目的:深入研究GLP-1受體激動劑類似物liraglutide對PA誘導(dǎo)的Kupffer細胞NAFLD模型的治療性作用。方法:（1）分離提取C57BL/6小鼠的肝臟Kupffer細胞,隨機分為三組:空白對照組（對照組）;PA處理組（PA組）;liraglutide+PA組（治療組）。PA濃度為0.3mmol/l,liraglutide濃度為100nmol/l。（2）RT-PCR檢測炎癥小體相關(guān)分子NLRP3、ASC、caspase-1,炎癥因子IL-1b、IL-18、TNF-a及信號通路Sirt1、PGC1α的基因表達水平;Western blot檢測炎癥小體相關(guān)蛋白分子NLRP3、ASC、caspase-1、Sirt1、PGC1α的蛋白水平;ELISA試劑盒檢測細胞培養(yǎng)上清的炎癥因子IL-1b、IL-18、TNF-a的水平;透射電鏡觀察各組細胞的線粒體的形態(tài);線粒體膜電位檢測試劑盒檢測各組細胞的線粒體膜電位。結(jié)果:PA引起NLRP3、ASC、caspase-1的蛋白及mRNA表達增加,而liraglutide能夠產(chǎn)生顯著的抑制作用;較空白組相比,PA組細胞上清液中的IL-1b、IL-... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Liraglutide緩解PA導(dǎo)致的NLRP3、ASC、caspase-1水平的增高Fig2-1LiraglutidealleviatedPA-inducedincreasesinproteinandmRNAlevelofNLRP3,ASCandcaspase-1.PAhadstimulatedinflammasomesbuthadbeenreducedbyliraglutide.A:westernblotresults.B,C,D:relativedensity.E,F,G:mRNAlevel.(*P<0.05,PAvsCON,#P<

圖2-2 Liraglutide緩解PA導(dǎo)致的炎癥因子IL-1β、IL-18、TNF-α水平的增高Fig2-2 Liraglutide alleviated PA-induced increases in IL-1β、IL-18、TNF-α. PA hadstimulated inflammation in Kupffer cells. But they had been reduced by liraglutide. A, B, C:ELISA results. D, E, F: mRNA level. (*P< 0.05, PA vs CON,#P< 0.05, PA + liraglutide vs PA).線粒體的質(zhì)子泵存在于其內(nèi)膜上，質(zhì)子泵可將線粒體基質(zhì)內(nèi)的質(zhì)子泵入內(nèi)、外膜間隙中，線粒體進行氧化磷酸化、產(chǎn)生ATP的等代謝活動可是質(zhì)子泵活動增強，導(dǎo)致膜間隙大量質(zhì)子積累而帶正電荷，線粒體基質(zhì)則帶負電荷，從而在線粒體內(nèi)膜的兩側(cè)形成跨膜電位（ΔΨ），簡稱線粒體膜電位。是線粒體功能正常所必需的，當(dāng)線粒體膜電位被破壞，則認(rèn)為是細胞凋亡級聯(lián)反應(yīng)過程中最早發(fā)生的事件之一。凋亡過程中一個重要的變化即是線粒體膜電位的崩潰。經(jīng)過同條件處理的細胞進行線粒體膜電位試劑盒檢測后，結(jié)果如圖所示（圖2-3）。由圖可以看出，PA處理后細胞的膜電位水平顯著降低，GLP-1受體激動劑類似物liraglutide則明顯逆轉(zhuǎn)了線

圖2-3 Liraglutide改善線粒體的形態(tài)和功能Fig2-3 Liraglutide improved the morphology and function of mitochondria.2.4 Liraglutide可上調(diào)Sirt1/p-AMPK/PGC1α信號通路我們測定了各組細胞的Sirt1和PGC1α的mRNA水平（圖2-4），結(jié)果顯示，PA處理組Sirt1和PGC1α的水平顯著降低，而liraglutide治療后，Sirt1和PGC1α的基因表達水平顯著提高。同時Western Blot檢測Sirt1和PGC1α的蛋白表達水平，同樣出現(xiàn)相似的結(jié)果，與預(yù)期結(jié)果相符合。3 討論近年來，人們的生活方式和飲食習(xí)慣也發(fā)生了巨大變化，帶來的后果就是非感染型疾病的增多，如NAFLD。NAFLD是由肝臟脂肪積累占肝臟重量的>5%引起的

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Bariatric surgery in patients with non-alcoholic fatty liver disease-from pathophysiology to clinical effects[J]. Tea L Laursen,Christoffer A Hagemann,Chunshan Wei,Konstantin Kazankov,Karen L Thomsen,Filip K Knop,Henning Gr?nb?k.  World Journal of Hepatology. 2019(02)
[2]Pathogenesis of non-alcoholic fatty liver disease in children and adolescence: From “two hit theory” to “multiple hit model”[J]. Yan-Lan Fang,Hong Chen,Chun-Lin Wang,Li Liang.  World Journal of Gastroenterology. 2018(27)



本文編號：2971059