目的全球范圍內乙肝病毒(Hepatitis B Virus,HBV)是導致慢性和急性肝臟疾病重要的原因,目前已經成為一個重大的公共衛(wèi)生問題。人體感染HBV后,可表現(xiàn)為自身清除病毒或慢性感染,其造成肝臟損害的程度不一,但是發(fā)生不同結局的原因和機制目前尚不明確,其發(fā)生可能與遺傳、年齡、性別、自身免疫狀態(tài)有關。一些研究發(fā)現(xiàn)甘露醇結合凝集素(Mannose-Binding Lectin,MBL)和白介素10(Interleukin-10,IL-10)與人體感染HBV結局有關。本研究旨在通過標簽SNP和熱點SNP的選點方法對研究MBL2和IL-10基因多態(tài)性與乙型肝炎病毒慢性感染易感性進行關聯(lián)性研究,為慢性乙型肝炎的病因探索提供參考依據。方法本次研究收集2010年1月～2012年1月1297例,其中作為病例組的慢性乙型肝炎患者996例,男性693例,女性303例。選擇自限性感染者共301例作為對照組,男性166例,女性135例,并對研究對象進行乙型肝炎標志物檢測。采集慢性乙型肝炎患者及對照患者的外周靜脈血(約5ml),乙二胺四乙酸(Ethylene Diamine Tetracetic Acid,EDTA)抗凝并分離血漿,鹽析法提取DNA,采用多重單堿基延伸技術(Multiplex Snapshot Technique,PCR-SSP)分型技術對基因進行分型鑒定。使用SPSS 13.0,Haploview,PLINK3.1對結果進行統(tǒng)計分析,以α=0.05為檢驗水準,多重檢驗比較采用Bonferoni法進行P值調整。結果1.其中作為病例組的慢性乙型肝炎患者996例,男性693例,女性303例,平均年齡44.31±15.89歲。作為對照組的自限性感染者共301例,男性166例,女性135例,平均年齡44.86±14.57歲。兩組年齡采用獨立樣本/檢驗,未見顯著的統(tǒng)計學差異。兩組之間的性別存在著顯著的統(tǒng)計學差異,P0.001,這可能與不同性別患者就診率不同有關。2.MBL2 基因的 3 個 TagSNPs(rs2120131,rs4935047 和 rs7095891)和IL-10基因的2個SNPs(rs3024490和rs3021094)在不同組別,不同性別中的Hardy-Weinberg 平衡(Hardy-Weinberg Equilibrium,HWE)滿足遺傳平衡,說明人群穩(wěn)定。3.在等位基因、遺傳模型、單倍體分析中均沒有發(fā)現(xiàn)MBL2基因的3個TagSNPs(rs2120131,rs4935047和rs7095891)與乙型肝炎病毒慢性感染易感性存在關聯(lián),調整P值0.05。4.在等位基因、遺傳模型分析中均沒有發(fā)現(xiàn)IL-10基因的rs3021094突變位點與乙型肝炎病毒慢性感染易感性存在關聯(lián),調整P值0.05。5.IL-10基因的rs3024490等位基因分析發(fā)現(xiàn)不論是在男性、女性還是在總人群中調整后的P值均為小于0.05,總人群中的OR值為1.444,95%CI為1.185-1.761,男性人群中的OR值為1.472,95%CI為1.131-1.915,女性人群中的OR值為 1.462,95%CI 為 1.076-1.987。6.rs3024490位點在總人群中,加性模型,顯性模型,隱性模型3個遺傳模型中均有顯著的統(tǒng)計學意義,調整P值為0.002,0.002,0.026。在男性人群中,除了在隱性模型中未見顯著的統(tǒng)計學意義之外(調整后的P=0.070),在加性模型和顯性模型均存在顯著的統(tǒng)計學意義,調整后的P值分別為0.030,0.022。在女性人群中,除了在加性模型和隱性模型中未見顯著的統(tǒng)計學意義之外(P=0.274,P=0.094),在顯性模型存在顯著的統(tǒng)計學意義,調整后的P值為0.038。7.單倍型分析中只發(fā)現(xiàn)IL-10的AG單倍型(rs3021094| rs3024490)與乙型肝炎病毒慢性感染易感性存在著顯著的統(tǒng)計學差異(總人群中AG單倍型的調整P值為0.001,OR值為1.390,男性中AG單倍型的P值為0.007,OR值為1.450,女性中AG單倍型的P值為0.045,OR值為1.360)。結論1.我們對MBL2基因的三個TagSNP位點的研究,未見其與乙型肝炎病毒慢性感染易感性存在關聯(lián)性。2.我們對IL-10基因的2個SNP位點的研究中發(fā)現(xiàn)rs3024490突變產生G等位基因是乙型肝炎病毒慢性感染易感性的一個危險因素。
【學位單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2012
【中圖分類】：R512.62
【部分圖文】：

