研究背景:肝纖維化是肝臟受到慢性損傷時(shí),肝臟細(xì)胞外基質(zhì)分泌與降解失衡,從而在肝細(xì)胞的間隙可逆性沉積的結(jié)果;是多種肝臟疾病發(fā)展至肝硬化的必經(jīng)階段;成為諸多肝臟疾病預(yù)后與轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵。因此,抑制甚至逆轉(zhuǎn)肝纖維化的進(jìn)展,具有重要意義。多年來,抗肝纖維化的藥物層出不窮,但是至今尚未出現(xiàn)理想的治療藥物。近年來以細(xì)胞為基礎(chǔ)的肝病治療方面的研究逐漸深入,目前研究較多的是骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、臍帶血干細(xì)胞及早期胚囊來源的干細(xì)胞、中期妊娠的胚胎肝臟來源的干細(xì)胞等。干細(xì)胞免疫原性低,移植后排斥反應(yīng)小,更易于基因修飾。胎肝來源的肝母細(xì)胞,在治療肝病方面,具有“天然”優(yōu)勢(shì):移植后靶向性強(qiáng),在受體肝臟中更容易向肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞分化。中期妊娠的胎肝肝母細(xì)胞含量豐富,它們具有向肝細(xì)胞和膽管上皮細(xì)胞雙向分化的潛能。另外肝纖維化相關(guān)因子的基因治療也呈現(xiàn)出良好前景。從肝母細(xì)胞含量豐富的大鼠中期妊娠（ED14.5）的胚胎肝臟中,以機(jī)械分離法、OX43/OX44免疫吸附法等分離純化出肝母細(xì)胞并對(duì)其進(jìn)行鑒定;細(xì)胞培養(yǎng):體外培養(yǎng)肝母細(xì)胞,分析SCF、bFGF、EGF和LIF等細(xì)胞因子對(duì)肝母細(xì)胞增殖和分化的影響,選出既能刺激肝母細(xì)胞增殖同時(shí)又... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：119 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

從大鼠ED14.5胎肝細(xì)胞懸液中分離純化出的肝母細(xì)胞懸

Ⅲ 孵育：在葡萄糖-6-磷酸鈉鹽作用液中 37℃孵育 30 min。Ⅳ 沖洗：自來水沖洗后用 DDW 沖洗。Ⅴ 顯色：0.5%硫化銨作用 1 min，DDW 沖洗。Ⅵ 封片：甘油明膠封片。Ⅶ 鏡檢。2. 結(jié)果2.1 大鼠肝母細(xì)胞體外分離純化及鑒定2.1.1 大鼠肝母細(xì)胞分離純化顯微鏡觀察結(jié)果顯示：肝細(xì)胞懸液中細(xì)胞成分復(fù)雜，細(xì)胞大小形態(tài)不均勻，可見包括成纖維樣細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞，并有少量細(xì)胞團(tuán)。如圖 1-A純化后，細(xì)胞呈現(xiàn)較好的離散狀態(tài)，細(xì)胞呈小圓亮。較純化前，細(xì)胞形態(tài)均一；細(xì)胞較純化前以小細(xì)胞為主，這些小細(xì)胞在體積上又可分為大、中、小三種。如圖 1-B

吉 林 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文結(jié)果提示，純化前，胎肝細(xì)胞懸液中細(xì)胞成分復(fù)雜，經(jīng)過純化，細(xì)胞成分趨向單一，細(xì)胞外形具有肝臟祖細(xì)胞的特征。這些細(xì)胞雖然具有小亮圓的共同特征，但是體積并不完全一致，這提示 ED14.5 大鼠胎肝中的肝母細(xì)胞處于不同的分化階段。2.1.2 大鼠肝母細(xì)胞純化后鑒定純化后大鼠肝母細(xì)胞細(xì)胞爬片的免疫組化鑒定，結(jié)果顯示：2.1.2.1 約 95%的大鼠肝母細(xì)胞 AFP 免疫組化染色呈棕色顆粒濃染，為強(qiáng)陽(yáng)性；另有不到 5%的大鼠肝母細(xì)胞染色較淡，為弱陽(yáng)性。陽(yáng)性細(xì)胞滿視野。如圖 1-C/圖 1-D

【參考文獻(xiàn)】：
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