目的：非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)近年來發(fā)病率逐年增高,是一種嚴(yán)重威脅著人類健康的常見疾病，是在患者無過量飲酒史的情況下，發(fā)生的與酒精性肝病(ALD)相似的肝臟病理學(xué)變化，其病理生理改變主要是肝細(xì)胞發(fā)生炎癥、壞死和凋亡,病程逐漸向脂肪性肝炎、肝纖維化，肝硬化發(fā)展�，F(xiàn)有研究認(rèn)為非酒精性肝病,是一種與遺傳基因易感性以及胰島素抵抗密切相關(guān)的應(yīng)激性代謝性肝損傷。本研究通過建立非酒精性脂肪性肝病大鼠模型，隨著其病變進(jìn)展在不同時間點觀察肝細(xì)胞凋亡，炎癥，纖維化，以及相關(guān)的蛋白BCL-2、NF-KB、血管緊素Ⅱ-1受體的表達(dá)情況，從而探討以上三種相關(guān)蛋白在非酒精性肝病中的作用及其機(jī)制，并研究通過抑制NF-KB表達(dá)后，所致的肝臟病理形態(tài)變化及BCL-2,血管緊素ΙΙ-1受體的表達(dá)改變情況，為研究NAFLD發(fā)病機(jī)制及治療方案提供新的研究佐證。方法：健康成年雄性Spague-Dawlay(SD)大鼠42只按隨機(jī)表為三組3組：正常組18只（普通飼料喂養(yǎng)），模型組18只（高脂飲食喂養(yǎng)），干預(yù)組6只（高脂飲食飼養(yǎng)10周后PDTC腹腔注射4周），分別于6,10,14周末處死各組大鼠6只，每組大鼠處死后以心臟采血，并測定各組大鼠血脂和轉(zhuǎn)氨酶值，取肝組織標(biāo)本測定肝指數(shù)（處死大鼠開腹后迅速取出肝臟，稱肝濕重，（計算方法:肝濕質(zhì)量/體質(zhì)量×100%），固定并切片后蘇木精-伊紅（HE）染色觀察肝組織病理改變（脂肪變，炎癥，纖維化等）；采用TUNEL法測肝細(xì)胞凋亡百分?jǐn)?shù)法測肝細(xì)胞凋亡百分?jǐn)?shù)；免疫組織化學(xué)法檢測Bcl-2，NF-KB在肝組織中表達(dá)情況；RT-PCR法(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)檢測肝臟血管緊張素二-1受體（AT1R）的表達(dá)。計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉx±S）表示，P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。不同時間段正常組與模型組組間比較，模型組與正常組組間比較，14周干預(yù)組，模型組，正常組三組比較采用方差分析，并進(jìn)行方差齊性檢驗，齊者采用單因素方差分析。結(jié)果：進(jìn)行實驗的42只大鼠全部存活，都進(jìn)入結(jié)果進(jìn)行分析。⑴隨著時間的延長，6周末及10周末均成功構(gòu)建非酒精性脂肪肝及非酒精性肝炎模型，14周末模型組出現(xiàn)4只大鼠肝纖維化，干預(yù)組出現(xiàn)1只大鼠纖維化。（2）6、10、14周模型組大鼠在肝濕變數(shù)、血脂、血清轉(zhuǎn)氨酶水平等方面逐步增高，肝組織脂肪變、炎癥程度逐漸加重，后期出現(xiàn)纖維化表現(xiàn)；而干預(yù)組在上述方面亦有增高。（3）HE染色提示模型組6、10、14周動物肝組織出現(xiàn)脂肪變性并隨造模時間的延長而加重，都明顯高于正常組(P0.01);10組大鼠肝臟可見少許氣球樣肝細(xì)胞及程度不等的肝細(xì)胞壞死和小葉內(nèi)炎癥、腺泡內(nèi)散在個別點灶狀壞死，部分可見點灶狀壞死增多，門管區(qū)輕中度炎癥。模型組6,10周大鼠未見肝組織纖維化，但造模14周及干預(yù)組14周分別有4/6、1/6只大鼠出現(xiàn)肝細(xì)胞竇周纖維化。6,10,14周模型組大鼠的肝臟活動度積分均高于正常組(P0.01），14周末時，干預(yù)組肝組織的活動度積分低于模型組(P0.05）。(4)肝細(xì)胞凋亡百分?jǐn)?shù)隨著造模時間的延長而增加,模型組6周、10周、14周分別為11.15±0.82、16.19±1.23、19.23±2.31，正常組6周、10周、14周分別為1.11±0.15、1.26±0.11、1.15±0.20,其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；⑷蛋白免疫組化顯示：BCL-2蛋白在模型組的細(xì)胞漿，細(xì)胞膜呈棕色表達(dá)，并隨著造模時間的延長，染色程度加深，面積增大；Bcl-2在正常組的表達(dá)均為散在弱陽性，模型組組6、10、14周陽性細(xì)胞數(shù)漸增加，干預(yù)組Bcl-2表達(dá)低于14周模型組(P0.05),NF-КB細(xì)胞染色呈黃色或綜黃色為陽性，定位于細(xì)胞質(zhì)和（或）細(xì)胞核，模型組6、10、14周大鼠肝細(xì)胞內(nèi)可見NF-КB明顯活化，相對于同時間段正常組表達(dá)之間差別有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)，而且隨造模時間延長，其表達(dá)隨之增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)，14周干預(yù)組表達(dá)受較14周造模組受到抑制，但是較正常組比較其表達(dá)也是明顯增高的(P0.05)。(5)RT-PCR法檢測肝臟AT1RmRNA顯示：AT1RmRNA表達(dá)量在造模組中隨著造模時間的延長，表達(dá)量逐漸增加，且每兩組模型組組間都存在統(tǒng)計學(xué)差異（p0.05）造模組AT1RmRNA表達(dá)量均明顯高于同時間段正常組（p0.01），14周末，模型組，正常組，干預(yù)組三組間AT1RmRNA表達(dá)量存在差異（p0.05）。結(jié)論：1.在非酒精性脂肪性肝病大鼠模型中，隨著肝臟病變的加重,其細(xì)胞凋亡,炎癥及纖維化愈加明顯,其表現(xiàn)為Bcl-2,NF-KB,血管緊素ΙΙ-1受體的表達(dá)增加。2在NAFLD發(fā)生發(fā)展過程中對NF-KB進(jìn)行抑制調(diào)控后,NAFLD肝細(xì)胞炎癥,纖維化也受到抑制,同時也出現(xiàn)Bcl-2,血管緊素ΙΙ-1受體表達(dá)的降低,NF-KB可能通過調(diào)節(jié)Bcl-2,血管緊素ΙΙ-1受體,的表達(dá)在NAFLD病程中發(fā)揮作用。
【學(xué)位單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R575.5
【部分圖文】：

