本文關(guān)鍵詞：Th17通路在酒精性肝病發(fā)病機制中的作用及白藜蘆醇對其治療作用機制的初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：初步探討Th17通路在急、慢性酒精性肝病中的作用及白藜蘆醇(Resveratrol, Res)對其影響機制的研究。 方法：本實驗采取隨機-對照的研究方法。實驗分為慢性組及急性組兩部分，均按照隨機數(shù)字表將SPF級雄性C57BL/6小鼠隨機分組。(1)①慢性組50只C57BL/6小鼠，自由飲服Lieber-DeCarli對照液體飼料5天后，隨機分為Control+橄欖油(olive oil)組、Control+四氯化碳(carbontetrachloride, CCL4)組、Alcohol+olive oil組、Alcohol+CCL4+羧甲基纖維素鈉(Carboxymethylcellulose sodium, CMC)組、Alcohol+CCL4+Res組，每組10只。分別給予Lieber-DeCarli液體對照飼料、酒精飼料（濃度5%）飼喂8周，第8周開始Alcohol+CCL4+CMC組、Alcohol+CCL4+Res組分別給予CMC、Res（45mg/kg/d）灌胃，9周開始予Control+CCL4組和Alcohol+CCL4+CMC組、Alcohol+CCL4+Res組小鼠2.5%CCL44ml/kg腹腔注射(2次/周)，同時予Control+olive oil組和Alcohol+olive oil組橄欖油4ml/kg腹腔注射(2次/周)，第10周處死小鼠。②慢性組的研究顯示在酒精性脂肪肝和纖維化組里Th17變化趨勢一致，為了研究急性ALD中Th17變化情況，設(shè)計了急性模型：C57BL/6小鼠40只Control組、Alcohol組、Alcohol+CMC組、Alcohol+Res組，每組各10只，分別予Lieber-DeCarli液體對照飼料及酒精飼料(5%)自由飲服10天，第11天分別給予麥芽糖、酒精5g/kg灌胃，Alcohol+CMC組、Alcohol+Res組分別予CMC、Res45mg/kg預(yù)灌胃，10小時后處死小鼠。(2)每天觀察小鼠精神狀態(tài)，毛發(fā)光澤度，進食、行為情況等，每周測量小鼠體重。(3)觀察各組小鼠肝臟組織大體形態(tài)變化，記錄肝臟重量，計算比較肝重指數(shù)變化。(4)應(yīng)用蘇木素伊紅(hematoxylin and eosin, HE)染色和苦味酸天狼猩紅染色觀察肝臟組織病理組織學(xué)改變。(5)檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase, ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartateaminotransferase, AST)及甘油三酯(Triglyceride, TG)的變化情況。(6)分離肝、脾組織內(nèi)淋巴細胞，行流式細胞學(xué)檢查，了解其表面CD4~+CD29~+、CD4~+CD49~+表達情況。(7)采用實時熒光定量PCR(Real-time fluorescentquantitation PCR, Real-time qPCR)方法檢測檢測肝組織中IL-6、TGF-β、α5β1、IL-17、RORγt、STAT3、Socs3、IRF4的表達情況及白藜蘆醇對上述指標的影響。 結(jié)果：1慢性模型：與Control+olive oil組相比，Control+CCL4組血清ALT、AST和TG無改變，Alcohol+olive oil組ALT、AST和TG升高(P0.05)；與Alcohol+olive oil組相比，Alcohol+CCL4+CMC組ALT、AST及TG無明顯變化；與Alcohol+CCL4+CMC相比，Alcohol+CCL4+Res組均明顯下降(P0.05)。急性模型：與Control組相比，Alcohol組ALT、AST及TG均顯著升高(P0.05)；Alcohol+CMC組與Alcohol組比較無差異；Alcohol+Res組ALT、AST及TG表達無明顯變化。2HE染色、天狼星紅染色顯示：慢性組Alcohol+olive oil組、Alcohol+CCL4+CMC組分別形成酒精性肝炎、酒精性肝纖維化；急性組形成急性酒精性肝炎，模型建立成功。