發(fā)布時間：2021-01-07 19:56

　　抗病毒治療是改善慢性乙型肝炎患者預后、提高生活質(zhì)量的主要措施。核苷（酸）類似物的臨床應用極大地改善了病人的病情。理論上,所有口服核苷（酸）類似物在治療過程中均可出現(xiàn)耐藥性,HBV對核苷類抗病毒藥物產(chǎn)生的耐藥性是阻礙其臨床應用、降低其療效的主要原因。因此在慢性HBV感染抗病毒治療中進行耐藥基因監(jiān)測對于指導臨床用藥,包括撤換或增加其他核苷（酸）類似物十分重要,倍受臨床重視。HBV基因變異已經(jīng)被證明與HBV的耐藥性有直接的因果關(guān)系。HBV變異的出現(xiàn)可通過基因型檢測來診斷,而PCR產(chǎn)物直接測序的方法能夠鑒定已知的并發(fā)現(xiàn)新的變異位點。為了鑒定潛在的基因型耐藥,在病毒學突破時分離提取的HBV DNA序列及其推導出的氨基酸序列需與患者治療前標本的序列和野毒株序列相對比以確定導致對某種抗病毒藥物耐藥的位點替換。長期以來,人們對PCR假陰性問題認識不足。在實際應用中有許多因素可能造成假陰性結(jié)果,要成功地得到靶序列的擴增,PCR要求模板、引物、dNTP、DNA聚合酶和緩沖液之間的無數(shù)復雜相互作用。由于HBV DNA的P基因區(qū)是非保守區(qū),檢測時可能會由于引物結(jié)合區(qū)的堿基的變異而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因此提高HBV... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
主要英文縮寫與符號說明
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 提高HBV P基因區(qū)PCR檢測陽性率的策略
    材料和方法
        一、主要儀器及試劑
        二、血清標本
        三、實驗方法
            （一） 不同血清HBV DNA抽提得率的比較
            （二） 優(yōu)化PCR反應條件
            （三） 選擇最佳引物
            （四） 降低退火溫度
            （五） 應用3′末端堿基游移兼并引物技術(shù)
        四、拉米夫定治療失敗病人HBV基因型耐藥的檢測
        五、統(tǒng)計分析
    結(jié)果
        一、HBV DNA標準品定量
        二、不同血清處理方法PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳
        三、PCR反應條件的優(yōu)化
        四、最佳引物的選擇
        五、降低退火溫度
        六、應用3′末端堿基游移兼并引物
        七、拉米夫定治療失敗病人HBV基因型耐藥的檢測
    討論
    本部分研究小結(jié)
    參考文獻
第二部分 阿德福韋酯治療中HBV基因型耐藥臨床監(jiān)測研究
    材料和方法
        一、研究對象
        二、主要儀器及試劑
        三、方法
            （一） 臨床指標檢測
            （二） 建立包已知耐藥相關(guān)突變位點堿基HBV P基因區(qū)的PCR檢測方法
            （三） 56例阿德福韋酯治療病人血清HBV基因型耐藥臨床監(jiān)測
        四、統(tǒng)計學分析
    結(jié)果
        一、病例資料
        二、PCR優(yōu)化結(jié)果
        三、56例阿德福韋酯治療病人HBV基因型耐藥臨床監(jiān)測結(jié)果
        四、可能影響阿德福韋酯治療效果的多因素分析
    討論
    本部分研究小結(jié)
    參考文獻
綜述:乙型肝炎病毒表型耐藥體外實驗模型研究進展
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]HBV基因定量分析技術(shù)的應用價值、存在問題及展望[J]. 繆曉輝,孔憲濤.  肝臟. 1999(03)
[2]HBV基因定量分析技術(shù)的原理和方法[J]. 繆曉輝,戚中田.  肝臟. 1999(01)



本文編號：2963147