目的全球范圍內(nèi)乙肝病毒(Hepatitis B Virus,HBV)是導(dǎo)致慢性和急性肝臟疾病重要的原因,目前已經(jīng)成為一個(gè)重大的公共衛(wèi)生問題。人體感染HBV后,可表現(xiàn)為自身清除病毒或慢性感染,其造成肝臟損害的程度不一,但是發(fā)生不同結(jié)局的原因和機(jī)制目前尚不明確,其發(fā)生可能與遺傳、年齡、性別、自身免疫狀態(tài)有關(guān)。一些研究發(fā)現(xiàn)甘露醇結(jié)合凝集素(Mannose-Binding Lectin,MBL)和白介素10(Interleukin-10,IL-10)與人體感染HBV結(jié)局有關(guān)。本研究旨在通過標(biāo)簽SNP和熱點(diǎn)SNP的選點(diǎn)方法對(duì)研究MBL2和IL-10基因多態(tài)性與乙型肝炎病毒慢性感染易感性進(jìn)行關(guān)聯(lián)性研究,為慢性乙型肝炎的病因探索提供參考依據(jù)。方法本次研究收集2010年1月～2012年1月1297例,其中作為病例組的慢性乙型肝炎患者996例,男性693例,女性303例。選擇自限性感染者共301例作為對(duì)照組,男性166例,女性135例,并對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行乙型肝炎標(biāo)志物檢測(cè)。采集慢性乙型肝炎患者及對(duì)照患者的外周靜脈血(約5ml),乙二胺四乙酸(Ethylene Diamine Tetracetic Acid,EDTA)抗凝并分離血漿,鹽析法提取DNA,采用多重單堿基延伸技術(shù)(Multiplex Snapshot Technique,PCR-SSP)分型技術(shù)對(duì)基因進(jìn)行分型鑒定。使用SPSS 13.0,Haploview,PLINK3.1對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn),多重檢驗(yàn)比較采用Bonferoni法進(jìn)行P值調(diào)整。結(jié)果1.其中作為病例組的慢性乙型肝炎患者996例,男性693例,女性303例,平均年齡44.31±15.89歲。作為對(duì)照組的自限性感染者共301例,男性166例,女性135例,平均年齡44.86±14.57歲。兩組年齡采用獨(dú)立樣本/檢驗(yàn),未見顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。兩組之間的性別存在著顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P0.001,這可能與不同性別患者就診率不同有關(guān)。2.MBL2 基因的 3 個(gè) TagSNPs(rs2120131,rs4935047 和 rs7095891)和IL-10基因的2個(gè)SNPs(rs3024490和rs3021094)在不同組別,不同性別中的Hardy-Weinberg 平衡(Hardy-Weinberg Equilibrium,HWE)滿足遺傳平衡,說明人群穩(wěn)定。3.在等位基因、遺傳模型、單倍體分析中均沒有發(fā)現(xiàn)MBL2基因的3個(gè)TagSNPs(rs2120131,rs4935047和rs7095891)與乙型肝炎病毒慢性感染易感性存在關(guān)聯(lián),調(diào)整P值0.05。4.在等位基因、遺傳模型分析中均沒有發(fā)現(xiàn)IL-10基因的rs3021094突變位點(diǎn)與乙型肝炎病毒慢性感染易感性存在關(guān)聯(lián),調(diào)整P值0.05。5.IL-10基因的rs3024490等位基因分析發(fā)現(xiàn)不論是在男性、女性還是在總?cè)巳褐姓{(diào)整后的P值均為小于0.05,總?cè)巳褐械腛R值為1.444,95%CI為1.185-1.761,男性人群中的OR值為1.472,95%CI為1.131-1.915,女性人群中的OR值為 1.462,95%CI 為 1.076-1.987。6.rs3024490位點(diǎn)在總?cè)巳褐?加性模型,顯性模型,隱性模型3個(gè)遺傳模型中均有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,調(diào)整P值為0.002,0.002,0.026。在男性人群中,除了在隱性模型中未見顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義之外(調(diào)整后的P=0.070),在加性模型和顯性模型均存在顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,調(diào)整后的P值分別為0.030,0.022。在女性人群中,除了在加性模型和隱性模型中未見顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義之外(P=0.274,P=0.094),在顯性模型存在顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,調(diào)整后的P值為0.038。7.單倍型分析中只發(fā)現(xiàn)IL-10的AG單倍型(rs3021094| rs3024490)與乙型肝炎病毒慢性感染易感性存在著顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(總?cè)巳褐蠥G單倍型的調(diào)整P值為0.001,OR值為1.390,男性中AG單倍型的P值為0.007,OR值為1.450,女性中AG單倍型的P值為0.045,OR值為1.360)。結(jié)論1.我們對(duì)MBL2基因的三個(gè)TagSNP位點(diǎn)的研究,未見其與乙型肝炎病毒慢性感染易感性存在關(guān)聯(lián)性。2.我們對(duì)IL-10基因的2個(gè)SNP位點(diǎn)的研究中發(fā)現(xiàn)rs3024490突變產(chǎn)生G等位基因是乙型肝炎病毒慢性感染易感性的一個(gè)危險(xiǎn)因素。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2012
【中圖分類】：R512.62
【部分圖文】：

