TGF-β1是一個(gè)多效性生長(zhǎng)因子，在調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的生成和器官、組織纖維化的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。肝星狀細(xì)胞（HSCs）是肝內(nèi)產(chǎn)生ECM的主要細(xì)胞，它的激活與活化狀態(tài)的維持是肝纖維化的發(fā)生和發(fā)展過程中的重要事件之一，而HSCs的活化和生成ECM是由TGF-β1／Smad3信號(hào)通路調(diào)控的。大量研究表明，在不同位點(diǎn)、用不同的阻斷劑如抗體、競(jìng)爭(zhēng)性Ⅱ型TGF-β受體、Ⅰ型TGF-β受體（TβR-Ⅰ）的小分子抑制劑、寡義核苷酸或小干擾RNA（siRNA）等阻斷TGF-β1／Smad3通路后，體內(nèi)外均能抑制ECM的過渡生成，并能減輕器官纖維化的程度，但以Smad3蛋白為靶點(diǎn)拮抗TGF-β1／Smad3通路的研究尚無報(bào)道。我們首先建立了TGF-β1／Smad3信號(hào)通路的蟲熒光素酶的報(bào)告基因系統(tǒng)，通過TβR-Ⅰ的小分子抑制劑—SB-431542的抑制實(shí)驗(yàn)已確認(rèn)此模型的有效性，并篩選了穩(wěn)定表達(dá)的MvLu1細(xì)胞株。通過柚皮素抑制TGF-β1／Smad3的報(bào)告基因系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)，我們首先證明柚皮素是TGF-β1／Smad3通路的拮抗劑；體外實(shí)驗(yàn)表明，柚皮素不僅可以抑制TGF-β1誘導(dǎo)的HSCs生... 

【文章來源】：沈陽藥科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：118 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
第一章 緒論
    1 TGF-β1／Smad3信號(hào)傳導(dǎo)途徑
        1.1 TGF-βs超家族成員與其體內(nèi)表達(dá)及對(duì)生物活性的調(diào)控
        1.2 Ⅰ型和Ⅱ型TGF-β受體的結(jié)構(gòu)與功能
        1.3 TGF-β超家族誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)
        1.4 Smads蛋白的核內(nèi)轉(zhuǎn)錄活性
        1.5 與Smads蛋白結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子
        1.6 Ⅰ-Smads蛋白的功能
        1.7 TGF-β不依賴于Smads蛋白的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
        1.8 TGF-β／Smad3通路與其它信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的交聯(lián)
    2 肝纖維化發(fā)病的分子機(jī)制
        2.1 細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分及其功能特征
        2.2 肝纖維化的細(xì)胞內(nèi)組分與ECM之間的相互作用
        2.3 纖維化與肝星狀細(xì)胞
    3 肝纖維化的流行病學(xué)及治療方法
        3.1 流行病學(xué)現(xiàn)狀
        3.2 治療方法
    4 RNA干擾
    5 拮抗TGF-β1／Smad3信號(hào)通路對(duì)肝纖維化的防治作用
        5.1 在纖維化生成與發(fā)展過程中TGF-β1維持高水平
        5.2 外源性TGF-β1可導(dǎo)致ECM過多積累和纖維化發(fā)生
        5.3 在不同位點(diǎn)阻斷TGF-β1／Smad3信號(hào)通路都能防治肝纖維化
    6 立題依據(jù)
第二章 TGF-β／Smad3信號(hào)通路報(bào)告基因的建立與穩(wěn)定細(xì)胞克隆的篩選
    1 材料與試劑
    2 方法與步驟
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
12-pMLP-Luc報(bào)告基因的構(gòu)建">        3.1 B4-（CAGA）₁₂-pMLP-Luc報(bào)告基因的構(gòu)建
        3.2 蟲熒光素酶活性測(cè)定
    4 討論
第三章 SB-431542和柚皮素對(duì)報(bào)告基因的阻斷作用
    1 材料與試劑
    2 方法與步驟
    3 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)方法
    4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 SB-431542對(duì)雙報(bào)告基因系統(tǒng)的作用結(jié)果
        4.2 柚皮素對(duì)雙報(bào)告基因系統(tǒng)的作用結(jié)果
    5 討論
第四章 Naringenin對(duì)TGF-β1／Smad3信號(hào)通路的拮抗及對(duì)HSC產(chǎn)生ECM的抑制作用
    1 材料與試劑
    2 方法與步驟
    3 統(tǒng)計(jì)分析
    4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 柚皮素對(duì)HSCs的細(xì)胞毒較低
        4.2 柚皮素抑制Smad3的轉(zhuǎn)錄及其蛋白表達(dá),而不影響TβR-Ⅰ和TβR-Ⅱ
        4.3 柚皮素不影響Smad2、Smad4和Smad7的轉(zhuǎn)錄
        4.4 柚皮素可在mRNA和蛋白水平同時(shí)抑制ECM的表達(dá)
    5 討論
第五章 干擾Smad3的siRNA的設(shè)計(jì)、連接載體及其活性篩選
    1 材料與試劑
    2 方法與步驟
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 表達(dá)S2-siRNA的寡核苷酸雙鏈與載體的連接
        3.2 表達(dá)S2質(zhì)粒的篩選
        3.3 S2-vector在HSCs內(nèi)的表達(dá)
        3.4 裸S2-siRNA對(duì)報(bào)告基因系統(tǒng)的作用結(jié)果
        3.5 S2-vector對(duì)報(bào)告基因系統(tǒng)的作用結(jié)果
    4 討論
第六章 SB-431542和siRNA／Smad3對(duì)HSC產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì)的影響
    1 材料與試劑
    2 方法與步驟
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 SB-431542對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的HSCs生成Col Ia1、FN和PAI-1 mRNA的抑制作用
        3.2 siRNA／Smad3對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的HSCs生成Col Ia1、FN和PAI-1 mRNA的抑制
        3.3 siRNA／Smad3對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的HSCs生成Smad3、P-Smad3、Col Ia1、FN和PAI-1的抑制
    4 討論
第七章 siRNA／Smad3沉默Smad3基因防治DMN誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化的作用研究
    1 材料與試劑
    2 方法與步驟
    3 統(tǒng)計(jì)軟件及方法
    4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 肝內(nèi)紅色熒光蛋白的表達(dá)
        4.2 動(dòng)物存活率的差異
        4.3 肝臟外觀上的差異
        4.4 肝內(nèi)結(jié)構(gòu)的變化和組織學(xué)評(píng)分
        4.5 動(dòng)物體重和肝臟重量的變化、肝內(nèi)ECM的變化
        4.6 血清內(nèi)TGF-β1水平的變化
        4.7 肝功能血清學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果
        4.8 血清內(nèi)ECM的變化
        4.9 肝內(nèi)Smad3和a-SMA表達(dá)量的變化
    5 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
縮略語
發(fā)表文章目錄
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：2945881