目的:乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)感染呈世界性流行,每年約有100萬人死于HBV感染所致的肝硬化、肝衰竭和肝細(xì)胞癌。研究發(fā)現(xiàn),在急、慢性HBV感染過程中,都存在以促炎和抗炎細(xì)胞因子失衡為特征的炎癥損傷過程。脂聯(lián)素是近年發(fā)現(xiàn)的一類具有保護(hù)作用的脂肪細(xì)胞因子,其主要作用為調(diào)節(jié)能量代謝、提高胰島素的敏感性、抗炎和抗肝纖維化作用。研究證實(shí)非酒精性脂肪性肝炎( Non-alcoholic Steatohepatitis,NASH)患者血清脂聯(lián)素水平降低,并與肝臟炎癥壞死、脂肪變和纖維化相關(guān)。但脂聯(lián)素與慢性HBV感染的關(guān)系,及其對慢性乙型肝炎(Chronic Hepatitis B,CHB)預(yù)后、轉(zhuǎn)歸影響尚無確切報(bào)道。 本研究通過檢測各型慢性乙型肝炎患者血清脂聯(lián)素水平,結(jié)合肝組織脂聯(lián)素、脂聯(lián)素受體2 mRNA和蛋白的表達(dá),以探討脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體2在各型慢性乙型肝炎發(fā)病過程中的變化特點(diǎn)及臨床意義。 方法:收集2009年01月-2010年12月我院門診和住院CHB(中度)、乙型肝炎肝硬化(Liver Cirrhosis,LC)、慢性重型乙型肝炎(Chronic Severe Hepatitis B,CSHB)患者各20例。診斷均符合2005年中國《慢性乙型肝炎防治指南》和2006年中國《肝衰竭診療指南》標(biāo)準(zhǔn)。選擇同時期本院正常健康體檢者20名做為血清學(xué)健康對照。 應(yīng)用全自動化分析儀檢測患者門診首日或入院次日空腹血糖(Fasting Blood Glucose, FBG)、血清膽固醇(Cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride, TG)、白蛋白(Albumin)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine Aminotransferase,ALT)、總膽紅素(Total Bilirubin,TBiL)、凝血酶原活動度(Prothrombin Activity,PTA)水平;酶聯(lián)免疫法檢測HBV血清學(xué)標(biāo)志物:HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb;定量PCR分析檢測血清HBVDNA載量。檢測抗-HAV、抗-HCV、抗-HEV、抗-HIV,以除外其他嗜肝病毒及HIV感染。 應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme Linked ImmunosorbentAssay,ELISA)檢測血清脂聯(lián)素水平,嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。 HE染色觀察肝組織普通病理變化,Masson三重染色觀察肝組織纖維化程度。采用Power VisionTM二步法對肝組織進(jìn)行脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體2免疫組織化學(xué)染色,棕黃色著色為陽性表達(dá),用多功能病理圖象分析儀測定脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體2表達(dá)面積百分比,每張片子取中央和四周五個區(qū)域,20倍物鏡下計(jì)算平均面密度(陽性面積與統(tǒng)計(jì)場面積百分比)。 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)檢測肝組織脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體2 mRNA的表達(dá)。 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。 結(jié)果: 1各組患者人口學(xué)與生化學(xué)指標(biāo)的比較 三組不同類型的慢性乙型肝炎患者在年齡、性別構(gòu)成比、體重指數(shù)(Body Mass Index,BMI)、TC、TG均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。與正常對照組相比,CHB組、LC組和CSHB組患者血清ALT、TBiL漸次升高,白蛋白、PTA逐漸下降,尤其以CSHB組變化顯著。 2各組患者血清脂聯(lián)素水平的變化 CSHB組(0.821±0.149)和LC組(0.718±0.090)均較正常對照組(0.587±0.147)血清脂聯(lián)素水平明顯升高,F=13.296,P0.05。CHB組(0.616±0.126)與正常對照組(0.587±0.147)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 3肝組織普通病理學(xué)的變化 正常對照組HE染色顯示:肝細(xì)胞索以中央靜脈為中心呈放射狀排列,細(xì)胞形態(tài)正常,肝板結(jié)構(gòu)完整。Masson染色:肝竇、中央靜脈周圍及匯管區(qū)未見纖維組織沉積;CHB患者HE染色顯示:小葉內(nèi)可見點(diǎn)灶狀肝細(xì)胞變性、壞死,壞死灶及肝竇內(nèi)以淋巴細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞浸潤,匯管區(qū)擴(kuò)大,部分界板損傷。