3流式細胞學(xué)檢測顯示：肝臟：與Control+olive oil組比較，Control+CCL4組CD4~+CD29~+、CD4~+CD49~+均無明顯差異，Alcohol+olive oil組CD4~+CD29~+升高(P0.05)，CD4~+CD49~+無明顯改變；與Alcohol+olive oil相比，Alcohol+CCL4+CMC組CD4~+CD29~+顯著升高，有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)，與Alcohol+CCL4+CMC組相比， Alcohol+CCL4+Res組CD4~+CD29~+顯著下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)，CD4~+CD49~+無明顯改變；脾臟：CD4~+CD29~+、CD4~+CD49~+在Control+olive oil、Control+CCL4、Alcohol+olive oil、Alcohol+CCL4+CMC、Alcohol+CCL4+Res組均無明顯變化。4q-PCR：慢性模型：與Control+olive oil組相比，Control+CCL4組IL-17、TGF-β、IL-6、α5β1、RORγt、STAT3、IRF4、Socs3改變不明顯，無統(tǒng)計學(xué)意義；Alcohol+olive oil組IL-17表達升高，有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)，TGF-β、IL-6、α5β1、RORγt、STAT3、IRF4、Socs3無明顯變化；與Alcohol+olive oil組相比，Alcohol+CCL4+CMC組IL-17、TGF-β、α5β1、STAT3、IRF4、Socs3均明顯升高(P0.05)，差異顯著，IL-6、RORγt無明顯變化；與Alcohol+CCL4+CMC相比，Alcohol+CCL4+Res組TGF-β、α5β1、IL-17、STAT3顯著降低(P0.05)，IL-6、RORγt、IRF4、Socs3無明顯變化。急性模型：與Control組比較，Alcohol、Alcohol+CMC組TGF-β、IRF4表達升高(P0.05)，TGF-β、IL-6、RORγt、STAT3、Socs3無明顯變化，與Alcohol+CMC組相比，Alcohol+Res組TGF-β、IRF4顯著下降(P0.05)。 結(jié)論：1通過長期Lieber-DeCarli液體酒精飼料飼喂及聯(lián)合小劑量四氯化碳腹腔注射分別建立慢性酒精性肝炎、肝纖維化模型；短期液體酒精飼料飼喂+酒精灌胃建立急性酒精性肝炎模型。2肝內(nèi)淋巴細胞表面CD4~+CD29~+表達與Th17浸潤及促纖維化密切相關(guān)。3Th17通路可能在ALD進展中發(fā)揮重要作用，與急性酒精性肝病關(guān)系不明顯。4TGF-β可能在酒精所致急性炎癥反應(yīng)、肝纖維化形成中均發(fā)揮重要作用。5α5β1可能在酒精性肝纖維化形成中發(fā)揮重要作用。6在ALD中，IL-17表達可能受STAT3、Socs3調(diào)節(jié)，但Socs3具體作用機制尚不明確。7Res可能通過下調(diào)肝內(nèi)淋巴細胞CD29及組織STAT3表達抑制Th17通路發(fā)揮抗纖維化作用。8Res可能通過抑制TGF-β表達在急、慢性酒精性肝病中發(fā)揮重要作用。9Res可能通過下調(diào)α5β1發(fā)揮抗纖維化作用。10Res在酒精性肝病的不同階段對IRF4影響不同，提示其干預(yù)機制復(fù)雜，需進一步深入研究。
【關(guān)鍵詞】：酒精 脂肪肝 肝纖維化 免疫反應(yīng) IL-17 白藜蘆醇
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R575.5
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-12
• 前言12-16
• 材料與方法16-23
• 結(jié)果23-29
• 附圖29-39
• 附表39-45
• 討論45-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻58-62
• 綜述 Th17 細胞與肝臟疾病研究進展62-69
• 參考文獻66-69
• 致謝69-70
• 個人簡歷70

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 湯艷麗;邱德凱;馬雄;;Th17細胞與肝細胞脂肪變性的相互作用初探[J];肝臟;2010年02期

  本文關(guān)鍵詞：Th17通路在酒精性肝病發(fā)病機制中的作用及白藜蘆醇對其治療作用機制的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：303840