目的：非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)近年來發(fā)病率逐年增高,是一種嚴重威脅著人類健康的常見疾病，是在患者無過量飲酒史的情況下，發(fā)生的與酒精性肝病(ALD)相似的肝臟病理學變化，其病理生理改變主要是肝細胞發(fā)生炎癥、壞死和凋亡,病程逐漸向脂肪性肝炎、肝纖維化，肝硬化發(fā)展�，F(xiàn)有研究認為非酒精性肝病,是一種與遺傳基因易感性以及胰島素抵抗密切相關的應激性代謝性肝損傷。本研究通過建立非酒精性脂肪性肝病大鼠模型，隨著其病變進展在不同時間點觀察肝細胞凋亡，炎癥，纖維化，以及相關的蛋白BCL-2、NF-KB、血管緊素Ⅱ-1受體的表達情況，從而探討以上三種相關蛋白在非酒精性肝病中的作用及其機制，并研究通過抑制NF-KB表達后，所致的肝臟病理形態(tài)變化及BCL-2,血管緊素ΙΙ-1受體的表達改變情況，為研究NAFLD發(fā)病機制及治療方案提供新的研究佐證。方法：健康成年雄性Spague-Dawlay(SD)大鼠42只按隨機表為三組3組：正常組18只（普通飼料喂養(yǎng)），模型組18只（高脂飲食喂養(yǎng)），干預組6只（高脂飲食飼養(yǎng)10周后PDTC腹腔注射4周），分別于6,10,14周末處死各組大鼠6只，每組大鼠處死后以心臟采血，并測定各組大鼠血脂和轉氨酶值，取肝組織標本測定肝指數(shù)（處死大鼠開腹后迅速取出肝臟，稱肝濕重，（計算方法:肝濕質量/體質量×100%），固定并切片后蘇木精-伊紅（HE）染色觀察肝組織病理改變（脂肪變，炎癥，纖維化等）；采用TUNEL法測肝細胞凋亡百分數(shù)法測肝細胞凋亡百分數(shù)；免疫組織化學法檢測Bcl-2，NF-KB在肝組織中表達情況；RT-PCR法(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)檢測肝臟血管緊張素二-1受體（AT1R）的表達。計量資料用均數(shù)±標準差（ˉx±S）表示，P＜0.05有統(tǒng)計學意義。不同時間段正常組與模型組組間比較，模型組與正常組組間比較，14周干預組，模型組，正常組三組比較采用方差分析，并進行方差齊性檢驗，齊者采用單因素方差分析。結果：進行實驗的42只大鼠全部存活，都進入結果進行分析。⑴隨著時間的延長，6周末及10周末均成功構建非酒精性脂肪肝及非酒精性肝炎模型，14周末模型組出現(xiàn)4只大鼠肝纖維化，干預組出現(xiàn)1只大鼠纖維化。（2）6、10、14周模型組大鼠在肝濕變數(shù)、血脂、血清轉氨酶水平等方面逐步增高，肝組織脂肪變、炎癥程度逐漸加重，后期出現(xiàn)纖維化表現(xiàn)；而干預組在上述方面亦有增高。（3）HE染色提示模型組6、10、14周動物肝組織出現(xiàn)脂肪變性并隨造模時間的延長而加重，都明顯高于正常組(P0.01);10組大鼠肝臟可見少許氣球樣肝細胞及程度不等的肝細胞壞死和小葉內炎癥、腺泡內散在個別點灶狀壞死，部分可見點灶狀壞死增多，門管區(qū)輕中度炎癥。模型組6,10周大鼠未見肝組織纖維化，但造模14周及干預組14周分別有4/6、1/6只大鼠出現(xiàn)肝細胞竇周纖維化。6,10,14周模型組大鼠的肝臟活動度積分均高于正常組(P0.01），14周末時，干預組肝組織的活動度積分低于模型組(P0.05）。(4)肝細胞凋亡百分數(shù)隨著造模時間的延長而增加,模型組6周、10周、14周分別為11.15±0.82、16.19±1.23、19.23±2.31，正常組6周、10周、14周分別為1.11±0.15、1.26±0.11、1.15±0.20,其差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)；⑷蛋白免疫組化顯示：BCL-2蛋白在模型組的細胞漿，細胞膜呈棕色表達，并隨著造模時間的延長，染色程度加深，面積增大；Bcl-2在正常組的表達均為散在弱陽性，模型組組6、10、14周陽性細胞數(shù)漸增加，干預組Bcl-2表達低于14周模型組(P0.05),NF-КB細胞染色呈黃色或綜黃色為陽性，定位于細胞質和（或）細胞核，模型組6、10、14周大鼠肝細胞內可見NF-КB明顯活化，相對于同時間段正常組表達之間差別有明顯統(tǒng)計學意義(P0.01)，而且隨造模時間延長，其表達隨之增多，差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)，14周干預組表達受較14周造模組受到抑制，但是較正常組比較其表達也是明顯增高的(P0.05)。(5)RT-PCR法檢測肝臟AT1RmRNA顯示：AT1RmRNA表達量在造模組中隨著造模時間的延長，表達量逐漸增加，且每兩組模型組組間都存在統(tǒng)計學差異（p0.05）造模組AT1RmRNA表達量均明顯高于同時間段正常組（p0.01），14周末，模型組，正常組，干預組三組間AT1RmRNA表達量存在差異（p0.05）。結論：1.在非酒精性脂肪性肝病大鼠模型中，隨著肝臟病變的加重,其細胞凋亡,炎癥及纖維化愈加明顯,其表現(xiàn)為Bcl-2,NF-KB,血管緊素ΙΙ-1受體的表達增加。2在NAFLD發(fā)生發(fā)展過程中對NF-KB進行抑制調控后,NAFLD肝細胞炎癥,纖維化也受到抑制,同時也出現(xiàn)Bcl-2,血管緊素ΙΙ-1受體表達的降低,NF-KB可能通過調節(jié)Bcl-2,血管緊素ΙΙ-1受體,的表達在NAFLD病程中發(fā)揮作用。
【學位單位】：瀘州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2013
【中圖分類】：R575.5
【部分圖文】：

