發(fā)布時(shí)間：2021-03-18 12:16

　　目的 在自身免疫性肝炎和一些病毒性肝炎引起的肝纖維化的發(fā)病過程中,激活的免疫細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子對(duì)肝臟組織直接或間接的破壞作用是一個(gè)重要的原因。CD154與其受體CD40的相互作用是調(diào)節(jié)體液免疫和細(xì)胞免疫的關(guān)鍵因素之一,通過阻斷CD40-CD154之間的信號(hào)傳導(dǎo)已用于一些肺的炎癥與纖維化、自身免疫性疾病和動(dòng)脈粥樣硬化癥。本研究設(shè)想利用表達(dá)人的CD154分子的真核表達(dá)質(zhì)粒作為疫苗,免疫小鼠產(chǎn)生抗自身CD154分子的抗體,以阻斷CD40-CD154信號(hào),起到抑制細(xì)胞免疫及細(xì)胞因子分泌,以減輕由反復(fù)注射刀豆素蛋白（Concanavalin A, Con A）誘導(dǎo)的肝纖維化的形成。方法 采用重組異種同源人的CD154真核表達(dá)質(zhì)粒（pORF-hCD154,p-hCD154）做DNA疫苗,同時(shí)用表達(dá)小鼠自身的CD154質(zhì)粒（pORF-mCD154,p-mCD154）以及空質(zhì)粒（pORF-mcs,p-c）做為同種及空白對(duì)照。首先體外轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞鑒定這些質(zhì)粒在真核細(xì)胞中的產(chǎn)生CD154的能力。大腸桿菌擴(kuò)增大量制備去除內(nèi)毒素的DNA疫苗。Balb/c小鼠尾靜脈反復(fù)注射Con A誘導(dǎo)肝纖維化形成,同時(shí)給... 

【文章來源】：四川大學(xué)四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的COS一1細(xì)胞RT一PCR鑒定收集轉(zhuǎn)染p一hCD154(h)和p一meD154(m)質(zhì)粒后72h的Cos一z細(xì)胞用Tnzol試劑

四川大學(xué)博士學(xué)位論文.2.22p一hcD154減輕肝纖維化的形成為進(jìn)一步了解注射p一hcD154DNA疫苗后肝組織結(jié)構(gòu)的的變化，我們?cè)诘?次注射ConA后一周斷頸處死小鼠，取出肝組織。和p一hCD154組小鼠比較，其余3組小鼠的肝臟體積均增大，表面不光滑，可見小結(jié)節(jié)狀增生。10%中性甲醛、石蠟包埋、切片后，常規(guī)HE染色。鏡下觀察發(fā)現(xiàn)經(jīng)p一hcD154DNA疫苗治療組的小鼠的肝臟均小葉結(jié)構(gòu)基本完

四川大學(xué)博士學(xué)位論文整，肝細(xì)胞排列整齊，無明顯變性壞死，肝組織淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)較少。而p一mCD154、p一c及生理鹽水組的小鼠肝臟組織小葉破壞較明顯，結(jié)構(gòu)紊亂，肝細(xì)胞減少，有點(diǎn)狀壞死，匯管區(qū)增大，在肝間質(zhì)可看到大量的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)(如圖5)。該研究結(jié)果說明注射DNA疫苗p一hCD154組小鼠與注射p一mCD154、p一c及生理鹽水組小鼠相比較明顯減少ConA引起的肝組織內(nèi)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)及肝組織結(jié)構(gòu)的破壞，減輕了反復(fù)注射CnoA引起的肝纖維化的形成與發(fā)展。.2.23p一hCD154減少了肝組織內(nèi)膠原的形成在肝纖維化的發(fā)展過程中，HSCs的激活產(chǎn)生大量的ECM，其中主


本文編號(hào)：3088305