目的：肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cell，HSC）的增殖與激活作為肝纖維化發(fā)生發(fā)展的主要環(huán)節(jié)之一，各種不同的因素激活HSC，并使細(xì)胞外基質(zhì)大量的形成并沉積后，導(dǎo)致肝纖維化的發(fā)生。所以降低自我放大效應(yīng)和活化后機(jī)體損傷是治療肝纖維化的重點(diǎn)。硫化氫（hydrogen sulfide，H_2S）作為一種氣體信號(hào)分子是近年來發(fā)現(xiàn)的，在循環(huán)系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生中具有重要的作用，具有多種生理功能。為了研究H_2S與肝纖維化之間所存在的關(guān)系，利用鐵超載的方法建立氧應(yīng)激模型，在體外復(fù)制肝纖維化，給予H_2S的供體硫氫化鈉（sodiumhydrosulfide， NaHS）和內(nèi)源性H_2S作用的KATP通道阻滯劑格列苯脲（glibenclamide，GLBN），通過檢測(cè)硫化氫對(duì)氧應(yīng)激下大鼠肝星狀細(xì)胞（HSC-T6）MAPK信號(hào)通路影響，驗(yàn)證氧應(yīng)激下硫化氫對(duì)HSC細(xì)胞具有保護(hù)作用的假說。 方法：將大鼠肝星狀細(xì)胞分為6組：空白組（B組，HSC-T6）；氧化應(yīng)激模型組(C組，B組+500μmol/L Fe-NTA)； N1組(C組+100μmol/L NaHS)；N2組（C組+200μmol/L NaSH）；N3組（C組+400μmol/L NaHS）；格列苯脲組（GLBN組，C組＋200umol/L）。用鐵超載的方法復(fù)制HSC氧化應(yīng)激模型，RT-PCR和WesternBlot檢測(cè)p38、p-p38、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK在24h和48h時(shí)的mRNA和蛋白質(zhì)水平變化。 結(jié)果：在氧應(yīng)激模型下，給予FeNTA24和48h時(shí)以后，模型組p38、ERK和JNKmRNA水平與空白組比較均升高明顯(P0.05)。給予100、200、400μmol/L NaHS處理后三組的p38mRNA水平和C組比較，表達(dá)逐漸降低，差異顯著(P0.05)，三個(gè)不同濃度的組間相比較差異顯著(P0.05)。GLBN組的p38mRNA表達(dá)水平有所上升，差異顯著(P0.05)。然而，ERK和JNK mRNA水平在給予不同濃度NaHS處理的N1組、N2組、N3組的ERK和JNK mRNA水平和模型組比較時(shí)，無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)，三組不同濃度間的組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。加入格列苯脲后，ERK和JNK mRNA表達(dá)水平無明顯變化。 在蛋白質(zhì)水平，p-p38、p-ERK、p-JNK模型組與空白組比較均升高明顯(P0.05)。給予100、200、400μmol/L NaHS處理后三組的p-p38蛋白質(zhì)表達(dá)水平和C組比較，逐漸降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)，經(jīng)上述不同濃度NaHS處理后的三個(gè)組間相比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。GLBN組，p38蛋白質(zhì)表達(dá)水平有所上升，但低于C組。然而，模型組（p38、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK）蛋白質(zhì)水平與空白組相比較無明顯變化(P0.05)。給予100、200、400μmol/L NaHS處理后三組的p38、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK蛋白質(zhì)水平和模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)，并且經(jīng)上述不同濃度NaHS處理后的三個(gè)組間相比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。加入格列苯脲后，在蛋白質(zhì)表達(dá)水平，ERK、JNK、p-ERK、p-JNK無明顯變化。 結(jié)論：硫化氫對(duì)氧應(yīng)激下大鼠肝星狀細(xì)胞（HSC-T6）的MAPK信號(hào)通路的影響是通過抑制p38實(shí)現(xiàn)的。
【學(xué)位單位】：青海大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2012
【中圖分類】：R575.2
【部分圖文】：

第二章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1 RT-PCR 法測(cè)定 p38、ERK、JNK 基因表達(dá)水平2.1.1 RT-PCR 法檢測(cè)細(xì)胞中的 p38 表達(dá)結(jié)果：在氧應(yīng)激模型下，24h 和 48h 時(shí)后提取細(xì)胞 RNA 并逆轉(zhuǎn)為 cDNA，（p38RT-PCR 的退火溫度為 56℃。）RT-PCR 結(jié)果顯示：C 組 p38 mRNA 水平與B 組比較均升高，差異顯著 (P<0.05)。給予不同濃度 NaHS 處理后三組的 p38mRNA 水平和 C 組比較，表達(dá)逐漸降低，差異顯著(P<0.05)，三個(gè)劑量組間差異顯著 (P<0.05)。GLBN 組的 p38mRNA 表達(dá)水平有所上升，差異顯著(P<0.05)。（圖 1 和表 1）

200μmol/L-1NaHS 組(N2 組)200 1.533±0.071+1.623±0.117+400μmol/L-1NaHS 組(N3 組)400 1.493±0.141+1.561±0.104+GLBN 組 200 1.537±0.143+1.642±0.131+注: +表示與空白組比較 P<0.05；#表示與模型組比較 P<0.05；*表示三個(gè)劑量組間和不同時(shí)段間比較 P<0.052.1.3 RT-PCR 法檢測(cè)細(xì)胞中的 JNK 表達(dá)結(jié)果：在氧應(yīng)激模型下，24h 和 48h 時(shí)后提取細(xì)胞 RNA 并逆轉(zhuǎn)為 cDNA，（JNKRT-PCR 的退火溫度為 56℃。）RT-PCR 結(jié)果顯示：C 組 JNK mRNA 水平與 B 組比較均升高，差異顯著(P<0.05)。給予不同濃度 NaHS 處理后的三組的 JNK mRNA 水平和 C 組比較，表達(dá)逐漸降低，差異顯著(P<0.05)，三個(gè)劑量組間差異顯著 (P<0.05)。GLBN 組的 JNKmRNA 表達(dá)水平有所上升，差異顯著(P<0.05)。（圖 3 和表 3）

400μmol/L-1NaHS 組(N3 組)400 1.454±0.154+1.543±0.157+GLBN 組 200 1.354±0.174+1.372±0.147+注: +表示與空白組比較 P<0.05；#表示與模型組比較 P<0.05；*表示三個(gè)劑量組間和不同時(shí)段間比較 P<0.052.2 Western Blot 法測(cè)定 p38、p-p38、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK蛋白表達(dá)水平2.2.1Western Blot 法檢測(cè)細(xì)胞中的 p38、p-p38 蛋白質(zhì)表達(dá)結(jié)果：在氧應(yīng)激模型下，24h 和 48h 時(shí)后提取細(xì)胞蛋白質(zhì)進(jìn)行 Western Blot 實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示：C 組p- p38 蛋白質(zhì)表達(dá)水平與 B 組比較均升高，差異顯著 (P<0.05)。給予不同濃度 NaHS 處理后的三組的 p- p38 蛋白質(zhì)表達(dá)水平和 C 組比較，表達(dá)逐漸降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，加入不同濃度 NaHS 處理后的三個(gè)組相比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。GLBN 組，p38蛋白質(zhì)表達(dá)水平有所上升，但低于 C 組（圖 4 和表 4）
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前8條

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本文編號(hào)：2879982