細胞因子的表達和主要組織相容性復合體的抗原表達，不利于對細胞內ＨＢＶ的??清除［６］。同時又是由于ＩＬ－１０可以抑制Ｔｈｌ細胞產生ＩＦＮ和ＴＮＦ，從而達到了對肝??臟細胞的保護作用（圖２）。??不同個體在感染ＨＢＶ后對病毒的清除和預后差異很大，提示我們免疫細胞??因子的基因差異也是乙型肝炎病毒慢性感染易感性的原因之一。ＩＬ－］０作為體液??免疫和細胞免疫的中樞因子，其表達的差異性可能也會導致ＨＢＶ感染者的不同??轉歸。??胞內感染???Ｉ?一?ＩＬ－２．ＩＦＮ－Ｖ，￣??１?？—■?，－＾?＾１??＾?＾?丨?ＵＧＭ－ＣＳＦ????？一．??◎?一?參＇ＦＮ－ｖ：??（｜?＾＼＾?丨—————??ＩＬ－２?ＩＬ－２．ＩＦＮ－Ｖ，?Ａ?＾?ＩＬ－４．５．６，１０?＿??ＩＬ－４．ＩＬ－５?％Ｕｒ?｜ＩＬ－３．ＧＭ－ＣＳＦ｜?免疫??ＩＬ－３．ＧＭ－ＣＳＦ??寄生Ｈ?—＾＾：ＮＫ１．１＜Ｔ細胞??圖２?ＩＬ－１０在細胞免疫和體液免疫中的作用??Ｆｉｇ?２?Ｔｈｅ?ｒｏｌｅ?ｏｆ?ＩＩ?－１０?ｉｎ?ｃｅｌｌｕｌａｒ?ｉｍｍｕｎｉｔｙ?ａｎｄ?ｈｕｍｏｒａｌ?ｉｍｍｕｎｉｔｙ??ＩＬ－１０基因位于第一染色體上，］ｑ３１－ｑ３２的位置。ＩＬ－１０的單核苷酸多態(tài)性與??乙型肝炎病毒慢性感染易感性已成為國內外研究的熱點。研究的位點基本上都是??集中在ＩＬ－１０的啟動子區(qū)域

多重ＳＮａＰｓｈｏｔ?ＳＮＰ分型是一種以多重引物延伸為基礎、可同時對多個己知??ＳＮＰ位點進行遺傳分型的自動化方法。該技術由美國應用生物公司（ＡＢＩ）開發(fā)，??主要針對中等通量的ＳＮＰ分型項目。其工作原理圖如下圖４所示：??￣ＳＮＰｌｒ，?ＳＮＰ２－?？?ＳＮＰ３ｏ?ＳＮＰ４．＆－?？??—，ＤＮＡ疾板??名ｊｆｃｐｃＲｒ甩????—－＊？—?？？?－?Ｓ．Ｋ＇Ｒ??—?－�。剑＃�?？——?坤屮‘??ｕｄ?ＴＰｏａＴＰ?．．，．??＊入?ｏｆｔＧＴＰｒｔｓｔｒ．ＴＰ?Ｉ?分？Ｕ１??Ｉ??ＺＺ！?＂?ｒ?＊??Ｉ??Ｉ??ＳＮＰｌ?ＳＮＰ２?ＳＮＰ３?ＳＮＰ４??ｎｌ??ｎ?■？丨?＼?ｆ丨??Ｋ?■．?？ｉ?Ｕ???丨?Ｊ????Ｋ?電泳?１￡Ｓ????圖４多重ＳＮａＰｓｈｏｔ?ＳＮＰ分型技術原理圖??Ｆｉｇ?４?Ｔｈｅ?ｔｈｅｏｒｙ?ｏｆ?Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ?Ｓｎａｐｓｈｏｔ?Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ??２．５．８?ＳＮａＰｓｈｏｔ多重單堿基延伸反應：??ａ）?ＳＮａＰｓｈｏｔ延伸引物及序列：??２１??

安徽醫(yī)科大學碩士學位論文應總體積為１０叫，包括Ｈｉ－Ｄｉ?ＦｏｒｍａｍｉＳｃａｎ－１２０?ＬＩＺ?Ｓｉｚｅ?ＳｔａｎｄａｒｄＯ．ＷＬ，稀釋?２０?倍后的?Ｓ件為９５°Ｃ變性５分鐘后迅速在冰上冰冷４分鐘，測儀上進行毛細管電泳。ＡＢＩ３７３０ＸＬ測序儀上收（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓＣｏ＿，?Ｌｔｄ＿，ＵＳＡ）來分析。為本進行直接測序驗證ＳＮａＰｓｈｏｔ方法的準確性（單個ＳＮＰ分型峰形圖５－１９所示：??ｒｍ：ｒａ——ａａ—ｍｎ—ａ—ｍａａ——ａＢＨａ—ＢＢＭｗｉｒｉＪＭＫａ—ｉ．??
【參考文獻】

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1 徐楓;鮑勇;吳寰宇;任宏;陳云華;高淑娜;;乙型肝炎感染危險因素的多因素分析[J];中華疾病控制雜志;2008年05期

2 王紅;華春珍;尚世強;;漢族和回族兒童甘露糖結合凝集素基因多態(tài)性分析[J];解放軍醫(yī)學雜志;2008年10期

3 陳政良;補體激活第三途徑——凝集素途徑[J];國外醫(yī)學(分子生物學分冊);1999年05期

本文編號：2862647