細(xì)胞因子的表達(dá)和主要組織相容性復(fù)合體的抗原表達(dá)，不利于對(duì)細(xì)胞內(nèi)ＨＢＶ的??清除［６］。同時(shí)又是由于ＩＬ－１０可以抑制Ｔｈｌ細(xì)胞產(chǎn)生ＩＦＮ和ＴＮＦ，從而達(dá)到了對(duì)肝??臟細(xì)胞的保護(hù)作用（圖２）。??不同個(gè)體在感染ＨＢＶ后對(duì)病毒的清除和預(yù)后差異很大，提示我們免疫細(xì)胞??因子的基因差異也是乙型肝炎病毒慢性感染易感性的原因之一。ＩＬ－］０作為體液??免疫和細(xì)胞免疫的中樞因子，其表達(dá)的差異性可能也會(huì)導(dǎo)致ＨＢＶ感染者的不同??轉(zhuǎn)歸。??胞內(nèi)感染???Ｉ?一?ＩＬ－２．ＩＦＮ－Ｖ，￣??１?？—■?，－＾?＾１??＾?＾?丨?ＵＧＭ－ＣＳＦ????？一．??◎?一?參＇ＦＮ－ｖ：??（｜?＾＼＾?丨—————??ＩＬ－２?ＩＬ－２．ＩＦＮ－Ｖ，?Ａ?＾?ＩＬ－４．５．６，１０?＿??ＩＬ－４．ＩＬ－５?％Ｕｒ?｜ＩＬ－３．ＧＭ－ＣＳＦ｜?免疫??ＩＬ－３．ＧＭ－ＣＳＦ??寄生Ｈ?—＾＾：ＮＫ１．１＜Ｔ細(xì)胞??圖２?ＩＬ－１０在細(xì)胞免疫和體液免疫中的作用??Ｆｉｇ?２?Ｔｈｅ?ｒｏｌｅ?ｏｆ?ＩＩ?－１０?ｉｎ?ｃｅｌｌｕｌａｒ?ｉｍｍｕｎｉｔｙ?ａｎｄ?ｈｕｍｏｒａｌ?ｉｍｍｕｎｉｔｙ??ＩＬ－１０基因位于第一染色體上，］ｑ３１－ｑ３２的位置。ＩＬ－１０的單核苷酸多態(tài)性與??乙型肝炎病毒慢性感染易感性已成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。研究的位點(diǎn)基本上都是??集中在ＩＬ－１０的啟動(dòng)子區(qū)域

多重ＳＮａＰｓｈｏｔ?ＳＮＰ分型是一種以多重引物延伸為基礎(chǔ)、可同時(shí)對(duì)多個(gè)己知??ＳＮＰ位點(diǎn)進(jìn)行遺傳分型的自動(dòng)化方法。該技術(shù)由美國(guó)應(yīng)用生物公司（ＡＢＩ）開發(fā)，??主要針對(duì)中等通量的ＳＮＰ分型項(xiàng)目。其工作原理圖如下圖４所示：??￣ＳＮＰｌｒ，?ＳＮＰ２－?？?ＳＮＰ３ｏ?ＳＮＰ４．＆－?？??—，ＤＮＡ疾板??名ｊｆｃｐｃＲｒ甩????—－＊？—?？？?－?Ｓ．Ｋ＇Ｒ??—?－�。剑＃�?？——?坤屮‘??ｕｄ?ＴＰｏａＴＰ?．．，．??＊入?ｏｆｔＧＴＰｒｔｓｔｒ．ＴＰ?Ｉ?分？Ｕ１??Ｉ??ＺＺ！?＂?ｒ?＊??Ｉ??Ｉ??ＳＮＰｌ?ＳＮＰ２?ＳＮＰ３?ＳＮＰ４??ｎｌ??ｎ?■？丨?＼?ｆ丨??Ｋ?■．?？ｉ?Ｕ???丨?Ｊ????Ｋ?電泳?１￡Ｓ????圖４多重ＳＮａＰｓｈｏｔ?ＳＮＰ分型技術(shù)原理圖??Ｆｉｇ?４?Ｔｈｅ?ｔｈｅｏｒｙ?ｏｆ?Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ?Ｓｎａｐｓｈｏｔ?Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ??２．５．８?ＳＮａＰｓｈｏｔ多重單堿基延伸反應(yīng)：??ａ）?ＳＮａＰｓｈｏｔ延伸引物及序列：??２１??

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文應(yīng)總體積為１０叫，包括Ｈｉ－Ｄｉ?ＦｏｒｍａｍｉＳｃａｎ－１２０?ＬＩＺ?Ｓｉｚｅ?ＳｔａｎｄａｒｄＯ．ＷＬ，稀釋?２０?倍后的?Ｓ件為９５°Ｃ變性５分鐘后迅速在冰上冰冷４分鐘，測(cè)儀上進(jìn)行毛細(xì)管電泳。ＡＢＩ３７３０ＸＬ測(cè)序儀上收（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓＣｏ＿，?Ｌｔｄ＿，ＵＳＡ）來分析。為本進(jìn)行直接測(cè)序驗(yàn)證ＳＮａＰｓｈｏｔ方法的準(zhǔn)確性（單個(gè)ＳＮＰ分型峰形圖５－１９所示：??ｒｍ：ｒａ——ａａ—ｍｎ—ａ—ｍａａ——ａＢＨａ—ＢＢＭｗｉｒｉＪＭＫａ—ｉ．??
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 徐楓;鮑勇;吳寰宇;任宏;陳云華;高淑娜;;乙型肝炎感染危險(xiǎn)因素的多因素分析[J];中華疾病控制雜志;2008年05期

2 王紅;華春珍;尚世強(qiáng);;漢族和回族兒童甘露糖結(jié)合凝集素基因多態(tài)性分析[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2008年10期

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本文編號(hào)：2862647