人體感染HBV后病程如何演化是宿主和病毒等多種因素共同作用的結(jié)果,宿主基因的多態(tài)性可能會(huì)影響HBV感染后的疾病進(jìn)程�；蚨鄳B(tài)性有較強(qiáng)的地域和民族特征,而且其與肝病之間的關(guān)系在不同地區(qū)和民族之間的研究結(jié)果不盡相同。因此,分析MTHFR、IL-10、ALDH2基因多態(tài)性對(duì)天津地區(qū)漢族人感染HBV后疾病進(jìn)展的影響,有助于對(duì)本地區(qū)肝病發(fā)生的病因?qū)W進(jìn)行深入研究。 研究目的：探討MTHFR、IL-10、ALDH2基因多態(tài)性與HBV感染后疾病轉(zhuǎn)歸的關(guān)系。 研究方法：收集標(biāo)本995例,包括205例健康對(duì)照、161例自愈者、221例慢乙肝患者、172例乙肝肝硬化患者以及236例HBV相關(guān)性肝癌患者。從凝血塊中提取基因組DNA,采用TaqMan SNP基因分型和基因測(cè)序的方法檢測(cè)MTHFR 677 C/T、IL-10-1082 A/G、-819 T/C和ALDH2 rs4646778 C/A、rs671 G/A等5個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性,以χ2檢驗(yàn)分析以上位點(diǎn)的基因型、等位基因以及IL-10-1082/-819、ALDH2 rs4646778/rs671單倍型在各組中的分布及差異。 研究結(jié)果：1. MTHFR基因：用于本基因研究的805例研究對(duì)象677 CT、TT和CC基因型頻率分別為47.09%、30.43%和22.48%；等位基因頻率：C為46.02%,T為53.98%,顯示天津地區(qū)漢族人TT基因型和T等位基因頻率明顯高于以往其它地區(qū)或種族的報(bào)道。等位基因和基因型分布在各組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。分析不同性別在各組中的分布特征表明,TT基因型在男性各患病組中顯示風(fēng)險(xiǎn)度降低,特別在肝硬化組TT和CT的OR值最低；而在女性的自愈、慢乙肝和肝硬化組,TT和CT顯示風(fēng)險(xiǎn)度增加,特別在肝硬化組OR值最高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.022)。然而,TT和CT在女性肝癌組卻顯示風(fēng)險(xiǎn)度降低。對(duì)不同臨床特征包括肝癌和肝硬化組的Child-Pugh肝功能分級(jí)、AFP水平以及所有患者HBsAg表達(dá)、DNA拷貝數(shù)之間的比較未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2.IL-10基因：用于本基因研究的700例研究對(duì)象-1082位點(diǎn)的基因型分布為AA占82.29%、AG占16.00%、GG占1.71%；等位基因頻率：A為90.29%,G為9.71%。-819位點(diǎn)的基因型分布為TT占41.43%、TC占48.14%、CC占10.43%；等位基因頻率：T為65.64%,C為34.36%。兩位點(diǎn)等位基因和基因型分布在各組之間比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),以自愈組為對(duì)照,-1082 AG基因型和G等位基因?qū)β腋魏透斡不M的風(fēng)險(xiǎn)度降低,-819 TC對(duì)肝癌組風(fēng)險(xiǎn)度降低,CC基因型和C等位基因?qū)θ齻€(gè)肝病組的風(fēng)險(xiǎn)度均有降低的趨勢(shì)。分析IL-10-1082／-819單倍型在各組中的分布,以健康和自愈組為對(duì)照,AC單倍型對(duì)肝硬化和肝癌組的風(fēng)險(xiǎn)度均降低,且以自愈組為對(duì)照時(shí)降低程度更大；以自愈組為對(duì)照,GC單倍型對(duì)慢乙肝和肝硬化組的風(fēng)險(xiǎn)度降低。在不同臨床特征的組別之間比較發(fā)現(xiàn),對(duì)于-819位點(diǎn),DNA103拷貝／mL的患者C等位基因頻率顯著高于DNA≥103拷貝／mL的患者(P=0.025)。對(duì)其它各項(xiàng)的比較未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3. ALDH2基因：用于本基因研究的180例研究對(duì)象rs4646778位點(diǎn)CC、CA和AA基因型頻率分別為51.11%、37.78%和11.11%；等位基因頻率：C為70.00%,A為30.00%。