的 PCR 擴(kuò)增結(jié)果分析（見表 6）用瓊脂糖電泳分析，在約 278bp 處有明亮的，與預(yù)計長度一致。AT1RmRNA 在大鼠正10,14 周模型組 AT1RmRNA 含量與相應(yīng)的正顯著的，且隨造模時間的增加，其 AT1Rm0.01)，10 周后加入藥物干預(yù)，其表達(dá)低于相正常組水平，提示藥物對脂肪肝的治療作用因表達(dá)。0bp0bp0bpM 1 2 3 4 5 6 7

注：Pa＜0.01,與正常組比較；Pb＜0.05,與模型組 6 周比較；Pc＜0.05，與模型組10 周比較；Pd＜0.05，與模型組 14 周比較;Pe＜0.05;與干預(yù)組 14 周比較。Charge 6 Comparison of AT1R mRNA expression rat liver(xˉ±S ,n=6)5. HE 染色光鏡觀察大鼠肝組織結(jié)果 （HE 染色 ×100）

注：Pa＜0.01,與正常組比較；Pb＜0.05,與模型組 6 周比較；Pc＜0.05，與模型組10 周比較；Pd＜0.05，與模型組 14 周比較;Pe＜0.05;與干預(yù)組 14 周比較。Charge 6 Comparison of AT1R mRNA expression rat liver(xˉ±S ,n=6)5. HE 染色光鏡觀察大鼠肝組織結(jié)果 （HE 染色 ×100）
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 趙紅念;楊開明;;腦創(chuàng)傷后NF-kB的作用及其細(xì)胞凋亡的基因調(diào)控[J];大理學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué));2006年02期

2 胡嵐,鄒繼珍;細(xì)胞凋亡與BCL-2在葛根素干預(yù)新生鼠缺血缺氧性腦損傷模型中的表達(dá)[J];北京醫(yī)學(xué);2004年02期

3 崔香丹;金武丕;孟繁平;;Bcl-2和NF-kB在大鼠酒精性肝病中的表達(dá)及相關(guān)性[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2009年01期

