目的建立小鼠小腸類器官培養(yǎng)系統(tǒng),探討脫氧膽酸（DCA）對小腸類器官生長的影響。方法取8周齡C57BL/6小鼠末段回腸,EDTA法分離,收集隱窩后Matrigel基質膠包埋,于完整培養(yǎng)基中培養(yǎng)。以無水酒精和正常小腸類器官為對照,予100μmol/L高濃度DCA短期干預2 d,10μmol/L DCA長期干預10 d,并去除DCA后再長期培養(yǎng)10 d,觀察類器官的生長和出芽情況。結果高濃度DCA短期干預類器官,腸道類器官球形結構形成率、腸道類器官結構[形成率、類器官演化率和出芽數(shù)量均明顯減少（P<0.05）,短期去除DCA四項指標仍減少（P<0.05）,長期去除DCA后僅腸道類器官結構形成率和出芽數(shù)量減少（P<0.05）。低濃度DCA短期干預腸道類器官結構形成率和出芽數(shù)量減�。≒<0.05）,長期干預腸道類器官球形結構形成率、腸道類器官結構形成率和出芽數(shù)量明顯減少（P<0.05）,去除DCA后僅腸道類器官結構形成率和出芽數(shù)量低于正常（P<0.05）。結論本研究成功建立小鼠小腸類器官培養(yǎng)技術,DCA損傷小腸類器官并影響其生長,長期去除DCA后可部分恢復其功... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學學報. 2017,37(01)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

短期較高濃度DCA對小腸類器官生長的影響

4G）。去除DCA培養(yǎng)6d時傳代，7d時腸道類器官球形結構形成率（[86.16±7.47）%vs（93.05±0.86）%和（93.52±1.42）%]以及10d時類器官演化率（[76.70±6.41）%vs（83.71±2.13）%和（85.68±5.05）%]基本和無水酒精、正常類器官無差異（P>0.05），10d時腸道類器官結構形成率仍低于無水酒精和正常類器官對照組（[65.78±1.62）%vs（77.89±1.65）%]和（[80.08±3.66）%，P<0.05]，10d后類器官基本恢復到正常狀態(tài)（圖4J），但出芽數(shù)量仍少于無水酒精和正常類器官對照組（6.70±1.53vs8.50±1.53和8.40±1.85，P<0.05）（圖3）。3討論Fuller等［11］在2012年提出利用腸道類器官球形結構形成率、腸道類器官結構形成率、類器官演化率和每個類器官出芽個數(shù)來評判類器官的生長情況。腸道類器官球形結構形成率和腸道類器官結構形成率可代表類器官的存活情況，從腸道類器官球形結構到腸道類器官結構的演化率可以明確ISCs的分化能力。由于每個出芽都有能力單獨生長形成新的腸道類器官結構，出芽個數(shù)可以代表類器官的生長能力和分化能力。故而，本研究擬以此建立高脂飲食對腸道類器官損傷的模型，應用腸道類器官球形結構形成率、腸道類器官結構形成率、類器官演化率和出芽數(shù)來評估DCA對于小鼠回腸末端類器官的生長的影響。近數(shù)十年來隨著我國經濟的發(fā)展，人群飲食結構西方化，肥胖、炎癥性腸并糖尿病等在我國發(fā)病率越來越高。高脂飲食可誘導腸腔內具有細胞毒性的次級膽汁酸——脫氧膽酸（DCA）和石膽酸的增加［12］。以往研究僅針對100μmol/L以上高濃度的DCA對于腸道上皮細胞和潘氏細胞的損傷作用進行研究，本研究首先采用高濃度100μmol/LDCA2d短期和低濃度10μmol/LDCA10d長期干預小腸類器官，并去除DCA影響長期培養(yǎng)10d后觀?

哪諢?境［20］。而短期暴飲暴食對應我們研究中的高濃度DCA短期干預類器官模型，長期高脂飲食對應我們研究中低濃度長期DCA干預模型，我們推測短期大量的高脂飲食對于腸道損傷嚴重，即使恢復低脂飲食一段時間其損傷也無法恢復，而長期少量的高脂飲食也會導致腸道損傷，需要較長時間的低脂飲食才能部分ABCDEFGHIDCA100μmol/LControl(dehydratedalcohol)Normal2aysdfteraCADemovarl01aysd2aysd100μm100μm100μm100μm100μm100μm100μm100μm100μmJKL100μm100μm100μm01aysdfteraCADemovarl圖4長期較低濃度DCA對小腸類器官生長的影響Fig.4Effectoflong-termtreatmentwithlow-concentrationDCAonintestinalorganoidsgrowth(×200).http://www.j-smu.comJSouthMedUniv,2017,37(1):6-12·11·


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