目的:1.分析小鼠肝臟缺血再灌注（Ischemia and reperfusion,I/R）動物模型中,肝臟組織內(nèi)mi R-24-3p和STING表達水平的相關(guān)性;2.觀察差異表達的mi R-24-3p對I/R體內(nèi)模型中STING和IRF3相關(guān)蛋白表達、炎性因子分泌、肝臟組織病理學(xué)改變和肝功能損傷程度的影響;3.探討mi R-24-3p參與STING-IRF3信號通路的調(diào)控作用以及影響肝臟缺血再灌注損傷（Ischemia and reperfusion injury,IRI）的分子機制。方法:分別采用C57BL/6J小鼠和RAW264.7細胞（枯否細胞（Kupffer cells,KCs）替代細胞株）建立肝I/R體內(nèi)外模型。肝臟組織HE染色評估肝損傷,微板法檢測造模后血清AST和ALT的水平,ELISA檢測血清炎癥因子TNF-α、IL-6的水平,TUNEL染色評估肝臟組織細胞凋亡情況,Target Scan數(shù)據(jù)庫預(yù)測分析STING與mi R-24-3p的潛在結(jié)合位點,并采用熒光素酶報告基因?qū)嶒烌炞CSTING是否為mi R-24-3p的靶基因,q RT-PCR檢測肝組織mi R-24-3... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

小鼠肝臟組織損傷情況

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文25圖1-2.小鼠血清中AST和ALT的表達Figure1-2.serumlevelofASTandALTinmiceA:I1R9小鼠血清中AST、ALT的表達水平B:不同再灌注時間小鼠血清AST表達水平C:不同再灌注時間小鼠血清ALT表達水平A:serumlevelofASTandALTinI1R9mice.B:serumlevelofASTinmicewithdifferentreperfusiontime.C:serumlevelofALTinmicewithdifferentreperfusiontime.n=6;**p<0.01,***p<0.001vs.sham2.3不同再灌注時間對小鼠肝組織中miR-24-3p與STING轉(zhuǎn)錄水平表達的影響及其兩者表達的相關(guān)性分析為驗證不同再灌注時間對小鼠肝臟組織miR-24-3p與STING表達的影響，并進一步分析兩者表達的相關(guān)性，我們用qRT-PCR檢測不同再灌注時間小鼠肝臟組織中miR-24-3p與STING的表達。結(jié)果提示，與sham組相比，隨著再灌注的時間延長，miR-24-3p的表達逐漸降低，在I1R9達到相對低谷（P<0.01），差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(圖1-3A)，而STING的表達逐漸增加，在I1R9達到相對高峰（P<0.001）差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（圖1-3B）。另通過Pearson相關(guān)性分析，得出結(jié)果，小鼠肝臟組織中miR-24-3p與STING的表達呈負相關(guān)，差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.0001,r=-0.8734）(圖1-3C)。

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文26圖1-3.小鼠肝臟組織中miR-24-3p的表達及與STING表達的相關(guān)性Figure1-3.ExpressionofmiR-24-3panditscorrelationwithexpressionofSTINGinlivertissueofmice.A:小鼠肝組織中miR-24-3p的表達水平B:小鼠肝組織中STING的表達水平C:小鼠肝組織中miR-24-3p與STING表達ROC分析A:ExpressionofmiR-24-3pinlivertissueofmice.B:ExpressionofSTINGinlivertissueofmice.C:ROCanalyzeofmiR-24-3pandSTINGinlivertissueofmice.n=6;ns,p>0.05,*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001vs.sham3討論肝臟IRI是引起移植物肝損傷、免疫排斥反應(yīng)甚至是術(shù)后移植物失功的主要原因之一[1]。其中肝IRI引起的肝實質(zhì)細胞凋亡和逐級放大的炎癥級聯(lián)反應(yīng)可誘發(fā)肝功能損傷和增加移植物急慢性排斥反應(yīng)的發(fā)生風(fēng)險[2]。因此減少肝I/R介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，防止肝細胞凋亡成為治療肝IRI的重中之重。MicroRNA是由20-24個核苷酸構(gòu)成的一類內(nèi)源性非編碼RNA，此類RNA并不直接參與基因編碼而是通過結(jié)合性抑制作用（分子海綿），沉默，降解等方式

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3051948