目的探討RNA干擾下調(diào)第10號染色體缺失的磷酸酶張力蛋白同源物基因（phosphatase and tensin homology deleted on chromosome Ten,PTEN）表達(dá)對體外培養(yǎng)的活化肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cells,HSC）微管及微絲結(jié)合蛋白皮層肌動蛋白結(jié)合蛋白（cortical actin-binding protein,cortactin）和細(xì)絲蛋白A（filamin A）的影響。方法通過反復(fù)感染293T細(xì)胞,擴(kuò)增攜帶靶向PTEN的RNA干擾序列[短發(fā)夾RNA（short hairpin RNA,sh RNA）]并表達(dá)綠色熒光（green fluorescent protein,GFP）的重組腺病毒（Ad-sh RNA/PTEN）及只表達(dá)GFP的對照空病毒（Ad-GFP）;體外培養(yǎng)活化大鼠肝星狀細(xì)胞系HSC-T6,將腺病毒Ad-sh RNA/PTEN及空病毒Ad-GFP轉(zhuǎn)染HSC-T6,應(yīng)用實時熒光定量PCR及Western blot技術(shù)檢測HSC的PTEN m RNA及蛋白表達(dá);采用免疫熒光法并利用激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)檢... 

【文章來源】：華北理工大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
引言
第1章 實驗研究
    1.1 實驗材料
        1.1.1 實驗細(xì)胞
        1.1.2 重組腺病毒
        1.1.3 主要試劑
        1.1.4 主要試劑的配制
        1.1.5 主要實驗儀器
    1.2 實驗方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2 腺病毒的擴(kuò)增及滴度的測定
        1.2.3 腺病毒轉(zhuǎn)染體外活化HSC
        1.2.4 Westernblot實驗技術(shù)檢測HSC的PTEN蛋白表達(dá)
        1.2.5 實時熒光定量PCR技術(shù)檢測HSC的PTENmRNA表達(dá)
        1.2.6 免疫熒光技術(shù)檢測活化HSC的α-tubulin、γ-tubulin、coractin、filaminA表達(dá)
        1.2.7 統(tǒng)計學(xué)方法
    1.3 實驗結(jié)果
        1.3.1 腺病毒擴(kuò)增
        1.3.2 腺病毒滴度
        1.3.3 腺病毒轉(zhuǎn)染HSC的轉(zhuǎn)染效率
        1.3.4 靶向PTEN的shRNA下調(diào)體外活化HSC的PTEN表達(dá)
        1.3.5 PTEN表達(dá)下調(diào)對體外活化肝星狀細(xì)胞α-tubulin表達(dá)的影響
        1.3.6 PTEN表達(dá)下調(diào)對體外活化肝星狀細(xì)胞γ-tubulin表達(dá)的影響
        1.3.7 PTEN表達(dá)下調(diào)對體外活化肝星狀細(xì)胞cortactin表達(dá)的影響
        1.3.8 PTEN表達(dá)下調(diào)對體外活化肝星狀細(xì)胞filaminA表達(dá)的影響
    1.4 討論
        1.4.1 活化HSC遷移與肝纖維化
        1.4.2 PTEN與活化HSC遷移
        1.4.3 細(xì)胞遷移與細(xì)胞骨架
        1.4.4 PTEN表達(dá)下調(diào)對體外活化HSC微管的影響
        1.4.5 PTEN表達(dá)下調(diào)對體外活化HSC微絲結(jié)合蛋白cortactin及filaminA的影響
    1.5 本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第2章 綜述 細(xì)胞骨架及細(xì)胞外基質(zhì)在肝纖維化過程中的作用研究進(jìn)展
    2.1 細(xì)胞骨架的組成及其功能
    2.2 細(xì)胞骨架與肝纖維化
    2.3 ECM的組成及其功能
    2.4 ECM在肝纖維化進(jìn)程中的變化及作用
        2.4.1 ECM的主要成分改變及其在肝纖維化中的作用
        2.4.2 ECM的結(jié)構(gòu)改變及其在肝纖維化中的作用
    2.5 結(jié)語
    參考文獻(xiàn)
結(jié)論
致謝
導(dǎo)師簡介
作者簡介
學(xué)位論文數(shù)據(jù)集


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3038073