目的:探討Rho A/ROCK1信號通路在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）向肝細(xì)胞分化過程中的變化特征,明確BMSCs肝向分化過程中存在的新干預(yù)靶點(diǎn),以期為臨床BMSCs移植治療肝硬化提供更好的理論依據(jù)。方法:體外培養(yǎng)BMSCs,應(yīng)用不同濃度的肝細(xì)胞生長因子（hepatocyte growth factor,HGF）（0ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml）誘導(dǎo)BMSCs分化,分別于3d、1w、2w、3w應(yīng)用MTT檢測細(xì)胞增殖情況,生化試劑盒檢測甲胎蛋白（alpha fetal protein,AFP）、白蛋白（Albumin,ALB）的含量,Western blot檢測Rho A、ROCK1、p-MLC蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1、細(xì)胞增值率變化顯示:不同濃度的HGF（0ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml）誘導(dǎo)BMSCs肝向分化,細(xì)胞增值率以HGF濃度為20ng/ml時最佳（P<0.05）,且隨著時間的延長細(xì)胞增值率呈升高趨勢,3w時細(xì)胞增值率最高（P<0.05）。2... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同時間段不同濃度HGF誘導(dǎo)BMSCs肝向分化形態(tài)（顯微鏡100×）

0ng/ml 組與 10ng/ml 組，10ng/ml 組與 20ng/ml 組，20ng/ml 組與 30，分別相比 p<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；3w 時，0ng/ml 組與 10ng/ml 組，10與 20ng/ml 組，20ng/ml 組與 30ng/ml 組，分別相比 p<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)。在同一 HGF 濃度時，分別將 3d 時的增值率與 1w，1w 時的增值率與 2w 時的增值率與 3w，分別相比 p<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（表 1、圖 2）表 1 不同時間段各 HGF 濃度組 BMSCs 肝向分化細(xì)胞增值率的變化（%）（x±s，nGF 濃度 3d 1w 2w 3w F 值 Png/ml 76.26±0.249 79.09±0.217*83.80±0.227*92.16±0.242*2643.71 <0ng/ml 80.53±0.264#82.57±0.126*#86.46±0.227*#93.55±0.273*#1721.16 <0ng/ml 87.83±0.237#90.55±0.229*#92.99±0.216*#98.04±0.212*#890.96 <0ng/ml 84.25±0.221#87.36±0.230*#89.22±0.181*#94.45±0.222*#1193.48 < 值 913.16 1829.55 1016.64 332.42 — — 值 <0.01 <0.01 <0.01 <0.01 — —：與 3d 組相比，*p<0.05；與 0ng/ml 組相比，#p<0.05。

圖 2 不同時間段各 HGF 濃度組 BMSCs 肝向分化細(xì)胞增值率變化曲線圖3.3 生化試劑盒在 3d、1w、2w、3w 分別檢測不同濃度 HGF 誘導(dǎo)下 BMSCs 肝向分化時 AFP、ALB 的含量變化情況。AFP、ALB 濃度變化情況：20ng/ml 組、30ng/ml 組培養(yǎng)的 BMSCs 在培養(yǎng)的第 3d 無 AFP 的表達(dá)，第 1w 開始出現(xiàn) AFP 的表達(dá)，2w 時表達(dá)增強(qiáng)，3w 時表達(dá)減弱，20ng/ml 組、30ng/ml 組培養(yǎng) 2w 時開始出現(xiàn) ALB 的表達(dá)，3w 時表達(dá)增高。10ng/ml 組培養(yǎng) 3w 時 AFP 稍有表達(dá)，未見 ALB 的表達(dá)，0ng/ml 組在培養(yǎng)過程

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Wnt信號通路與人類疾病相關(guān)性的研究進(jìn)展[J]. 張遙,任秀智,韓金祥,魯艷芹.  中國生物制品學(xué)雜志. 2018(01)
[2]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的定向分化潛能[J]. 李喬喬,吳振強(qiáng),張麗君.  中國組織工程研究. 2017(25)
[3]松果菊苷誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的研究[J]. 尉大為,葛鋅雨,劉奕含,張志成,唐朝,田原.  中藥藥理與臨床. 2017(02)
[4]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植可促進(jìn)移植胰島周圍新生血管形成[J]. 李睿,董紅麗,劉汝斌,劉寶林.  器官移植. 2017(02)
[5]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞的方法及機(jī)制研究與進(jìn)展[J]. 謝樹才,張劍權(quán),蔣錫麗,周帥.  中國組織工程研究. 2016(50)
[6]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移的信號通路的研究進(jìn)展[J]. 吳志方,羅輝,羅毅文.  醫(yī)學(xué)綜述. 2016(22)
[7]經(jīng)肝固有動脈自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療失代償期肝硬化的療效及安全性[J]. 鄭盛,楊涓,劉瓊,樓維新.  肝臟. 2016(02)
[8]Wnt/β-catenin信號通路及其對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞多向分化調(diào)節(jié)研究進(jìn)展[J]. 李云矗,徐剛,徐成福.  牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2016(01)
[9]肝細(xì)胞生長因子的濃度和誘導(dǎo)時間對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化的影響[J]. 潘興南,魏開鵬.  肝臟. 2013(06)
[10]Hepatogenic differentiation of mesenchymal stem cells induced by insulin like growth factor-Ⅰ[J]. Maryam Ayatollahi,Masoud Soleimani,Seyed Ziaadin Tabei,Maryam Kabir Salmani.  World Journal of Stem Cells. 2011(12)



本文編號：2955283