的 PCR 擴增結果分析（見表 6）用瓊脂糖電泳分析，在約 278bp 處有明亮的，與預計長度一致。AT1RmRNA 在大鼠正10,14 周模型組 AT1RmRNA 含量與相應的正顯著的，且隨造模時間的增加，其 AT1Rm0.01)，10 周后加入藥物干預，其表達低于相正常組水平，提示藥物對脂肪肝的治療作用因表達。0bp0bp0bpM 1 2 3 4 5 6 7

注：Pa＜0.01,與正常組比較；Pb＜0.05,與模型組 6 周比較；Pc＜0.05，與模型組10 周比較；Pd＜0.05，與模型組 14 周比較;Pe＜0.05;與干預組 14 周比較。Charge 6 Comparison of AT1R mRNA expression rat liver(xˉ±S ,n=6)5. HE 染色光鏡觀察大鼠肝組織結果 （HE 染色 ×100）

注：Pa＜0.01,與正常組比較；Pb＜0.05,與模型組 6 周比較；Pc＜0.05，與模型組10 周比較；Pd＜0.05，與模型組 14 周比較;Pe＜0.05;與干預組 14 周比較。Charge 6 Comparison of AT1R mRNA expression rat liver(xˉ±S ,n=6)5. HE 染色光鏡觀察大鼠肝組織結果 （HE 染色 ×100）
【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 趙紅念;楊開明;;腦創(chuàng)傷后NF-kB的作用及其細胞凋亡的基因調控[J];大理學院學報(自然科學);2006年02期

2 胡嵐,鄒繼珍;細胞凋亡與BCL-2在葛根素干預新生鼠缺血缺氧性腦損傷模型中的表達[J];北京醫(yī)學;2004年02期

3 崔香丹;金武丕;孟繁平;;Bcl-2和NF-kB在大鼠酒精性肝病中的表達及相關性[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志;2009年01期

4 蘇劍東;吳靈飛;;NF-kB與細胞凋亡[J];世界華人消化雜志;2007年12期

5 范丹丹;翟桂蘭;祝煥林;;�；撬釋用}粥樣硬化兔NF-KB信號轉導途徑的影響[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志;2013年17期

