本文關(guān)鍵詞：載5-ASA的SiO_2納米粒對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠靶向性治療研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)是炎癥性腸病的一種，是慢性、復(fù)發(fā)性，且發(fā)作與緩解相交替的非特異性炎癥性疾病，常累及黏膜及黏膜下層。臨床上治療UC的一線用藥是5-ASA，但由于疾病嚴重程度和病變結(jié)腸藥物濃度低，效果常常不盡如人意，因此迫切需要提高病變結(jié)腸的藥物濃度。隨著納米科技的發(fā)展，靶向傳送至病變結(jié)腸的的藥物成為可能。本研究的目的是制備具有靶向至炎癥結(jié)腸的載5-ASA的二氧化硅納米微粒(5-ASA-SiO2NPs)，并觀察其治療UC小鼠模型的療效，為今后開發(fā)和應(yīng)用5-ASA納米粒給藥系統(tǒng)治療潰瘍性結(jié)腸炎奠定理論基礎(chǔ)。 方法：首先用微乳法制備SiO2NPs，通過透射電子顯微鏡(TEM)進行表征測定。再經(jīng)過一系列的修飾加工，將傳統(tǒng)藥物5-ASA嫁接到經(jīng)過修飾的SiO2NPs表層，得到產(chǎn)物5-ASA-SiO2NP。CCK-8(Cell Counting Kit-8)法檢測5-ASA、SiO2NPs及5-ASA-SiO2NPs對人結(jié)直腸腺癌細胞(Caco-2)的體外細胞毒性。 60只8-9周齡的雄性BALB/c小鼠，隨機分為6組，每組10只。葡聚糖硫酸鈉(DSS)自飲法建立急性結(jié)腸炎模型，分組及給藥情況如下： ①正常對照組：自由飲用蒸餾水，生理鹽水日一次灌胃，共7天； ②疾病模型組：自由飲用5%DSS溶液，生理鹽水日一次灌胃，共7天； ③正常劑量5-ASA組：自由飲用5%DSS溶液，并予5-ASA200mg/kg日一次灌胃，共7天； ④高劑量5-ASA組：自由飲用5%DSS溶液，并予5-ASA400mg/kg日一次灌胃，共7天； ⑤SiO2NPs組：自由飲用5%DSS溶液，并予SiO2NPs100mg/kg日一次灌胃，共7天； ⑥5-ASA-SiO2NPs組：自由飲用5%DSS溶液，并予5-ASA-SiO2NPs100mg/kg日一次灌胃，共7天； 造模開始后，詳細觀察并記錄每只小鼠的一般情況及體重下降、大便性狀、便血情況，按疾病活動指數(shù)(DAI)標準評分。造模第8天處死小鼠，取炎癥結(jié)腸進行HE染色病理學(xué)觀察。ELISA法檢測小鼠結(jié)腸組織中髓過氧化物酶(MPO)活性及小鼠血清中炎癥因子TNF-α，IL-6的水平。實時熒光定量PCR(Real-Time PCR)法檢測各組小鼠結(jié)腸黏膜TNF-α mRNA，IL-6mRNA的表達水平。 結(jié)果：1、5-ASA-SiO2NP的合成及載藥量 設(shè)計合成了粒徑約90nm的SiO2NPs，對其進行透射電鏡(TEM)表征測定，結(jié)果表明，該納米微粒大小均一，表面圓整光滑，分散性好。經(jīng)過一系列修飾后，將5-ASA嫁接到表層，得到產(chǎn)物5-ASA-SiO2NP。載藥量為13.79±2.50%。 2、體外細胞毒性試驗 在5-ASA、SiO2NPs及5-ASA-SiO2NPs濃度為1mg/ml的條件下，CCK-8法檢測Caco-2細胞在12h的存活率分別為94.16±3.31%、74.81±2.03%和84.28±1.73%。 3、DAI及結(jié)腸病理組織學(xué)評分 ①模型組小鼠DAI評分9.00±2.21、結(jié)腸病理組織學(xué)評分10.00±1.50，與正常組小鼠DAI評分0.10±0.32、結(jié)腸病理組織學(xué)評分0相比明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)，提示UC小鼠模型制備成功； ②SiO2NPs組小鼠DAI評分9.33±1.66、結(jié)腸病理組織學(xué)評分9.33±1.73，與模型組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)； ③正常劑量5-ASA組、高劑量5-ASA組、5-ASA-SiO2NPs組DAI評分分別為6.70±1.99、5.20±2.11、4.80±1.81，結(jié)腸病理組織學(xué)評分分別為6.10±0.99、4.00±0.82、3.90±1.10，與模型組相比均明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)； ④高劑量5-ASA組及5-ASA-SiO2NPs組與正常劑量5-ASA組比較DAI及結(jié)腸病理組織學(xué)評分明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)； ⑤高劑量5-ASA組與5-ASA-SiO2NPs組相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 4、結(jié)腸組織MPO活性 ①模型組小鼠結(jié)腸組織MPO活性34.52±2.22U/mg組織，與正常組MPO活性1.97±0.82U/mg組織相比明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)； ②SiO2NPs組MPO活性34.09±1.72U/mg組織，與模型組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)； ③正常劑量5-ASA組、高劑量5-ASA組、5-ASA-SiO2NPs組MPO活性分別為25.65±1.97U/mg組織、10.26±1.30U/mg組織、10.88±1.44U/mg組織與模型組相比均不同程度降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)； ④高劑量5-ASA組及5-ASA-SiO2NPs組結(jié)腸組織MPO活性要低于正常劑量5-ASA組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)； ⑤高劑量5-ASA組與5-ASA-SiO2NPs組相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 