發(fā)布時(shí)間：2020-12-21 09:55

　　目的:肝纖維化(Hepatic fibrosis,HF)是一個(gè)病理生理過程,肝臟的炎癥反應(yīng)和中毒損傷等可造成此種損害,嚴(yán)重影響了人們的身體健康和生活質(zhì)量。HF患者無特異性的臨床表現(xiàn),診斷需要綜合評(píng)估全身情況。HF的肝臟組織表面發(fā)生了明顯的改變,纖維化時(shí)的膠原沉積對(duì)肝臟血流和肝細(xì)胞灌注有明顯的影響。HF發(fā)生發(fā)展過程復(fù)雜,一般來說纖維化多為不可逆,若病變持續(xù)進(jìn)展,最終形成肝硬化。目前,纖維化的臨床診療尚無特效藥,而藥物的不規(guī)范使用可加重肝臟負(fù)擔(dān)。研究發(fā)現(xiàn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)來源的外泌體對(duì)HF等肝臟疾病具有一定的治療作用,具有無排斥反應(yīng)和安全性高等優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過培養(yǎng)BMSCs獲得其外泌體,以膽總管結(jié)扎(Bile duct ligation,BDL)方法誘導(dǎo)小鼠HF。最后,對(duì)其移植BMSCs來源外泌體,采取多種方式對(duì)HF的作用進(jìn)行研究,分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),以期為外泌體的深入研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:采用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)BMSCs,用流式細(xì)胞技術(shù)對(duì)其進(jìn)行鑒定;按照試劑說明書步驟提取BMSCs來源外泌體,采用透射電鏡、粒... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

第3代BMSCs倒置顯微鏡顯微鏡形態(tài)（100x）

圖 2 BMSCs 流式細(xì)胞圖4 討論BMSCs 源于中胚層，是一種具有強(qiáng)大的多向分化潛能和自我更新的多能干細(xì)胞，具有來源廣泛、取材方便、和可自體移植等特點(diǎn)[40]。BMSCs 是干細(xì)胞領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。近年來，BMSCs 相關(guān)研究取得了一系列的進(jìn)展，在組織工程、損傷修復(fù)、腫瘤治療和基因治療等[41]方面有著廣闊的應(yīng)用前景。目前，BMSCs 的分離培養(yǎng)、純化和擴(kuò)增的方法較多，為其在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床應(yīng)用的深入研究和應(yīng)用提供了堅(jiān)實(shí)的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。常用的 BMSCs 分離與培養(yǎng)方法有: (1)密度梯度離心法[42]:依據(jù) BMSCs 與其他細(xì)胞的密度、直徑和在溶液中的沉降速度不同進(jìn)行分離。該方法操作相對(duì)簡(jiǎn)單，對(duì)骨髓需求量少，分離培養(yǎng)效果佳，可有效分選出純度較高的細(xì)胞。但該法易造成細(xì)胞流失和生長(zhǎng)微環(huán)境發(fā)生變化，并且相應(yīng)的分離液對(duì)于干細(xì)胞的生長(zhǎng)影響未見具體的研究。(2)免疫磁珠分選法：根據(jù) BMSCs 表面抗原能夠和連接在磁珠上的特異性單抗結(jié)合的特征將

圖 3 蛋白濃度測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線2.2.4.2 外泌體蛋白的 SDS-PAGE 凝膠電泳（1）配膠：提前用水檢查配膠玻璃板是否漏水，按說明配好分離膠（5ml，用濾紙吸凈架子里的水，用 1000ul 的槍頭加入分離膠，以剛超過綠色標(biāo)準(zhǔn)，上層用 1000ul 的槍頭加滿三蒸水壓膠，放置 30min 后，待水和膠之間顯分界線后配好濃縮膠（2ml/塊）。用濾紙吸凈上層三蒸水，用 1000ul 的加入濃縮膠，平行插入梳子，約 30min 后，將配好的膠放入-4℃冰箱保存過繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。（2）電泳：配置的膠凝固后，在水中拔去梳子，動(dòng)作要輕柔謹(jǐn)慎。將配膠璃板放入電泳槽中，加入電泳液開始上樣，內(nèi)槽加滿電泳液，外槽加電泳液gel 標(biāo)志處；上樣后即可開始電泳，連接電泳儀，黑對(duì)黑，紅對(duì)紅，調(diào)整參：恒壓，S1=80V（30min），S2=120V（60min）。電泳開始后，檢查-80℃是否有足夠的冰，以備轉(zhuǎn)膜用，同時(shí)打開制冰機(jī)。（3）轉(zhuǎn)膜：每塊膠準(zhǔn)備 2 大 2 小 4 張濾紙，2 塊海綿，1 張 PVDF 膜（提前

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：2929632