目的通過免疫組化和Western blot等方法,觀察由乙肝病毒X蛋白（HBX）引起的HepG2細胞內(nèi)Wnt誘導(dǎo)的分泌型蛋白1（以下簡稱為WISP-1）的變化,探索乙肝病毒導(dǎo)致肝癌的新的機制。方法（1）分別收集肝癌,癌旁,及正常肝組織標本。采用免疫組化的方法檢測WISP-1在這些組織內(nèi)的表達及差異。（2）采用脂質(zhì)體Lipofectamine2000為媒介,分別將pc-DNA3.1（+）和pc-DNA3.1（+）-HBX兩種質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2細胞,經(jīng)過G418長期篩選,得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞株G0和Gx。（3）采用PCR技術(shù)檢測G0和Gx中WISP-1mRNA的表達水平及差異。（4）采用Western blot從蛋白水平檢測G0和Gx中WISP-1的表達水平及差異。結(jié)果（1）免疫組化結(jié)果顯示,肝癌組織中WISP-1的陽性表達率高于癌旁組織及正常肝組織,結(jié)果經(jīng)X2檢驗差異有統(tǒng)計學(xué)意義。提示W(wǎng)ISP-1在肝癌組織中高表達。（2）經(jīng)過G418穩(wěn)定篩選一月后,成功建立能夠穩(wěn)定分泌HBX蛋白的Gx細胞系及相應(yīng)的空轉(zhuǎn)細胞系G0。（3）Western blot鑒定Gx和G0轉(zhuǎn)染成功。且Gx細胞能夠表達HB... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同組織中WISP-1蛋白的表達（SP,×400）

Westernblot鑒定Gx與G0細胞內(nèi)HBX的表達b-actin

PCR反應(yīng)檢測Gx和G0細胞中WISP-1mRNA的表達M:DNAMarker;G:GAPDH;W:WISP-1;

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3076678