5、血清中IL-6、TNF-α在蛋白水平的表達 ①模型組小鼠血清中IL-6在蛋白水平表達量315.78±31.12pg/ml、TNF-α表達量284.47±27.13pg/ml，與正常組IL-6表達量53.18±9.04pg/ml、TNF-α表達量42.21±7.04pg/ml相比明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)； ②SiO2NPs組小鼠血清中IL-6在蛋白水平表達量317.79±18.91pg/ml、TNF-α表達量282.00±22.71pg/ml，與模型組IL-6、TNF-α表達量相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)； ③正常劑量5-ASA組、高劑量5-ASA組、5-ASA-SiO2NPs組血清中IL-6在蛋白水平表達量分別為226.18±17.46pg/ml、126.45±8.85pg/ml、135.07±10.92pg/ml，TNF-α在蛋白水平表達量分別為153.31±17.91pg/ml、84.03±9.32pg/ml、87.49±6.99pg/ml，與模型組相比均不同程度降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)； ④高劑量5-ASA組及5-ASA-SiO2NPs組血清中IL-6、TNF-α在蛋白水平表達量要低于正常劑量5-ASA組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)； ⑤高劑量5-ASA組與5-ASA-SiO2NPs組小鼠相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 6、結(jié)腸黏膜中IL-6mRNA、TNF-α mRNA的表達 ①模型組小鼠結(jié)腸黏膜中IL-6mRNA表達量26.11±1.64、TNF-α mRNA表達量14.99±1.55，與正常組小鼠IL-6mRNA表達量1.11±0.27、TNF-α mRNA表達量1.07±0.25相比明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)； ②SiO2NPs組小鼠結(jié)腸黏膜中IL-6mRNA表達量25.52±1.65、TNF-α mRNA表達量14.67±1.29，與模型組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)； ③正常劑量5-ASA組、高劑量5-ASA組、5-ASA-SiO2NPs組結(jié)腸黏膜中IL-6mRNA的表達量分別為10.32±0.98、4.63±0.67、4.73±0.50，TNF-α mRNA的表達量分別為4.73±0.90、2.02±0.48、1.83±0.39，與模型組相比均不同程度降低，，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)； ④高劑量5-ASA組及5-ASA-SiO2NPs組小鼠結(jié)腸黏膜IL-6mRNA、TNF-αmRNA的表達要低于正常劑量5-ASA組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)； ⑤高劑量5-ASA組與5-ASA-SiO2NPs組相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論：1、成功制備了具有有效載藥量，安全性較高，且對UC小鼠模型炎癥結(jié)腸有較強靶向性的載藥納米粒5-ASA-SiO2NPs； 2、靶向性5-ASA-SiO2NP能有效地治療UC小鼠模型，SiO2NPs負載低劑量的5-ASA可以達到高劑量的治療效果；其作用機制可能通過降低炎癥因子TNF-α及IL-6的表達而達到療效； 3、本研究為今后5-ASA納米粒給藥系統(tǒng)的開發(fā)和臨床上應(yīng)用治療潰瘍性結(jié)腸炎奠定了理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：潰瘍性結(jié)腸炎 納米科技 5-ASA DSS 動物模型
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R574.62
【目錄】：

• 摘要6-10
• Abstract10-15
• 前言15-17
• 第一章 負載 5-ASA 納米粒的制備及細胞毒性試驗17-28
• 引言17
• 1.1 主要儀器與試劑17-19
• 1.2 實驗方法19-22
• 1.3 統(tǒng)計學(xué)處理22-23
• 1.4 實驗結(jié)果23-25
• 討論25-28
• 第二章 5-ASA-SiO_2NPs 對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠的治療研究28-52
• 引言28
• 2.1 實驗材料28-29
• 2.2 實驗方法29-37
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)處理37
• 2.4 實驗結(jié)果37-45
• 討論45-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻53-57
• 綜述57-69
• 參考文獻65-69
• 致謝69-70

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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  本文關(guān)鍵詞：載5-ASA的SiO_2納米粒對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠靶向性治療研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：296837