目的：原核表達和純化sTGF-β1RII蛋白、sIL-13Rα2蛋白，并研究該蛋白對小鼠日本血吸蟲病肝纖維化及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響。方法：利用小鼠3T3細胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，設(shè)計引物，常規(guī)PCR法擴增目的基因，構(gòu)建sTGF-β1RII、sIL-13Rα2蛋白的原核表達系統(tǒng)，在大腸桿菌中獲得融合表達，用親和層析法制備純化的sTGF-β1RII蛋白、sIL-13Rα2蛋白，Westernblotting鑒定其抗原性。BALB/C雌性小鼠（6-8周齡，體重18-22g）隨機分成8組，每組6只，除正常對照組外，其余各組均通過腹部皮膚感染日本血吸蟲尾蚴18±2條/鼠，感染后第5周起隔天腹腔注射，持續(xù)2w，具體蛋白干預(yù)種類劑量見分組：A：正常對照組；B：模型生理鹽水組（0.5ml生理鹽水/小鼠）；C：sIL-13Rα2蛋白低劑量組（50μg/小鼠）；D：sIL-13Rα2蛋白高劑量組（100μg/小鼠）；E：sTGF-β1RII蛋白低劑量組（2μg/小鼠）；F：sTGF-β1RII蛋白高劑量組（20μg/小鼠）；G：聯(lián)合干預(yù)組（sTGFβ1RII10μg/小鼠+sIL-13Rα275μg... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

小鼠sTGF-β1RII基因PCR的擴增

小鼠 sTGF-β1 RII 基因 PCR 的擴增 圖 2 小鼠 sIL-13Rα2 基因 PA 分子量； 2 PCR 產(chǎn)物 1 DNA 分子量； 2 PCR 產(chǎn)1 Amplification of murine sTGF-β1 RII Fig.2 Amplification of murinewith PCR with PCRA marker; 2 PCR product 1 DNA marker; 2 PCR pro重組質(zhì)粒 simple pMD-18T/sTGF-β1 RII、sIL-13Rα2，pET28a/sIL-13Rα2 酶切鑒定將重組質(zhì)粒經(jīng) NdeⅠ和 SalⅠ雙酶切后，1%瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果條大小與 sTGF-β1 RII、sIL-13Rα2 擴增條帶遷移率相同的電泳與預(yù)期一致，如圖 3、4、5、6 所示。bp 1 2bp 1 2

1 小鼠 sTGF-β1 RII 基因 PCR 的擴增 圖 2 小鼠 sIL-13Rα2 基因 PCNA 分子量； 2 PCR 產(chǎn)物 1 DNA 分子量； 2 PCR 產(chǎn)物g.1 Amplification of murine sTGF-β1 RII Fig.2 Amplification of murine with PCR with PCRNA marker; 2 PCR product 1 DNA marker; 2 PCR prod2 重組質(zhì)粒 simple pMD-18T/sTGF-β1 RII、sIL-13Rα2，pET28a/ssIL-13Rα2 酶切鑒定將重組質(zhì)粒經(jīng) NdeⅠ和 SalⅠ雙酶切后，1%瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯一條大小與 sTGF-β1 RII、sIL-13Rα2 擴增條帶遷移率相同的電泳條譜與預(yù)期一致，如圖 3、4、5、6 所示。bp 1 2bp 1 2


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