rs671位點(diǎn)GG、GA和AA的基因型頻率分別為72.22%、24.45%和3.33%；等位基因頻率：G為84.44%,A為15.56%。兩位點(diǎn)等位基因和基因型分布在各組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),以健康組為對(duì)照,rs4646778 CA基因型對(duì)三個(gè)肝病組的風(fēng)險(xiǎn)度均降低,C等位基因?qū)Ω伟┙M的風(fēng)險(xiǎn)度降低。分析rs4646778/rs671單倍型在各組中的分布,以健康組為對(duì)照,AG和CA單倍型對(duì)三個(gè)肝病組的風(fēng)險(xiǎn)度均有降低的趨勢(shì)。在不同臨床特征的組別之間比較未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 研究結(jié)論：1. MTHFR 677在中國(guó)天津漢族人中的TT基因型頻率明顯高于大多數(shù)國(guó)家和地區(qū)的研究結(jié)果。同時(shí)提示MTHFR 677 TT和CT基因型降低男性HBV感染者患肝硬化的風(fēng)險(xiǎn)和女性HBV感染者患肝癌的風(fēng)險(xiǎn),而增加女性HBV感染者患肝硬化的風(fēng)險(xiǎn)。2.IL-10-1082AG基因型和G等位基因,-819 TC、CC基因型和C等位基因,-1082/-819AC、GC單倍型對(duì)HBV感染后疾病進(jìn)展有一定的保護(hù)作用；-819 C等位基因更有利于HBV感染者病毒的清除。3. ALDH2 rs4646778 CA基因型、C等位基因以及rs4646778/rs671 AG和CA單倍型對(duì)HBV感染后疾病進(jìn)展可能有一定的保護(hù)作用。
【學(xué)位單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R512.62
【部分圖文】：

0.0562.0510.0030.6950.0082.0502.5472.6090.592.4582.0352.700.0182.5572.690一0000.9790.9130.0032.733八U︶，‘40少，、八一，勺了‘J︻百‘矛0︸，‘lF2.6472.331G2.7111.677H1.9412.744翼彝:陰性對(duì)照;仁二〕:空白對(duì)照;甚困:陽(yáng)性對(duì)照;字體加粗:HBcAb陽(yáng)性本結(jié)果臨界值為(0.981+1.257+0.579)z3xo.5=0.5195。90例樣本中陽(yáng)性標(biāo)本(A值夕洽界值0.5195)17例，陰性標(biāo)本(A值>臨界值0.5195)73例。用此方法共從健康查體中篩檢出乙肝自愈者161例。2.3基因組DNA的提取分光光度儀測(cè)定基因組DNA的核酸含量及純度。樣本的核酸含量平均在500一80On歲川之間，A260/280大多數(shù)均能達(dá)到大于1.7的核酸純度要求。1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA提取情況，可見清晰的DNA條帶，表明滿足PCR反應(yīng)需要(見圖l)。

圖4ALDH2rs4646778、rs671位點(diǎn)PCR擴(kuò)增及SNP分析圖A.ALDHZrs4646778PCR擴(kuò)增圖;B.ALDHZrs4646778SNP分析圖C.ALDHZrs671PCR擴(kuò)增圖;D.ALDHZrs671SNP分析圖.:rs4646778AA或rs671AA基因型;今:rs4646778CC或rs671GG基因型;▲:rs4646778AC或rs671AG基因型2.4.3MTHFR和IL一10基因測(cè)序?yàn)轵?yàn)證幾qMansNP基因分型方法的準(zhǔn)確性，隨機(jī)挑取MTHFR677CC、TT、CT3種基因型各10個(gè)共30個(gè)樣品和IL一10一1082/一819不同基因型和單倍型的25個(gè)樣品進(jìn)行DNA測(cè)序，并對(duì)IL一10一1082/一819的4個(gè)雜合子樣品進(jìn)行克隆，每個(gè)樣品再挑取5個(gè)克隆測(cè)序。測(cè)序結(jié)果見圖5、6。如圖5所示，A、B、C分別代表MTHFR677CC、TT和CT基因型。圖6顯示IL一10一1082/一819基因測(cè)序的結(jié)果:圖中A、B、C、D、E分別代表IL一10一1082八819AG/CT、AA/TT、GG/CC、AA/CC和GG/TT基因型。測(cè)序結(jié)果與TaqManSNP基因分型結(jié)果完全一致。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2879605