發(fā)布時間：2020-11-15 12:58

　　 目的:對乙酰氨基酚(APAP)攝入過量是引起急性肝衰竭的重要原因。肝細胞損傷后,單核細胞浸潤到肝臟,參與炎癥反應;炎性單核細胞隨后轉(zhuǎn)化為修復型巨噬細胞,促進損傷修復。目前調(diào)控單核巨噬細胞功能轉(zhuǎn)化的機制仍不清楚。前期研究發(fā)現(xiàn),中腦星形膠質(zhì)細胞來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(MANF)在小鼠髓系細胞中缺失,會延緩APAP誘導的肝臟損傷(AILI)修復,降低損傷恢復期修復型巨噬細胞的比例和數(shù)量。我們推測,MANF通過調(diào)控肝臟單核巨噬細胞功能來促進AILI修復。本課題使用髓系細胞特異性MANF敲除鼠,hrMANF,闡釋單核巨噬細胞來源的MANF促進AILI修復;通過流式分析,qPCR等揭示MANF調(diào)控單核巨噬由促炎型向修復型轉(zhuǎn)化的分子機制,單核巨噬細胞的調(diào)控機制的闡明,將為以MANF和單核巨噬細胞為靶點治療藥物性肝損傷提供理論和實驗依據(jù)。方法:構(gòu)建髓系細胞特異性缺失MANF的基因缺陷小鼠MANF~(fl/fl)Lyz2-Cre-T(MYEL manf~(-/-))及肝細胞特異性缺失MANF的基因缺陷型小鼠MANF~(fl/fl)Alb-Cre-T(HEPA manf~(-/-));給小鼠腹腔注射APAP(300mg/kg)誘導實驗性APAP誘導肝損傷(AILI)模型;利用流式細胞術檢測MANF特異性敲除小鼠肝臟免疫細胞群體分布是否發(fā)生變化;通過檢測血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)含量及肝組織HE染色評價肝損傷嚴重程度;qPCR方法檢測AILI小鼠肝組織炎性細胞因子及趨化因子的表達;增殖特異性抗體Ki67對肝臟粒細胞巨噬細胞染色,檢測細胞增殖情況;分離小鼠外周血白細胞,檢測CCR2~+單核細胞的比例;AILI修復期通過尾靜脈注射外源補充人源重組MANF,檢測小鼠肝損傷情況。結(jié)果:MANF缺失不影響肝臟免疫細胞群體分布;MYEL manf~(-/-)鼠肝臟損傷恢復受阻;MYEL manf~(-/-)鼠肝臟炎癥程度高于C57BL/6對照鼠;MYEL manf~(-/-)鼠注射APAP后肝臟浸潤的單核細胞數(shù)量高于野生鼠,但損傷后期Ly6C~(low)修復型巨噬細胞比例顯著低于野生型鼠;MANF缺失后MYEL manf~(-/-)鼠肝臟單核/巨噬細胞增殖能力顯著增強;MYEL manf~(-/-)鼠外周血CCR2~+單核細胞增高;hrMANF促進肝損傷修復。結(jié)論:MANF可能是AILI中一個重要調(diào)節(jié)分子,它通過抑制單核細胞表達CCR2,調(diào)節(jié)單核細胞浸潤;并介導促炎性Ly6C~(hi)巨噬細胞向修復型Ly6C~(low)巨噬細胞轉(zhuǎn)換,促進肝臟損傷修復。
【學位單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R575
【部分圖文】：

25圖 1 WT 鼠、HEPA manf-/-鼠及 MYEL manf-/-鼠肝臟淋巴細胞比例。igure1 .The proportion of liver lymphocytes in WT mice HEPA manf-/-and MYEL manf-/-mic

安徽醫(yī)科大學碩士學位論文通過 WT 對照鼠，HEPAmanf-/-鼠和 MYELmanf-/-鼠的對比，我們發(fā)現(xiàn)在損修復期（48h，72h，96h）MYEL manf-/-鼠的血清中 ALT 水平較高，而 HEPAanf-/-鼠和 WT 對照鼠相比無顯著性差異。肝臟組織 H&E 染色也顯示在損傷修期， MYEL manf-/-鼠肝臟仍有大量的淋巴細胞浸潤和壞死肝細胞，而 WT 對鼠和 HEPAmanf-/-鼠肝臟組織已基本修復。結(jié)果表明肝細胞缺失 MANF 對ILI 過程中肝損傷及肝臟修復無影響，但是髓系細胞缺失 MANF 后影響了小鼠臟的修復能力。

圖 3. APAP 注射后 MYELmanf-/-鼠和 WT 鼠肝臟中相關基因的表達水平。Fig.3. Expression levels of genes related to liver injury in MYELmanf-/-mice and WT mice afterAPAP challenge.小鼠腹腔注射 APAP（300mg/kg）誘導急性肝損傷，于不同時間點（0h，12h，24h，48h，72h，96h）收集小鼠的肝組織，通過 RT-PCR 檢測肝臟中炎性細胞因子 TNF-α，IL-1β，NOS2，Ym-1，以及細胞因子 IL-10 和 CD86 的表達情況，結(jié)果如圖三所示。3.4 MYEL manf-/-鼠注射 APAP 后肝臟浸潤的單核細胞數(shù)量高于野生鼠，但損傷后期 Ly6Clow修復型巨噬細胞比例顯著低于野生型鼠在 APAP 誘導的肝損傷模型中，粒細胞首先浸潤至肝臟參與炎癥反應，而巨噬細胞由于其異質(zhì)性，對小鼠的損傷及修復發(fā)揮著至關重要的作用[23]。因此我們猜測 MYEL manf-/-鼠在 AILI 過程中肝損傷修復受阻且伴隨著炎癥加強是否與這
【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 付威;姜英;王婷玉;張赫;董佳琦;萬朋;;巨噬細胞極化與腫瘤的研究進展[J];吉林醫(yī)藥學院學報;2019年02期

