本文關(guān)鍵詞：單細(xì)胞篩選人源HBsAb可變區(qū)基因序列及乙肝疫苗免疫后PBMCs轉(zhuǎn)錄組分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:克隆全人源乙型肝炎病毒表面抗體可變區(qū)序列,研究機(jī)體對于乙肝疫苗的免疫應(yīng)答反應(yīng),為篩選全人源乙肝抗體、更好的預(yù)防治療慢性乙型肝炎提供基礎(chǔ)。方法:(1)20μg乙肝疫苗強(qiáng)化免疫1名乙肝表面抗體陽性的健康志愿者,7 d后,檢測其乙肝表面抗體滴度大于1000 m IU/ml,采集30 ml肝素抗凝血,采用流式細(xì)胞儀分選出CD19+/CD27+/Ig G+細(xì)胞群,挑選96個(gè)單細(xì)胞,置于20μl單細(xì)胞裂解液中,采用混合引物,單細(xì)胞RT-PCR獲得重鏈、輕鏈可變區(qū)序列,將PCR產(chǎn)物純化后克隆至p MD#174;19-T載體,進(jìn)行測序,對測序結(jié)果采用DNA Star 5.0 Meg Align和Ig BLAST進(jìn)行相似性和同源性分析。(2)分離3名志愿者接種乙肝疫苗前后外周血單個(gè)核細(xì)胞,提取總RNA,檢測質(zhì)量合格后進(jìn)行基因表達(dá)譜分析,對測序原始結(jié)果過濾得到clean數(shù)據(jù),隨后進(jìn)行差異表達(dá)基因分析、GO富集分析及KEGG信號(hào)通路分析。結(jié)果:(1)成功篩選出12個(gè)陽性抗體分泌細(xì)胞,12個(gè)陽性細(xì)胞的輕鏈和重鏈PCR產(chǎn)物序列具有很高的同源性。(2)得到829個(gè)差異表達(dá)基因,對差異基因進(jìn)行GO富集分析,發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)基因主要參與的生物過程是脂肪酰基Co A還原酶(醇形成)活性、鐵離子轉(zhuǎn)運(yùn)、蛋白復(fù)合物結(jié)合、二價(jià)鐵離子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)活性等;KEGG信號(hào)通路分析顯示,差異表達(dá)基因主要參與Toll樣受體信號(hào)通路、腫瘤壞死因子信號(hào)通路、細(xì)胞因子相互作用受體、NF-Kappa B信號(hào)通路等。結(jié)論:(1)擴(kuò)增得到了可能的特異性HBs Ab重鏈、輕鏈可變區(qū)基因序列;(2)初步得到了可能參與乙肝疫苗免疫應(yīng)答過程的重要基因和調(diào)控通路。
【關(guān)鍵詞】：單細(xì)胞 單克隆抗體 乙型肝炎病毒表面抗體 外周血單個(gè)核細(xì)胞 轉(zhuǎn)錄組分析
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R512.62
【目錄】：

• 主要英文縮略語索引6-7
• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 第1章 前言12-24
• 1.1 研究背景及其理論與實(shí)際意義12-14
• 1.2 抗體的結(jié)構(gòu)和功能14-18
• 1.3 單克隆抗體的研究進(jìn)展概括18-22
• 1.4 數(shù)字基因表達(dá)譜技術(shù)概括22
• 1.5 本研究課題的意義及主要研究內(nèi)容22-23
• 1.6 技術(shù)路線23-24
• 第2章 單細(xì)胞篩選全人源HBsAb可變區(qū)基因序列24-38
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料24-27
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法27-33
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-36
• 2.4 本章小結(jié)36-38
• 第3章 乙肝疫苗免疫后PBMCs轉(zhuǎn)錄組研究38-51
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料38-39
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法39-41
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-50
• 3.4 本章小結(jié)50-51
• 討論51-54
• 結(jié)論54-56
• 參考文獻(xiàn)56-62
• 文獻(xiàn)綜述62-68
• 參考文獻(xiàn)65-68
• 成果目錄68-70
• 致謝70

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