目的通過比較分析不同硬度基底上的融合生長肝細胞（L02）的差異，探查細胞間粘附復合物穩(wěn)定性不同的成因，加深微觀力學環(huán)境改變對細胞群體生長行為及其表型影響的進一步認識。方法構(gòu)建細胞體外培養(yǎng)模型，制備聚乙烯醇水凝膠基底膜，硬度分別為3.6kPa、10kPa、30kPa。分別對應正常的肝組織、纖維化中期的肝組織和纖維化末期的肝組織的硬度。運用實時顯微拍攝觀察在不同硬度基底上L02細胞的形態(tài)特征；應用免疫熒光染色技術(shù)檢測不同硬度基底上的細胞肌動蛋白骨架構(gòu)象、β-連環(huán)蛋白和vinculin表達分布；采用Western Blotting方法檢測不同硬度基底的細胞膜上β-連環(huán)蛋白的表達及細胞質(zhì)中vinculin的表達和β-連環(huán)蛋白的磷酸化水平。結(jié)果基底硬度對L02細胞的生物學行為具有重要影響。（1）融合生長的L02細胞呈圓形或多邊形，隨基底硬度增加，L02細胞的球形指數(shù)增大。（2）采用EDTA處理匯合生長的L02細胞，細胞逐漸分離，形態(tài)學表現(xiàn)現(xiàn)為細胞逐漸變圓，鋪展面積和細胞周長逐漸縮小。隨著硬度增大，L02細胞從融合狀態(tài)到細胞-細胞間連接被破壞所需的時間依次變短。（3）融合生長的L02細胞在軟基質(zhì)上... 

【文章來源】：重慶大學重慶市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

細胞連接類型Fig1.1Typeofcellconnection

圖 1.2 粘附連接復合物結(jié)構(gòu)Fig1.2 Diagram of adhesion complexes structure.1.2 細胞-細胞間粘附系統(tǒng)的功能粘附連接復合物對維持相鄰細胞間的粘著接觸以及調(diào)節(jié)肌動蛋白骨架，以上皮細胞的正常作用有重要作用。粘附連接復合物最重要的作用是它們有助于維持組織的完整性[13]。即加強中細胞-細胞間的內(nèi)聚力，這個作用在早期的胚胎發(fā)育中最重要。用突變體的素轉(zhuǎn)染到早期非洲爪蟾蜍胚胎中，導致了其組織完整性喪失，包括了胚胎外的不連續(xù)性和胚葉細胞的相互分離。而觀察到胚葉細胞的大量分離就證明了間粘附減弱。大量關(guān)于粘附連接復合物不穩(wěn)定的類似研究表明，它們與細胞粘附強度以及細胞間粘附連接的穩(wěn)定性有密切關(guān)系。粘附連接復合物的第二功能是參與細胞分選和細胞間的識別。發(fā)育的基本是細胞有能力從與其不同的細胞中分離出來。通過 Townes 和 Holtfreter 的實驗可證明，來自分離的原腸胚階段的細胞能重組，這些細胞能夠重新排列

不同位點(絲氨酸或者蘇氨酸)能在酪氨酸激酶作用下被磷酸化，從而改變了β-連環(huán)蛋白與E-鈣粘素和α-連環(huán)蛋白的相互作用。β-連環(huán)蛋白有三個保守的酪氨酸殘基142，489和654如圖1.3，它們靠近鈣粘素并且調(diào)節(jié)粘附連接復合物的完整性[22]。酪氨酸142是β-連環(huán)蛋白與α-連環(huán)蛋白連接位點上的殘基。這個殘基的磷酸化作用使α-連環(huán)蛋白與β-連環(huán)蛋白分離，最終導致粘附復合物的喪失，因此對調(diào)節(jié)粘附連接起著重要作用[23]。酪氨酸142是Fyn、活化的Fer和c-Met的靶向目標。酪氨酸489在Arm重復區(qū)N端的第2個螺旋處，通過Abl是其磷酸化導致β-連環(huán)蛋白從E-鈣粘素上脫離。其中β-連環(huán)蛋白酪氨酸殘基654(Tyr654)與E-鈣粘素和β-連環(huán)蛋白親和性有密切關(guān)系[24-25]。酪氨酸654在Arm重復區(qū)的第3個螺旋處，這個殘基在β-連環(huán)蛋白中是保守的。一旦這一位點發(fā)生磷酸化（通過EGFR或者Src），β-連環(huán)蛋白將和E-鈣粘素解離，導致整個胞連接喪失功能。圖1.3 β-連環(huán)蛋白的磷酸化位點Fig1.3 Phosphorylation sites of β-catenin此外，大量證據(jù)說明肌動蛋白骨架對粘附復合物的穩(wěn)定性起著關(guān)鍵性作用。通過觀察看到肌動蛋白骨架在細胞間連接處與細胞間粘附復合物共定位[26-27]。細胞間粘附連接復合物位于細胞表面

【參考文獻】：
期刊論文
[1]基底硬度與細胞因子TGF-β1協(xié)同作用對肝細胞表型的影響[J]. 王紅兵,徐以娟,徐秋華,于光磊,鄒小兵,楊力,白潔,楊雨,張持.  醫(yī)用生物力學. 2012(06)
[2]基底硬度對肝細胞和肝癌細胞融合生長的影響[J]. 張榮,王紅兵,楊本艷姿,譚喬燕,楊力.  醫(yī)用生物力學. 2013(01)
[3]基底硬度和表面形貌對細胞生物學行為的影響[J]. 王紅兵,林雨,楊力,鄒小兵,吳澤志.  細胞生物學雜志. 2009(05)
[4]β連環(huán)蛋白與肝癌[J]. 鄧輝洲.  肝膽外科雜志. 2004(01)
[5]整合素及其與氣道高反應的關(guān)系[J]. 向陽,秦曉群.  國外醫(yī)學(生理、病理科學與臨床分冊). 2003(02)
[6]整合素在細胞響應機械應力中的作用[J]. 張惠靜,蔡紹皙,盧曉.  生物化學與生物物理進展. 2002(03)



本文編號：2923536