4 蘇劍東;吳靈飛;;NF-kB與細(xì)胞凋亡[J];世界華人消化雜志;2007年12期

5 范丹丹;翟桂蘭;祝煥林;;牛磺酸對動脈粥樣硬化兔NF-KB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的影響[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2013年17期

6 王金平;;宮頸鱗狀上皮癌化療前后BCL-2的變化[J];中國婦幼保健;2011年24期

7 張新華;南欣榮;;Bcl-2、NF-KB在腮腺腺樣囊性癌中的表達(dá)及臨床意義[J];中國美容醫(yī)學(xué);2013年12期

8 余丹;程輝;易雪;張婷;;黃芪對老年急性髓系白血病患者BCL-2家族凋亡因子的相關(guān)影響[J];哈爾濱醫(yī)藥;2016年05期

9 江林敏;鄢潔;熊彬;;低氧誘導(dǎo)因子-1a對脂多糖導(dǎo)致的急性肺損傷NF-kB表達(dá)的影響[J];中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志;2017年07期

10 張鑫;閆珍;潘磊;陳培豐;;清熱消積方對荷瘤鼠腫瘤組織NF-KB蛋白表達(dá)的影響[J];陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2015年05期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王茜;黃柏水煎液對下肢靜脈性潰瘍愈合中NF-KB、鋅指蛋白A20表達(dá)的影響[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2018年

2 孫晶;基于對相關(guān)細(xì)胞因子及NF-KB的調(diào)控探討婦炎寧湯治療慢性盆腔炎的免疫學(xué)機(jī)制[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2015年

3 王紅;實驗性近視眼細(xì)胞凋亡及相關(guān)凋亡基因BCL-2和細(xì)胞因子BFGF的研究[D];山東大學(xué);2005年

4 趙鋼;阿托伐他汀抑制NF-kB活化機(jī)制的實驗研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2007年

5 黃浩杰;轉(zhuǎn)錄因子NF-kB信號通路在胰腺炎發(fā)生中的機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

6 劉岳;BCL-2與人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤生物學(xué)特性及替莫唑胺敏感性的關(guān)系[D];武漢大學(xué);2014年

7 王冬冬;中國明對蝦核轉(zhuǎn)錄因子NF-kB家族基因在免疫調(diào)控中的功能研究[D];中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2012年

8 李寧;人參提取物（人參總皂苷）對慢性阻塞性肺疾病肺脾氣虛型大鼠免疫功能及NF-kB信號傳導(dǎo)途徑機(jī)制研究[D];長春中醫(yī)藥大學(xué);2015年

9 趙丹青;NF-kB通路核心分子在外周T細(xì)胞淋巴瘤及彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中的預(yù)后研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

10 肖乾;BEX1拮抗BCL-2促進(jìn)Imatinib誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[D];浙江大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 石海燕;BCL-2，NF-kB，血管緊張素I I-I受體在大鼠非酒精性脂肪肝病中的作用及其機(jī)制研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2013年

2 范丹丹;�；撬釋用}粥樣硬化兔NF-KB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的影響[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2013年

3 李娟;BCL-2、CD34在翼狀胬肉組織中的表達(dá)研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2013年

4 張宇;HBV相關(guān)彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤臨床特征、BCL-2、CMYC表達(dá)及預(yù)后分析[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2017年

5 劉慶清;組蛋白去乙�；冈谙∈髿獾赖谋磉_(dá)及維生素D和地塞米松對其影響的研究[D];西南醫(yī)科大學(xué);2017年

6 張雷英;子宮內(nèi)膜癌中EGFR、NF-KB蛋白表達(dá)及EGFR基因突變的研究[D];南昌大學(xué);2012年

7 溫臣婷;NF-kB在春季角結(jié)膜炎中的表達(dá)[D];華中科技大學(xué);2007年

8 陳偉;COX-2與BCL-2在分化型甲狀腺癌組織中的表達(dá)及意義[D];華中科技大學(xué);2007年

9 宋建治;PTEN、BCL-2在骨肉瘤中的表達(dá)及其意義[D];華中科技大學(xué);2006年

10 王惠;丙泊酚對間歇缺氧內(nèi)皮細(xì)胞NF-KB激活及HIF-1α mRNA表達(dá)作用研究[D];山東大學(xué);2012年

本文編號：2882697