目的建立小鼠小腸類器官培養(yǎng)系統(tǒng),探討脫氧膽酸（DCA）對(duì)小腸類器官生長(zhǎng)的影響。方法取8周齡C57BL/6小鼠末段回腸,EDTA法分離,收集隱窩后Matrigel基質(zhì)膠包埋,于完整培養(yǎng)基中培養(yǎng)。以無(wú)水酒精和正常小腸類器官為對(duì)照,予100μmol/L高濃度DCA短期干預(yù)2 d,10μmol/L DCA長(zhǎng)期干預(yù)10 d,并去除DCA后再長(zhǎng)期培養(yǎng)10 d,觀察類器官的生長(zhǎng)和出芽情況。結(jié)果高濃度DCA短期干預(yù)類器官,腸道類器官球形結(jié)構(gòu)形成率、腸道類器官結(jié)構(gòu)[形成率、類器官演化率和出芽數(shù)量均明顯減少（P<0.05）,短期去除DCA四項(xiàng)指標(biāo)仍減少（P<0.05）,長(zhǎng)期去除DCA后僅腸道類器官結(jié)構(gòu)形成率和出芽數(shù)量減少（P<0.05）。低濃度DCA短期干預(yù)腸道類器官結(jié)構(gòu)形成率和出芽數(shù)量減�。≒<0.05）,長(zhǎng)期干預(yù)腸道類器官球形結(jié)構(gòu)形成率、腸道類器官結(jié)構(gòu)形成率和出芽數(shù)量明顯減少（P<0.05）,去除DCA后僅腸道類器官結(jié)構(gòu)形成率和出芽數(shù)量低于正常（P<0.05）。結(jié)論本研究成功建立小鼠小腸類器官培養(yǎng)技術(shù),DCA損傷小腸類器官并影響其生長(zhǎng),長(zhǎng)期去除DCA后可部分恢復(fù)其功... 

【文章來(lái)源】：南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2017,37(01)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

短期較高濃度DCA對(duì)小腸類器官生長(zhǎng)的影響

4G）。去除DCA培養(yǎng)6d時(shí)傳代，7d時(shí)腸道類器官球形結(jié)構(gòu)形成率（[86.16±7.47）%vs（93.05±0.86）%和（93.52±1.42）%]以及10d時(shí)類器官演化率（[76.70±6.41）%vs（83.71±2.13）%和（85.68±5.05）%]基本和無(wú)水酒精、正常類器官無(wú)差異（P>0.05），10d時(shí)腸道類器官結(jié)構(gòu)形成率仍低于無(wú)水酒精和正常類器官對(duì)照組（[65.78±1.62）%vs（77.89±1.65）%]和（[80.08±3.66）%，P<0.05]，10d后類器官基本恢復(fù)到正常狀態(tài)（圖4J），但出芽數(shù)量仍少于無(wú)水酒精和正常類器官對(duì)照組（6.70±1.53vs8.50±1.53和8.40±1.85，P<0.05）（圖3）。3討論Fuller等［11］在2012年提出利用腸道類器官球形結(jié)構(gòu)形成率、腸道類器官結(jié)構(gòu)形成率、類器官演化率和每個(gè)類器官出芽個(gè)數(shù)來(lái)評(píng)判類器官的生長(zhǎng)情況。腸道類器官球形結(jié)構(gòu)形成率和腸道類器官結(jié)構(gòu)形成率可代表類器官的存活情況，從腸道類器官球形結(jié)構(gòu)到腸道類器官結(jié)構(gòu)的演化率可以明確ISCs的分化能力。由于每個(gè)出芽都有能力單獨(dú)生長(zhǎng)形成新的腸道類器官結(jié)構(gòu)，出芽個(gè)數(shù)可以代表類器官的生長(zhǎng)能力和分化能力。故而，本研究擬以此建立高脂飲食對(duì)腸道類器官損傷的模型，應(yīng)用腸道類器官球形結(jié)構(gòu)形成率、腸道類器官結(jié)構(gòu)形成率、類器官演化率和出芽數(shù)來(lái)評(píng)估DCA對(duì)于小鼠回腸末端類器官的生長(zhǎng)的影響。近數(shù)十年來(lái)隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人群飲食結(jié)構(gòu)西方化，肥胖、炎癥性腸并糖尿病等在我國(guó)發(fā)病率越來(lái)越高。高脂飲食可誘導(dǎo)腸腔內(nèi)具有細(xì)胞毒性的次級(jí)膽汁酸——脫氧膽酸（DCA）和石膽酸的增加［12］。以往研究?jī)H針對(duì)100μmol/L以上高濃度的DCA對(duì)于腸道上皮細(xì)胞和潘氏細(xì)胞的損傷作用進(jìn)行研究，本研究首先采用高濃度100μmol/LDCA2d短期和低濃度10μmol/LDCA10d長(zhǎng)期干預(yù)小腸類器官，并去除DCA影響長(zhǎng)期培養(yǎng)10d后觀?

哪諢?境［20］。而短期暴飲暴食對(duì)應(yīng)我們研究中的高濃度DCA短期干預(yù)類器官模型，長(zhǎng)期高脂飲食對(duì)應(yīng)我們研究中低濃度長(zhǎng)期DCA干預(yù)模型，我們推測(cè)短期大量的高脂飲食對(duì)于腸道損傷嚴(yán)重，即使恢復(fù)低脂飲食一段時(shí)間其損傷也無(wú)法恢復(fù)，而長(zhǎng)期少量的高脂飲食也會(huì)導(dǎo)致腸道損傷，需要較長(zhǎng)時(shí)間的低脂飲食才能部分ABCDEFGHIDCA100μmol/LControl(dehydratedalcohol)Normal2aysdfteraCADemovarl01aysd2aysd100μm100μm100μm100μm100μm100μm100μm100μm100μmJKL100μm100μm100μm01aysdfteraCADemovarl圖4長(zhǎng)期較低濃度DCA對(duì)小腸類器官生長(zhǎng)的影響Fig.4Effectoflong-termtreatmentwithlow-concentrationDCAonintestinalorganoidsgrowth(×200).http://www.j-smu.comJSouthMedUniv,2017,37(1):6-12·11·


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