慢性肝病是我國沉重的疾病負擔之一,肝硬化常是肝損傷進展的最終結(jié)局,造成較高的病殘率和病死率。不能對肝纖維化進行早期發(fā)現(xiàn)和實時干預(yù)評估一直是制約基礎(chǔ)研究走向臨床的“瓶頸”�，F(xiàn)在已有大量的實驗證據(jù)表明肝纖維化伴隨著血管新生,與免疫、炎癥等病理生理過程關(guān)系密切。整合素αvβ3在肝星狀細胞活化和血管新生中起著重要作用。本課題的研究目的是通過高分辨率小動物超聲系統(tǒng)用以靶向環(huán)肽標記的超聲增強造影劑,觀察正常大鼠和纖維化大鼠肝臟超聲增強前后的聲像變化,分析不同時期纖維化大鼠肝臟聲像差異和肝組織病理分期的相關(guān)性；建立整合素αvβ3受體的靶向超聲增強影像與肝纖維化程度的關(guān)系；為肝纖維化早期診斷和治療評價探索可靠實用的無創(chuàng)性方法。 研究內(nèi)容包括如下幾個方面：第一部分是體外實驗,包括大鼠肝星狀細胞(HSC)的分離、培養(yǎng)、鑒定和體外活化,對整合素αvβ3在HSC的表達情況進行定性、定位和定量分析；通過固相合成法合成c(RGDyK)環(huán)肽和c(RGAyk)假肽,ESI-MS測定分子量,HPLC進行純度分析,并研究其與活化HSC結(jié)合的生物化學特征。第二部分是硫代乙酰胺(TAA)誘導大鼠肝纖維化模型的建立,以及整合素αvβ3的表達情況和血管新生的研究。第三部分是Biotin-PEG-c(RGDyK)/c(RGAyK)的合成,與微泡的結(jié)合及高分辨率小動物超聲系統(tǒng)對不同纖維化時期的大鼠肝臟進行超聲造影,取大鼠肝組織進行病理檢查。 研究結(jié)果：體外活化的大鼠HSC中整合素αvβ3表達顯著增高,固相合成的整合素αvβ3受體RGD配基能與活化HSC發(fā)生受體配基樣結(jié)合,人工修飾的Biotin-PEG-c(RGDyK)保持RGD配基特性,靶向超聲增強造影提示,纖維化大鼠肝臟對Biotin-PEG-c(RGDyK)標記的靶向微泡攝取明顯高于正常大鼠,隨著纖維化的進展,聲強信號也顯著增強,差別具有統(tǒng)計學意義。 結(jié)論：靶向超聲增強造影可能成為檢測早期肝纖維化的有效方法。
【學位單位】：復(fù)旦大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2010
【中圖分類】：R575.2
【部分圖文】：

實驗設(shè)計圖解

圖2.新分離的HSC為圓形(x40)cs形態(tài)學觀察養(yǎng)6小時后細胞貼壁率超過50%，培養(yǎng)48小時絕伸出偽足。72小時后部分細胞形態(tài)變化，伸展為減少(圖3一A)，細胞培養(yǎng)10天后細胞增殖明顯，細，胞漿內(nèi)折光顆粒減少或消失。傳代的大鼠HSC生大明顯為肌成纖維母樣細胞(MFB)，傳3一4代細胞逐

培養(yǎng)活化的HSC呈星形和不規(guī)則形(X100)
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本文編號：2885482