目的:1.分析小鼠肝臟缺血再灌注（Ischemia and reperfusion,I/R）動(dòng)物模型中,肝臟組織內(nèi)mi R-24-3p和STING表達(dá)水平的相關(guān)性;2.觀察差異表達(dá)的mi R-24-3p對(duì)I/R體內(nèi)模型中STING和IRF3相關(guān)蛋白表達(dá)、炎性因子分泌、肝臟組織病理學(xué)改變和肝功能損傷程度的影響;3.探討mi R-24-3p參與STING-IRF3信號(hào)通路的調(diào)控作用以及影響肝臟缺血再灌注損傷（Ischemia and reperfusion injury,IRI）的分子機(jī)制。方法:分別采用C57BL/6J小鼠和RAW264.7細(xì)胞（枯否細(xì)胞（Kupffer cells,KCs）替代細(xì)胞株）建立肝I/R體內(nèi)外模型。肝臟組織HE染色評(píng)估肝損傷,微板法檢測(cè)造模后血清AST和ALT的水平,ELISA檢測(cè)血清炎癥因子TNF-α、IL-6的水平,TUNEL染色評(píng)估肝臟組織細(xì)胞凋亡情況,Target Scan數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)分析STING與mi R-24-3p的潛在結(jié)合位點(diǎn),并采用熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證STING是否為mi R-24-3p的靶基因,q RT-PCR檢測(cè)肝組織mi R-24-3... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：90 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

小鼠肝臟組織損傷情況

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文25圖1-2.小鼠血清中AST和ALT的表達(dá)Figure1-2.serumlevelofASTandALTinmiceA:I1R9小鼠血清中AST、ALT的表達(dá)水平B:不同再灌注時(shí)間小鼠血清AST表達(dá)水平C:不同再灌注時(shí)間小鼠血清ALT表達(dá)水平A:serumlevelofASTandALTinI1R9mice.B:serumlevelofASTinmicewithdifferentreperfusiontime.C:serumlevelofALTinmicewithdifferentreperfusiontime.n=6;**p<0.01,***p<0.001vs.sham2.3不同再灌注時(shí)間對(duì)小鼠肝組織中miR-24-3p與STING轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)的影響及其兩者表達(dá)的相關(guān)性分析為驗(yàn)證不同再灌注時(shí)間對(duì)小鼠肝臟組織miR-24-3p與STING表達(dá)的影響，并進(jìn)一步分析兩者表達(dá)的相關(guān)性，我們用qRT-PCR檢測(cè)不同再灌注時(shí)間小鼠肝臟組織中miR-24-3p與STING的表達(dá)。結(jié)果提示，與sham組相比，隨著再灌注的時(shí)間延長(zhǎng)，miR-24-3p的表達(dá)逐漸降低，在I1R9達(dá)到相對(duì)低谷（P<0.01），差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖1-3A)，而STING的表達(dá)逐漸增加，在I1R9達(dá)到相對(duì)高峰（P<0.001）差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖1-3B）。另通過(guò)Pearson相關(guān)性分析，得出結(jié)果，小鼠肝臟組織中miR-24-3p與STING的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.0001,r=-0.8734）(圖1-3C)。

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文26圖1-3.小鼠肝臟組織中miR-24-3p的表達(dá)及與STING表達(dá)的相關(guān)性Figure1-3.ExpressionofmiR-24-3panditscorrelationwithexpressionofSTINGinlivertissueofmice.A:小鼠肝組織中miR-24-3p的表達(dá)水平B:小鼠肝組織中STING的表達(dá)水平C:小鼠肝組織中miR-24-3p與STING表達(dá)ROC分析A:ExpressionofmiR-24-3pinlivertissueofmice.B:ExpressionofSTINGinlivertissueofmice.C:ROCanalyzeofmiR-24-3pandSTINGinlivertissueofmice.n=6;ns,p>0.05,*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001vs.sham3討論肝臟IRI是引起移植物肝損傷、免疫排斥反應(yīng)甚至是術(shù)后移植物失功的主要原因之一[1]。其中肝IRI引起的肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞凋亡和逐級(jí)放大的炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)可誘發(fā)肝功能損傷和增加移植物急慢性排斥反應(yīng)的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[2]。因此減少肝I/R介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，防止肝細(xì)胞凋亡成為治療肝IRI的重中之重。MicroRNA是由20-24個(gè)核苷酸構(gòu)成的一類內(nèi)源性非編碼RNA，此類RNA并不直接參與基因編碼而是通過(guò)結(jié)合性抑制作用（分子海綿），沉默，降解等方式

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miR-148a通過(guò)抑制Ca2+/鈣調(diào)蛋白依賴激酶Ⅱα（CaMKⅡα）減少小鼠肝缺血再灌注損傷[J]. 鄭道峰,何雕,盧修賢,孫超,羅清波,吳忠均.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2016(09)
[2]Predictive factors of short term outcome after liver transplantation: A review[J]. Giuliano Bolondi,Federico Mocchegiani,Roberto Montalti,Daniele Nicolini,Marco Vivarelli,Lesley De Pietri.  World Journal of Gastroenterology. 2016(26)
[3]Post reperfusion syndrome during liver transplantation:From pathophysiology to therapy and preventive strategies[J]. Antonio Siniscalchi,Lorenzo Gamberini,Cristiana Laici,Tommaso Bardi,Giorgio Ercolani,Laura Lorenzini,Stefano Faenza.  World Journal of Gastroenterology. 2016(04)
[4]UⅡ/UT系統(tǒng)對(duì)LPS刺激枯否細(xì)胞固有免疫炎癥信號(hào)通路TLR4-IRF3的影響[J]. 涂文娟,汪小庭,劉亮明,朱彤,梁冬雨,楊志文,高得勇.  中國(guó)免疫學(xué)雜志. 2014(10)
[5]Molecular mechanisms of liver ischemia reperfusion injury:Insights from transgenic knockout models[J]. Gourab Datta,Barry J Fuller,Brian R Davidson.  World Journal of Gastroenterology. 2013(11)
[6]新生小鼠缺血缺氧性腦損傷中TLR4-TRIF信號(hào)通路的表達(dá)[J]. 黃曉雷,崔桂云.  中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志. 2012(09)
[7]Nuclear factor-KB decoy oligodeoxynucleotides attenuates ischemia/reperfusion injury in rat liver graft[J]. Ming-Qing Xu, Mao-Lin Yan, Ming-Man Zhang, Lu-Nan Yan, Department of General Surgery, West China Hospital, Sichuan University, Chengdu 610041, Sichuan Province, China Xiu-Rong Shuai, Department of General Surgery, Sichuan Provincial Hospital, Chinese People’s Armed Police Forces, Leshan 640014, Sichuan Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2005(44)
[8]Toll-like receptor 4 involvement in hepatic ischemia/reperfusion injury in mice[J]. Ori Rotstein.  Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2004(02)



本文編號(hào)：3051948