分正常胰腺腺泡細胞加入100pm的CCK一8后，細胞腫脹，胞內(nèi)酶原顆粒增多，并出現(xiàn)空泡，部分細胞存在凋亡和壞死(見圖1一3A)。當細胞培養(yǎng)3小時后，再加入100Pm的ccK一8后，細胞內(nèi)也有大量的酶原顆粒，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)極度擴張。出現(xiàn)大量的凋亡細胞:胞質(zhì)固縮，染色質(zhì)濃縮成半月形附于核膜(見圖1一 3BCD)。圖1一3電鏡下胰腺腺泡細胞的表現(xiàn)A:胰腺腺泡細胞3h+CCK一 81Oopm0.shX4000倍B:胰腺腺泡細胞3h+棕擱酸0.IM+CCK一 8IOOpm0.shx3000倍C，D:胰腺腺泡細胞3h+棕擱酸0.zM+eeK一 8loopm0.shxZ000倍5、細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的伴侶蛋白分子GRp78/Bip、xBP一1、cHoP/GADD153的耐州A表達:RT一PCR結(jié)果顯示，胰腺腺泡細胞與棕擱酸0.Ilnlnol/L共同培養(yǎng)3小時，當加入IOOpmol/L的CCK一 80.5小時后，細胞的GRp78/Bip、CHOP/GADD153、Caspase一2的mRNA表達都有增強;xBP一1出現(xiàn)剪接

圖1一5與棕擱酸培養(yǎng)2小時給予100pmol/L刺激后大鼠胰腺腺泡細胞內(nèi)鈣的變化圖1一6所示，黑色線條表示正常胰腺腺泡細胞培養(yǎng)3小時后給予IOOpmol/L的CCK一8刺激后鈣離子(F/F。)隨時間變化的曲線;蘭色線條表示的是胰腺腺泡細胞與棕桐酸0.05tI’irno1/L共同培養(yǎng)3小時后，給予IO0pmol/L的CCK一8后細胞內(nèi)鈣離子(F/F。)變化曲線;紅色線條表示胰腺腺泡細胞與棕擱酸0.lrnfnol/L共同培養(yǎng)3小時后，給予10Opmol/L的CCK一8后細胞內(nèi)鈣離子(F/F。)變化曲線。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，三組細胞內(nèi)鈣是呈現(xiàn)緩慢增高并達到高峰，并長時間維持高水平。當細胞與棕擱酸0.Ilnlnol/L共同培養(yǎng)3小時后，用10Opmol/L的CCK一8刺激細胞，細胞內(nèi)鈣離子的峰值達到最高

【參考文獻】：
期刊論文
[1]高三酰甘油血癥對大鼠胰腺腺泡細胞的影響[J]. 馬晶晶,王興鵬,吳愷,黃曉曦,徐銘益,曾悅.  胰腺病學. 2006(05)
[2]高脂血癥對大鼠急性胰腺炎發(fā)生的影響[J]. 尤和誼,蔡端.  肝膽胰外科雜志. 2005(01)
[3]大鼠實驗性高脂血癥和高脂血癥性脂肪肝模型研究[J]. 倪鴻昌,李俊,金涌,臧紅梅,彭磊.  中國藥理學通報. 2004(06)
[4]應用體細胞基因轉(zhuǎn)移技術建立的遺傳性極度高血脂小鼠模型[J]. 李慧,周淑佩,范江霖,劉國慶.  中國實驗動物學報. 2004(02)
[5]大鼠實驗性高脂血癥兩種造模方法的比較[J]. 張智,閃增郁,向麗華,陳燕萍,李爽姿,張雪亮.  中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志. 2004(02)
[6]幾種高脂血癥動物模型的比較[J]. 高瑩,李可基,唐世英,肖穎.  衛(wèi)生研究. 2002(02)



本文編號：3091075