6 王金平;;宮頸鱗狀上皮癌化療前后BCL-2的變化[J];中國婦幼保健;2011年24期

7 張新華;南欣榮;;Bcl-2、NF-KB在腮腺腺樣囊性癌中的表達及臨床意義[J];中國美容醫(yī)學;2013年12期

8 余丹;程輝;易雪;張婷;;黃芪對老年急性髓系白血病患者BCL-2家族凋亡因子的相關影響[J];哈爾濱醫(yī)藥;2016年05期

9 江林敏;鄢潔;熊彬;;低氧誘導因子-1a對脂多糖導致的急性肺損傷NF-kB表達的影響[J];中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志;2017年07期

10 張鑫;閆珍;潘磊;陳培豐;;清熱消積方對荷瘤鼠腫瘤組織NF-KB蛋白表達的影響[J];陜西中醫(yī)學院學報;2015年05期

相關博士學位論文 前10條

1 王茜;黃柏水煎液對下肢靜脈性潰瘍愈合中NF-KB、鋅指蛋白A20表達的影響[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2018年

2 孫晶;基于對相關細胞因子及NF-KB的調控探討婦炎寧湯治療慢性盆腔炎的免疫學機制[D];遼寧中醫(yī)藥大學;2015年

3 王紅;實驗性近視眼細胞凋亡及相關凋亡基因BCL-2和細胞因子BFGF的研究[D];山東大學;2005年

4 趙鋼;阿托伐他汀抑制NF-kB活化機制的實驗研究[D];中國醫(yī)科大學;2007年

5 黃浩杰;轉錄因子NF-kB信號通路在胰腺炎發(fā)生中的機制研究[D];第二軍醫(yī)大學;2012年

6 劉岳;BCL-2與人腦膠質細胞瘤生物學特性及替莫唑胺敏感性的關系[D];武漢大學;2014年

7 王冬冬;中國明對蝦核轉錄因子NF-kB家族基因在免疫調控中的功能研究[D];中國科學院研究生院（海洋研究所）;2012年

8 李寧;人參提取物（人參總皂苷）對慢性阻塞性肺疾病肺脾氣虛型大鼠免疫功能及NF-kB信號傳導途徑機制研究[D];長春中醫(yī)藥大學;2015年

9 趙丹青;NF-kB通路核心分子在外周T細胞淋巴瘤及彌漫大B細胞淋巴瘤中的預后研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2014年

10 肖乾;BEX1拮抗BCL-2促進Imatinib誘導的細胞凋亡[D];浙江大學;2014年

相關碩士學位論文 前10條

1 石海燕;BCL-2，NF-kB，血管緊張素I I-I受體在大鼠非酒精性脂肪肝病中的作用及其機制研究[D];瀘州醫(yī)學院;2013年

2 范丹丹;牛磺酸對動脈粥樣硬化兔NF-KB信號轉導途徑的影響[D];遼寧醫(yī)學院;2013年

3 李娟;BCL-2、CD34在翼狀胬肉組織中的表達研究[D];安徽醫(yī)科大學;2013年

4 張宇;HBV相關彌漫大B細胞淋巴瘤臨床特征、BCL-2、CMYC表達及預后分析[D];安徽醫(yī)科大學;2017年

5 劉慶清;組蛋白去乙�；冈谙∈髿獾赖谋磉_及維生素D和地塞米松對其影響的研究[D];西南醫(yī)科大學;2017年

6 張雷英;子宮內膜癌中EGFR、NF-KB蛋白表達及EGFR基因突變的研究[D];南昌大學;2012年

7 溫臣婷;NF-kB在春季角結膜炎中的表達[D];華中科技大學;2007年

8 陳偉;COX-2與BCL-2在分化型甲狀腺癌組織中的表達及意義[D];華中科技大學;2007年

9 宋建治;PTEN、BCL-2在骨肉瘤中的表達及其意義[D];華中科技大學;2006年

10 王惠;丙泊酚對間歇缺氧內皮細胞NF-KB激活及HIF-1α mRNA表達作用研究[D];山東大學;2012年

本文編號：2882697