發(fā)布時(shí)間：2020-11-18 01:29

　　 目的:觀(guān)察在使用恩替卡韋聯(lián)合強(qiáng)的松對(duì)HBV感染小鼠體內(nèi)病毒復(fù)制表達(dá)的影響，了解抗病毒的情況下使用強(qiáng)的松是否會(huì)導(dǎo)致HBV復(fù)制型小鼠體內(nèi)病毒復(fù)制表達(dá)增強(qiáng)。 方法： 1.檢測(cè)強(qiáng)的松對(duì)HBV感染小鼠體內(nèi)病毒復(fù)制表達(dá)的影響 采用高壓注射體內(nèi)轉(zhuǎn)染法將HBV復(fù)制型重組質(zhì)粒pAAV/HBV1.2導(dǎo)入雄性BALB/C小鼠，轉(zhuǎn)染后24h按體重、血清HBeAg水平對(duì)小鼠進(jìn)行配對(duì)，分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組給予強(qiáng)的松200μg/只,溶于0.2ml生理鹽水灌胃，對(duì)照組給予等量生理鹽水處理。于處理后第3、7、10、16、22天處死小鼠，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各3-4只。采用real-time PCR（實(shí)時(shí)熒光定量PCR）檢測(cè)小鼠血清HBV-DNA(Hepatitis B virus DNA,乙型肝炎病毒DNA)、（HBV-DNA檢測(cè)下限為500copies/ml）；化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清中HBeAg（Hepatitis B eAntigen，乙肝病毒e抗原）和HBsAg（Hepatitis B surface antigen，乙肝病毒表面抗原）。 2.檢測(cè)恩替卡韋對(duì)HBV感染小鼠體內(nèi)病毒復(fù)制表達(dá)的影響 造模方法同第一步，轉(zhuǎn)染后24h按體重、血清HBeAg水平對(duì)小鼠進(jìn)行配對(duì)，分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組給予恩替卡韋1.5μg/只，溶于0.2ml生理鹽水灌胃，對(duì)照組給予等量生理鹽水處理。于處理后第1、3、6、11天處死小鼠，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各3-4只。采用real-time PCR檢測(cè)小鼠血清HBV-DNA、化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清中HBeAg和HBsAg。 3.檢測(cè)在不同時(shí)間給予恩替卡韋和強(qiáng)的松對(duì)HBV感染小鼠體內(nèi)病毒復(fù)制表達(dá)的影響 造模方法同第一步，轉(zhuǎn)染24h后按體重、血清HBeAg水平對(duì)小鼠進(jìn)行配對(duì)，分為6組實(shí)驗(yàn)組和3組對(duì)照組，每組3~4只。其中4組實(shí)驗(yàn)組在分組當(dāng)天（本實(shí)驗(yàn)中定為第0天）給予恩替卡韋灌胃，1.5μg/只，溶于0.2ml生理鹽水中，并分別于第0、1、3、7天給于強(qiáng)的松處理，400μg/只，溶于0.2ml生理鹽水；剩余2組實(shí)驗(yàn)組在第0天給予強(qiáng)的松，并于第3、7天給予恩替卡韋；3組對(duì)照組分別設(shè)為恩替卡韋、強(qiáng)的松、生理鹽水對(duì)照組；每組均在給予強(qiáng)的松灌胃16天后處死，留存血清。采用real-time PCR檢測(cè)小鼠血清HBV-DNA�；瘜W(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清中HBeAg和HBsAg。 結(jié)果： 一、強(qiáng)的松對(duì)HBV感染小鼠體內(nèi)病毒復(fù)制表達(dá)的影響 1、強(qiáng)的松對(duì)小鼠血清HBV-DNA影響 1、實(shí)驗(yàn)第3、7、10天強(qiáng)的松實(shí)驗(yàn)組和生理鹽水對(duì)照組血清HBV-NDA檢測(cè)均為陽(yáng)性，其平均值達(dá)105copies/ml,無(wú)明顯差別；而在實(shí)驗(yàn)第16天兩組平均值分別為1.83×105,3.07×103copies/ml，兩組比較相差2lg,實(shí)驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)第22天兩組平均值分別為：2.03×104,1.99×103copies/ml，實(shí)驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組。 