目的 探討慢性HBV感染對人肝臟CYP3A4的影響，同時(shí)在細(xì)胞和分子水平對臨床研究結(jié)果進(jìn)行機(jī)制研究。方法 收集慢性HBV感染患者和正常人的肝組織標(biāo)本，用HPLC方法檢測CYP3A4代謝活性。以Western印跡法測定CYP3A4蛋白的表達(dá)差異。選取1a，25-（OH）₂D₃為誘導(dǎo)劑，觀察其在mRNA和蛋白水平對HepG2細(xì)胞CYP3A4的誘導(dǎo)，并瞬時(shí)轉(zhuǎn)染pcDNA₃-X質(zhì)粒，觀察HBx對誘導(dǎo)的影響。結(jié)果 慢性HBV感染組CYP3A4酶蛋白代謝活性和蛋白表達(dá)均低于正常組（P＜0.05）。1a，25-（OH）₂D₃作為誘導(dǎo)劑可在mRNA和蛋白水平對HepG2細(xì)胞CYP3A4表達(dá)有較好的誘導(dǎo)作用，HBx干擾1a，25-（OH）₂D₃對HepG2細(xì)胞CYP3A4的誘導(dǎo)。結(jié)論 慢性HBV感染可降低肝組織中CYP3A4的酶蛋白表達(dá)和酶活性，對CYP3A4活性的影響不涉及Km；HBx可抑制CYP3A4表達(dá)調(diào)控。 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

超低溫冷凍復(fù)蘇肝細(xì)胞(HH一03一011)

肝組織離體后迅速冷凍，冰凍切片顯示肝細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)正常。(圖1)解凍后肝組織制備成微粒體，以不同濃度的翠酮為底物檢測CY3A4酶活性，證實(shí)酶活性保存完好。(圖2)圖1超低溫冷凍復(fù)蘇肝細(xì)胞(HH一03一011)圖2人肝細(xì)胞CYP45o3從酶活性(HH·03一011)二、人肝細(xì)胞色素P4503A4酶活性分析方法的建立和驗(yàn)證CYP3A4可催化翠酮的6一B輕化反應(yīng)，以HPLC方法可將該產(chǎn)物分離出來，從而計(jì)算出酶代謝活力。我們建立的技術(shù)平臺(tái)性能穩(wěn)定，符合美國FDA的標(biāo)準(zhǔn)

相應(yīng)濃度為橫坐標(biāo)(x)，用Agelinin.00化學(xué)工作軟件進(jìn)行線性回歸，求得標(biāo)準(zhǔn)方程:y=37.1605x6一1.21757，r:0月9986。結(jié)果證明，6B一輕基攀酮在.0064一4.125uM濃度范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。(圖4;表2)表2.CYP3A4酶動(dòng)力計(jì)算表(標(biāo)準(zhǔn)品6B一經(jīng)基翠酮)ProductInjectionFinalPeakAieaBaekErrorConeentrationVolumeInucbationat247nmCaleulation(%)恤M)伍l)Concentration恤M)129258516.03加125.0.0.01.420000000口勺尸勺﹃勺.勺口勺︸勺口勺伽M)0.0641.816383.942038.2118616.426836.526274.6711152.71290.081640.138850.253750.474811.015692.042184.1423127.577.63一1.65一7.98一1.39一0.860.42尹O，)︸勺1()3)6之5]:0廠.01.42圖4翠酮的代謝產(chǎn)物6B一輕基攀酮濃度與高效液相峰面積的線性方程直線相關(guān)公式曲線四、各樣本CYP3A4酶代謝米氏方程曲線翠丸酮由cYP3A4代謝生成6p一經(jīng)基翠丸酮，高效液相色譜(HPLC)法檢測6B一輕基翠丸酮生成量，內(nèi)標(biāo)校正后繪制出每個(gè)樣本CYP3A4酶代謝米氏方程曲線，得出最大反應(yīng)速度(mVx)a和米氏常數(shù)(凡)。反應(yīng)酶活力的指標(biāo)琉xa兩組差異有顯著性P(=.003)，而酶系特征性常數(shù)瓜值兩組無顯著差異P(=0.103)。(圖5，6;表3)


本文編號(hào)：2918106