目的運(yùn)用流體力學(xué)基因轉(zhuǎn)染方法,將已克隆的Pim-3基因轉(zhuǎn)染進(jìn)入大鼠的肝臟內(nèi)并用LPS/D-GalN誘導(dǎo)急性肝損傷,觀察轉(zhuǎn)染后Bcl-2、p53等基因的表達(dá)變化及對(duì)肝細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。探討Pim-3基因?qū)毙愿螕p傷肝細(xì)胞凋亡的抑制作用及其機(jī)制。方法32只大鼠隨機(jī)分成四組（8只/組）。A組為正常對(duì)照組,B、C和D組分別以林格氏液、空載質(zhì)粒和Pim-3基因重組質(zhì)粒溶液預(yù)處理大鼠,1天后給予LPS/D-GalN腹腔內(nèi)注射誘導(dǎo)急性肝損傷,8h后或?yàn)l死期處死大鼠,采集肝組織標(biāo)本。利用熒光顯微鏡觀測(cè)綠色熒光蛋白（GFP）表達(dá)水平;TUNEL分析檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況,并用底物顯色法檢測(cè)Caspase-3活性;肝組織基因表達(dá)通過RT-PCR和Western blot進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果1.固定后的肝組織冰凍切片在熒光顯微鏡下觀察,C組和D組肝組織有大量GFP表達(dá),而A組和B組則無GFP表達(dá),表明質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染進(jìn)入肝組織內(nèi),并在肝組織內(nèi)出現(xiàn)高表達(dá)。2.肝組織TUNEL分析各組大鼠肝細(xì)胞凋亡指數(shù)（AI）,分別為:A組3.1%±1.7%、B組83.1%±12.6%、C組79.9%±13.4%和D組10.2%±6.9%,所有... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

各組大鼠肝組織GFP表達(dá)情況（×200）

7008009001000in.mgm)圖 3.3 各組大鼠肝組織切片細(xì)胞凋亡 TUNEL 分析（×200）A：正常對(duì)照組 B：林格氏液處理組 C：空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組 D：Pim-3 基因轉(zhuǎn)染組3.4 肝組織 Caspase-3 活性分析結(jié)果能過熒光分光光度計(jì)的檢測(cè)（圖 3.4），各組大鼠肝組織 Caspase-3 的別為：A 組 107.1±75.0 pmol/min.mg、B 組 728.8±185.8 pmol/min.mg、43.5±242.9pmol/min.mg 和 D 組 250.1±84.3 pmol/min.mg。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，PS/D-GalN 攻擊大鼠 Caspase-3 活性明顯高于正常對(duì)照組，B 組和 C 組顯 D 組（P<0.01），而 B 組和 C 組間差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。這毒素攻擊誘導(dǎo)了大鼠肝組織 Caspase-3 的活性，而 Pim-3 基因的轉(zhuǎn)染則抑活性。

3.6 肝組織凋亡誘導(dǎo)基因 p53 的表各組大鼠肝組織 p53 mRNA 的0.57±0.38、B 組 1.17±0.71、C 組 1.23±D 組 p53 表達(dá)水平低于 A 組、B 和 C 組（但 B 和 C 組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>組織 p53 高表達(dá)，Pim-3 基因轉(zhuǎn)染則抑M A B C Ds

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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