第一部分小鼠原代肝細(xì)胞的分離與培養(yǎng)目的：肝臟是脂質(zhì)代謝的重要器官，建立小鼠原代肝細(xì)胞的體外培養(yǎng)技術(shù)，用于后續(xù)脂代謝研究。方法：采用IV型膠原酶原位二步灌流法分離小鼠原代肝細(xì)胞。用臺盼藍(lán)試劑對新鮮分離的細(xì)胞進(jìn)行染色以檢測細(xì)胞活率，并在不同時(shí)間點(diǎn)觀察細(xì)胞貼壁情況和培養(yǎng)基中白蛋白的分泌情況。通過對肝細(xì)胞白蛋白進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色和糖原染色，完成對肝細(xì)胞的鑒定。結(jié)果：臺盼藍(lán)結(jié)果顯示:本法所制得的小鼠原代肝細(xì)胞活率最高可達(dá)90%。剛分離的肝細(xì)胞大多數(shù)呈單個(gè)球形，具有一定立體感。4小時(shí)后肝細(xì)胞已基本貼壁，可見肝細(xì)胞的典型的雙核結(jié)構(gòu)，胞質(zhì)呈扁平狀。1天后雙核更加明顯，核仁清晰可見，胞質(zhì)貼壁更加扁平，2天后細(xì)胞成多邊形，并維持此形態(tài)數(shù)天。免疫細(xì)胞化學(xué)染色和糖原染色顯示，所培養(yǎng)細(xì)胞基本均可合成白蛋白和糖原，并且一周以內(nèi)都可以在培養(yǎng)基中檢測到細(xì)胞分泌的白蛋白。結(jié)論：小鼠原代肝細(xì)胞的分離與培養(yǎng)技術(shù)建立成功，在一周內(nèi)具有較好的形態(tài)和功能，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。第二部分炎癥因子對小鼠原代肝細(xì)胞脂質(zhì)積聚及損傷的影響目的：近年來的研究發(fā)現(xiàn)，慢性系統(tǒng)性炎癥在代謝性疾病的發(fā)生和發(fā)展中有十分重要的作用。我們通過建立原代肝細(xì)胞分... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

通過臺盼藍(lán)染色染色觀察細(xì)胞活率

g. 5 d h. 6 d i. 7 d圖 1.2 在不同的時(shí)間點(diǎn)觀察肝細(xì)胞的貼壁情況Figure 1.2 The attachment of primary hepatocytes was observed at different time points. ×2002.3 小鼠原代肝細(xì)胞的鑒定結(jié)果2.3.1 小鼠原代肝細(xì)胞免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果白蛋白由肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成。對白蛋白進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色后發(fā)現(xiàn)，所培養(yǎng)的細(xì)胞胞漿中均含有有大量棕黃色顆粒（見圖 1.3.1 a），并且空白對照無黃染顆粒（見圖 1.3.1 b），說明本法培養(yǎng)所得細(xì)胞基本均為肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞,小鼠原代肝細(xì)胞分離與培養(yǎng)技術(shù)建立成功。

g. 5 d h. 6 d i. 7 d圖 1.2 在不同的時(shí)間點(diǎn)觀察肝細(xì)胞的貼壁情況1.2 The attachment of primary hepatocytes was observed at different time po鼠原代肝細(xì)胞的鑒定結(jié)果鼠原代肝細(xì)胞免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果蛋白由肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成。對白蛋白進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色后發(fā)現(xiàn)，胞漿中均含有有大量棕黃色顆粒（見圖 1.3.1 a），并且空白對照無圖 1.3.1 b），說明本法培養(yǎng)所得細(xì)胞基本均為肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞,小鼠原代培養(yǎng)技術(shù)建立成功。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]非酒精性脂肪肝發(fā)病機(jī)制——“二次打擊”學(xué)說研究進(jìn)展[J]. 董姝,劉平,孫明瑜.  臨床肝膽病雜志. 2012(07)
[2]Role of cytokines and chemokines in non-alcoholic fatty liver disease[J]. Vincent Braunersreuther,Giorgio Luciano Viviani,Franois Mach,Fabrizio Montecucco.  World Journal of Gastroenterology. 2012(08)



本文編號：3041058