2、強(qiáng)的松對(duì)HBV小鼠血清HBsAg、HBeAg的影響 實(shí)驗(yàn)第3、7、10天實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠血清HBsAg無(wú)明顯差別；第16天實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠血清HBsAg平均值分別為：53.35IU/ml、1.97IU/ml，實(shí)驗(yàn)組高于對(duì)照組；第22天HBsAg水平仍高于對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)第3、7、10天小鼠血清實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組HBeAg無(wú)明顯差別；第16天小鼠血清HBeAg實(shí)驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組;第22天小鼠血清HBeAg實(shí)驗(yàn)組仍高于對(duì)照組。 二、恩替卡韋對(duì)HBV感染小鼠體內(nèi)病毒復(fù)制表達(dá)的影響 1、恩替卡韋對(duì)小鼠血清HBV-DNA影響 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠在第1天血清HBV-DNA均達(dá)104copies/ml，無(wú)明顯差異；第3天實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平均值為104copies/ml,105copies/ml,實(shí)驗(yàn)組明顯低于對(duì)照組；第6天檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組其中1只為陰性，2只為陽(yáng)性，其值為102copies/ml，對(duì)照組都為陽(yáng)性，其平均值為5.27×105copies/ml;實(shí)驗(yàn)組明顯低于對(duì)照組；第11天檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組均為陰性，對(duì)照組檢測(cè)均為陽(yáng)性平均值為104copies/ml，對(duì)照組明顯高于實(shí)驗(yàn)組。 2、恩替卡韋對(duì)小鼠血清HBsAg、HBeAg的影響 實(shí)驗(yàn)第1、3、6、11天實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠血清HBsAg水平無(wú)明顯差別；實(shí)驗(yàn)第1、3、6、11天小鼠血清實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組HBeAg水平無(wú)明顯差別。 三、恩替卡韋和強(qiáng)的松對(duì)HBV感染小鼠體內(nèi)病毒復(fù)制表達(dá)的影響 1、恩替卡韋和強(qiáng)的松對(duì)小鼠血清HBV-DNA的影響 生理鹽水對(duì)照組小鼠血清HBV-DNA平均值為2.1×103copies/ml；預(yù)先給予恩替卡韋的4組實(shí)驗(yàn)組中，在第7、3、1、0天給予強(qiáng)的松灌胃后，在試驗(yàn)終點(diǎn)HBV-DNA均為陰性；預(yù)先給予強(qiáng)的松的2組實(shí)驗(yàn)組中，在第3天給予恩替卡韋小鼠血清中HBV-DNA平均值為2.21×103copies/ml，與生理鹽水對(duì)照組無(wú)明顯差別；在第7天給予恩替卡韋組，小鼠血清HBV-DNA平均值為1.29×104copies/ml，高于生理鹽水對(duì)照組也明顯高于3天組。 2、恩替卡韋和強(qiáng)的松對(duì)小鼠血清HBsAg、HBeAg的影響 預(yù)先給予恩替卡韋，并分別在7、3、1、0天給予強(qiáng)的松的4組實(shí)驗(yàn)組，血清HBsAg水平均低于生理鹽水組，各組之間無(wú)明顯差異；預(yù)先給予強(qiáng)的松并分別于第3、7天給予恩替卡韋的2組實(shí)驗(yàn)組中，小鼠血清HBsAg水平都低于生理鹽水組，且兩組之間無(wú)明顯差異。預(yù)先給予恩替卡韋，并分別在7、3、1、0天給予強(qiáng)的松的4組實(shí)驗(yàn)組血清HBeAg水平都低于生理鹽水組，但其水平隨著恩替卡韋預(yù)先處理的時(shí)間延長(zhǎng)而降低；預(yù)先給予強(qiáng)的松并分別于第3、7天給予恩替卡韋的實(shí)驗(yàn)組小鼠，血清HBeAg都低于生理鹽水組，7天組稍高于3天組。 結(jié)論： HBV復(fù)制型小鼠在給予強(qiáng)的松處理之前預(yù)先給予或同時(shí)給予恩替卡韋處理可抑制HBV-DNA復(fù)制，有效避免強(qiáng)的松引起的HBV再激活。 給予強(qiáng)的松處理后延遲3天給予恩替卡韋即不能阻斷強(qiáng)的松對(duì)小鼠體內(nèi)HBV再激活，延遲越久效果越差。
【學(xué)位單位】：川北醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類(lèi)】：R512.62
【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
前言
材料與方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述：HBV 相關(guān)重型肝炎發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展及糖皮質(zhì)激素的應(yīng)用
    參考文獻(xiàn)
附錄
個(gè)人簡(jiǎn)歷

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2888169