目的 在自身免疫性肝炎和一些病毒性肝炎引起的肝纖維化的發(fā)病過程中,激活的免疫細胞及其分泌的細胞因子對肝臟組織直接或間接的破壞作用是一個重要的原因。CD154與其受體CD40的相互作用是調(diào)節(jié)體液免疫和細胞免疫的關(guān)鍵因素之一,通過阻斷CD40-CD154之間的信號傳導已用于一些肺的炎癥與纖維化、自身免疫性疾病和動脈粥樣硬化癥。本研究設(shè)想利用表達人的CD154分子的真核表達質(zhì)粒作為疫苗,免疫小鼠產(chǎn)生抗自身CD154分子的抗體,以阻斷CD40-CD154信號,起到抑制細胞免疫及細胞因子分泌,以減輕由反復注射刀豆素蛋白（Concanavalin A, Con A）誘導的肝纖維化的形成。方法 采用重組異種同源人的CD154真核表達質(zhì)粒（pORF-hCD154,p-hCD154）做DNA疫苗,同時用表達小鼠自身的CD154質(zhì)粒（pORF-mCD154,p-mCD154）以及空質(zhì)粒（pORF-mcs,p-c）做為同種及空白對照。首先體外轉(zhuǎn)染真核細胞鑒定這些質(zhì)粒在真核細胞中的產(chǎn)生CD154的能力。大腸桿菌擴增大量制備去除內(nèi)毒素的DNA疫苗。Balb/c小鼠尾靜脈反復注射Con A誘導肝纖維化形成,同時給... 

【文章來源】：四川大學四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的COS一1細胞RT一PCR鑒定收集轉(zhuǎn)染p一hCD154(h)和p一meD154(m)質(zhì)粒后72h的Cos一z細胞用Tnzol試劑

四川大學博士學位論文.2.22p一hcD154減輕肝纖維化的形成為進一步了解注射p一hcD154DNA疫苗后肝組織結(jié)構(gòu)的的變化，我們在第6次注射ConA后一周斷頸處死小鼠，取出肝組織。和p一hCD154組小鼠比較，其余3組小鼠的肝臟體積均增大，表面不光滑，可見小結(jié)節(jié)狀增生。10%中性甲醛、石蠟包埋、切片后，常規(guī)HE染色。鏡下觀察發(fā)現(xiàn)經(jīng)p一hcD154DNA疫苗治療組的小鼠的肝臟均小葉結(jié)構(gòu)基本完

四川大學博士學位論文整，肝細胞排列整齊，無明顯變性壞死，肝組織淋巴細胞浸潤較少。而p一mCD154、p一c及生理鹽水組的小鼠肝臟組織小葉破壞較明顯，結(jié)構(gòu)紊亂，肝細胞減少，有點狀壞死，匯管區(qū)增大，在肝間質(zhì)可看到大量的淋巴細胞浸潤(如圖5)。該研究結(jié)果說明注射DNA疫苗p一hCD154組小鼠與注射p一mCD154、p一c及生理鹽水組小鼠相比較明顯減少ConA引起的肝組織內(nèi)淋巴細胞浸潤及肝組織結(jié)構(gòu)的破壞，減輕了反復注射CnoA引起的肝纖維化的形成與發(fā)展。.2.23p一hCD154減少了肝組織內(nèi)膠原的形成在肝纖維化的發(fā)展過程中，HSCs的激活產(chǎn)生大量的ECM，其中主


本文編號：3088305