Masson染色可見:擴(kuò)大匯管區(qū)內(nèi)輕重不等的纖維組織沉積;LC患者HE染色突出表現(xiàn)為:肝板排列紊亂,假小葉形成。匯管區(qū)大小不一,可伴有程度不等的炎細(xì)胞浸潤及界面炎。Masson染色顯示:纖維間隔彼此交叉、連接,分割包繞正常肝細(xì)胞形成假小葉結(jié)構(gòu);CSHB患者HE染色表現(xiàn)為:肝細(xì)胞大塊、亞大塊狀壞死,壞死區(qū)細(xì)胞結(jié)構(gòu)脫失,伴大量炎性細(xì)胞浸潤,部分壞死區(qū)可見殘存和/或再生肝細(xì)胞島,小膽管增生,可見膽栓。Masson染色顯示:小葉結(jié)構(gòu)紊亂不清,壞死區(qū)內(nèi)纖維支架塌陷,周圍組織可見大量膠原纖維增生。 4肝組織脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體2 mRNA表達(dá)的變化 與正常對照組(0.091±0.018)(0.075±0.016)相比,三組不同類型的慢性乙型肝炎患者脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體2 mRNA表達(dá)均明顯升高,且以CHB0.123±0.019)(0.106±0.018)組、LC(0.196±0.017)(0.167±0.016)組、CSHB(0.245±0.028)(0.223±0.020)組順序依次遞增,各組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。F值分別為45.675和63.386,P值均小于0.05。 5肝組織脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體2蛋白表達(dá)部位與強(qiáng)弱的變化 正常肝組織僅可見少量脂聯(lián)素表達(dá)于肝細(xì)胞漿,隨著CHB向LC、CSHB進(jìn)展,脂聯(lián)素表達(dá)逐漸增多。對比觀察脂聯(lián)素表達(dá)部位發(fā)現(xiàn),CHB和LC組,脂聯(lián)素主要表達(dá)在肝細(xì)胞胞漿。CSHB患者脂聯(lián)素主要表達(dá)在肝竇間質(zhì)細(xì)胞,在肝細(xì)胞少量表達(dá)。肝組織脂聯(lián)素受體2表達(dá)量特點(diǎn)與脂聯(lián)素變化一致,但表達(dá)部位均在肝細(xì)胞漿。對正常對照組(4.044±0.815)(2.804±0.622)、CHB組(5.545±0.613)(4.775±0.458)、LC組(6.553±0.614)(5.678±0.539)和CSHB組(8.482±0.772)(7.654±0.272)脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體2蛋白表達(dá)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢測,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。F值分別為45.675和63.386,P值均小于0.05。 6相關(guān)性分析 CHB組肝組織脂聯(lián)素mRNA和蛋白水平與肝臟炎癥評分正相關(guān),相關(guān)系數(shù)為r =0.745、r =0.891,P值均小于0.05。CSHB組:肝組織脂聯(lián)素mRNA和蛋白水平與ALT正相關(guān),相關(guān)系數(shù)為r =0.702、r =0.583, P值均小于0.05。與白蛋白負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù)為,r = -0.683、r = -0.641,P值均小于0.05。 CHB、LC和CSHB患者血清脂聯(lián)素水平、肝組織脂聯(lián)素mRNA和蛋白表達(dá)水平與血清HBVDNA水平均無相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別為r=-0.094、r=-0.131、r=-0.014、r=-0.254、r=-0.349、r=0.380、r=0.189、r=-0.302、r=-0.195,P值均大于0.05。 結(jié)論: 1血清脂聯(lián)素水平在CHB組、LC組和CSHB組患者順序依次升高,提示血清脂聯(lián)素水平可以作為一個肝病嚴(yán)重程度的預(yù)測指標(biāo)。 2肝組織脂聯(lián)素mRNA和蛋白水平與CHB患者肝臟炎癥評分、LC患者肝臟纖維化評分和CSHB患者血清ALT水平均為正相關(guān),與CSHB患者白蛋白負(fù)相關(guān),提示脂聯(lián)素在各型慢性乙型肝炎疾病進(jìn)展過程中發(fā)揮重要作用。 3脂聯(lián)素在正常肝細(xì)胞胞漿少量表達(dá);CHB和LC患者,脂聯(lián)素主要表達(dá)肝細(xì)胞胞漿;CSHB患者,脂聯(lián)素主要表達(dá)在肝竇間質(zhì)細(xì)胞,肝細(xì)胞胞漿少量表達(dá)。 4血清和肝組織脂聯(lián)素與CHB、LC和CSHB患者血清HBV DNA水平無相關(guān)性,提示脂聯(lián)素對HBV DNA的復(fù)制和清除無明顯影響。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2011
【中圖分類】：R512.62
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
材料與方法
結(jié)果
附圖
附表
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 脂聯(lián)素與慢性乙型肝炎的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;肝衰竭診療指南[J];中華肝臟病雜志;2006年09期

本文編號：2872339