2 廖成水;毛福超;程相朝;;巨噬細胞極化在微生物感染中的作用研究進展[J];中國預防獸醫(yī)學報;2019年03期

3 徐曉偉;魏建超;劉珂;邵東華;李蓓蓓;曹瑞兵;陳溥言;馬志永;胡敬東;邱亞峰;;不同激活狀態(tài)的巨噬細胞對流行性乙型腦炎病毒感染的影響[J];中國動物傳染病學報;2019年02期

4 邢士剛;;巨噬細胞在慢性阻塞性肺疾病發(fā)病機制中的作用研究[J];中國實用醫(yī)藥;2019年12期

5 程相朝;毛福超;;巨噬細胞極化形成的影響因素研究進展[J];動物醫(yī)學進展;2019年06期

6 巢汝;黃靚;屈順林;張弛;;巨噬細胞能量代謝與動脈粥樣硬化[J];生命的化學;2018年03期

7 崔凡;穰真;王有為;楊戈;;AIDS患者巨噬細胞對白念珠菌的吞噬和滅活功能研究[J];中國麻風皮膚病雜志;2017年04期

8 孟董超;王東;宋娟;盧彥珍;;巨噬細胞極化在冠狀動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中的作用研究進展[J];長治醫(yī)學院學報;2017年02期

9 李雪巖;楊玉玉;陳君;;中藥抗巨噬細胞泡沫化的研究進展[J];藥學與臨床研究;2017年05期

10 袁鋒;尚茹茹;張錦;溫婷;李愛萍;劉曉紅;;巨噬細胞極化與動脈粥樣硬化[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2015年22期

相關博士學位論文 前10條

1 林妍;let-7a-2-3p/PIK3CG模塊對結(jié)核分枝桿菌感染的巨噬細胞凋亡水平的動態(tài)調(diào)控機制研究[D];吉林大學;2019年

2 琴瀚姣;PI3Kγ抑制劑通過調(diào)控腫瘤相關巨噬細胞提高CA4納米藥物對乳腺癌療效的研究[D];吉林大學;2019年

3 沈東輝;NF-κB調(diào)控巨噬細胞亞型在實驗性自身免疫性神經(jīng)炎中的作用及其機制研究[D];吉林大學;2019年

4 張思悅;基于自噬調(diào)控腫瘤相關巨噬細胞表型極化的金納米�？鼓[瘤機制研究[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學;2019年

5 李天亮;LAPF促進抗細菌天然免疫反應及其機制研究[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學;2019年

6 劉國科;泛素連接酶Nedd4l對巨噬細胞Toll樣受體信號轉(zhuǎn)導的影響[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學;2019年

7 楊倩;骨髓來源的Ly6C~-巨噬細胞在急性腎損傷慢性化轉(zhuǎn)歸中的作用及機制研究[D];華中科技大學;2019年

8 葉子明;LncRNA MIAT通過miR-149-5p靶向調(diào)控CD47導致巨噬細胞胞葬障礙促進動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定的機制[D];華中科技大學;2019年

9 李華;結(jié)核分枝桿菌誘導的人巨噬細胞蛋白質(zhì)組研究及快生菌構(gòu)建探索[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2017年

10 范婷婷;TIPE2調(diào)控調(diào)節(jié)性T細胞胸腺外遷及M2巨噬細胞極化的分子機制研究[D];中國科學院大學(中國科學院深圳先進技術研究院);2018年

相關碩士學位論文 前10條

1 張玉薇;基于元分析的結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細胞免疫應答關鍵基因的挖掘及驗證[D];吉林大學;2019年

2 葛秋月;人纖溶酶原絲氨酸蛋白酶結(jié)構(gòu)域制備及其對巨噬細胞極化影響的探究[D];吉林大學;2019年

3 習大林;BLP耐受通過上調(diào)MARCO表達增強巨噬細胞吞噬能力的研究[D];南方醫(yī)科大學;2019年

4 王文明;骨關節(jié)炎患者CD163+巨噬細胞的分布、表型及臨床相關性分析[D];安徽醫(yī)科大學;2019年

5 孟慶元;右美托咪定對巨噬細胞糖酵解的影響及潛在機制研究[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學;2019年

6 周旋;富含亮氨酸/賴氨酸抗菌肽調(diào)控腫瘤相關巨噬細胞極化和抑制乳腺癌轉(zhuǎn)移的作用研究[D];遼寧師范大學;2019年

7 吳磊;AngⅡ通過上調(diào)Cx43活化NF-κB信號通路誘導巨噬細胞M1型極化的作用研究[D];石河子大學;2019年

8 侯九洲;亞精胺對巨噬細胞極化的影響及其調(diào)控肝癌轉(zhuǎn)移研究[D];河南大學;2019年

9 張夢迪;桑黃多酚對巨噬細胞和脂肪細胞間交互作用的影響[D];河南大學;2019年

10 榮建芳;ROS和HIF-1α的相互作用調(diào)控幽門螺桿菌誘導的巨噬細胞極化[D];南昌大學;2019年

本文編號：2884785