盡管免疫抑制劑的發(fā)展使器官移植取得了很大的進(jìn)步,移植后急性排斥反應(yīng)仍是肝移植術(shù)后的主要障礙之一,長期大量使用免疫抑制劑對各器官遠(yuǎn)期功能不利已經(jīng)成為共識,維持什么水平的免疫抑制甚至是否撤除免疫抑制以及何時(shí)撤除免疫抑制?這些問題的解決必須建立在對排斥機(jī)制、預(yù)測排斥發(fā)生的特異性指標(biāo)和影響排斥反應(yīng)的因素等充分了解的基礎(chǔ)上。因?yàn)榧?xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞在抑制病毒感染、抗腫瘤、急性同種移植排斥反應(yīng)等免疫應(yīng)答中起主要作用,而我國接受肝移植的病人大多為乙肝患者,乙肝陽性肝移植病人外周血存在的HBV特異性CTL是否對急性排斥的發(fā)生有所影響,本課題對此做了初步研究。 (一)HBV-DNA與肝移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)關(guān)系的臨床研究 對第二軍醫(yī)大學(xué)附屬東方肝膽外科醫(yī)院在2003年4月至2005年10月間因乙肝相關(guān)性肝病(HBsAg陽性)實(shí)施同種異體原位肝移植術(shù)的160例病例進(jìn)行分組及統(tǒng)計(jì)分析。圍手術(shù)處理均按醫(yī)院標(biāo)準(zhǔn)的處理方案,急性排斥(acute rejection, AR)的診斷根據(jù)是按1995年banff國際會議綱要制定的標(biāo)準(zhǔn),肝穿的組織病理檢查分別按banff分級計(jì)分。23例病人發(fā)生AR,排斥發(fā)生率14.38%。根據(jù)術(shù)前患者的HBV-DNA的水平,分為A組26例(未檢出)、B組68例(105拷貝)、C組66例(≧105拷貝),其中A組2例,B組6例,C組15例發(fā)生排斥。X2檢驗(yàn)分析各組的AR發(fā)生率的差異,結(jié)果表明:AR發(fā)生率C組B組A組;三組之間AR的發(fā)生率有顯著差異;在B組和C組之間有顯著性差異。提示術(shù)前高水平的病毒載荷和術(shù)后急性排斥反應(yīng)的發(fā)生具有相關(guān)性,載荷高者排斥反應(yīng)發(fā)生率高。 (二)構(gòu)建檢測HBV特異性CTL的單鏈MHC-肽四聚體 因細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞在抑制病毒感染和急性同種移植排斥反應(yīng)等免疫應(yīng)答中起主要作用。因此,了解體內(nèi)抗原特異性的CTL數(shù)量和狀態(tài)有極其重要意義。但由于體內(nèi)抗原特異性CTL的頻度很低,通常不到CD8+總數(shù)的1%,傳統(tǒng)定量方法操作繁瑣且準(zhǔn)確率不高。四聚體染色(tetramer-staining)技術(shù)是最近幾年發(fā)展起來的靈敏度最高、操作相對比較簡單的抗原特異性CTL檢測方法。T細(xì)胞識別抗原有MHC限制性,HLA-A0201是我國人群中出現(xiàn)頻率最高的HLAI類基因,實(shí)驗(yàn)中,我們選擇構(gòu)建HLA-A0201四聚體以篩查廣泛人群;采用基因工程合成技術(shù),通過一段柔性序列把MHC輕鏈β2 m的C端和MHC重鏈分子HLAA0201胞外區(qū)N端相連,并在HLA分子胞外區(qū)C端連上15aa的BSP得到重組單鏈MHC分子,以包涵體形式表達(dá)后在HLA限制性表位肽存在下重折疊得到MHC-抗原肽復(fù)合物,生物素化后利用親合素和生物素的特異性結(jié)合,用熒光標(biāo)記的親合素鰲合四個(gè)復(fù)合物分子,成功構(gòu)建獲得能在流式細(xì)胞儀上用于檢測的四聚體,并驗(yàn)證了它的生物學(xué)有效性。現(xiàn)有的研究已證實(shí)乙肝病人外周血中病毒特異性的CTL數(shù)量隨病情嚴(yán)重程度和病程變化而改變,并且不同抗原特異的CTL數(shù)量不同。在本實(shí)驗(yàn)中我們選擇分別來自HBV表達(dá)的四種蛋白(核心蛋白HBC,多聚酶蛋白HBP,外膜蛋白HBS,X蛋白HBX)的抗原肽構(gòu)建成了四種四聚體,以期檢測時(shí)能全面反映病人體內(nèi)HBV特異性CTL的水平。其中含HBX表位肽的四聚體之前未見報(bào)道。 (三)HBV陽性肝移植病人外周血中HBV特異性CTL的頻度與急性排斥的相關(guān)性研究 HBV-DNA是反映病毒復(fù)制的特異性標(biāo)志,在一定范圍內(nèi)HBV-DNA的數(shù)量和病毒特異性CTL數(shù)量相關(guān)。病例回顧已提示病毒載荷升高病人急性排斥率上升,可以推測病毒特異性CTL可能對急性排斥有所作用。為證實(shí)這一推測,我們利用四聚體技術(shù)檢測了手術(shù)及排斥反應(yīng)前后病人CTL的數(shù)量。 在對東方肝膽醫(yī)院膽道二科51例接受肝移植治療的HBV陽性肝移植病人篩查后,其中HLA-A2+的18例病人入選實(shí)驗(yàn)。分別測定移植術(shù)前一天和術(shù)后第12天時(shí)病人外周血中針對HBV表達(dá)四種蛋白的特異性CTL的數(shù)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,移植病人存在針對多種抗原的CTL,術(shù)前整體HBV特異性CTL數(shù)量不高,和文獻(xiàn)報(bào)道慢性乙肝病人特異性CTL數(shù)量基本一致。Mann-Whitney U檢驗(yàn)表明,不同病毒載荷組病人之間CTL總數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,可能和病毒各抗原、免疫原性的不同以及免疫耐受有關(guān)。Wilcoxon signed ranks Z檢驗(yàn)顯示移植術(shù)后CTL總數(shù)和術(shù)前相比有顯著性差異,符合免疫抑制劑的作用。在18例入選病人中3例發(fā)生經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢查和病理活檢證實(shí)的急性排斥。Mann-Whitney U檢驗(yàn)表明排斥病人的術(shù)前CTL數(shù)量與未發(fā)生排斥病人比有顯著差異,提示HBV特異性CTL的數(shù)量和急性排斥發(fā)生有一定關(guān)系。
【學(xué)位單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2007
【中圖分類】：R512.62;R657.3
【部分圖文】：

正常肝組織

交界性,中央靜脈出血性炎

輕度,中央靜脈出血性炎（1分）
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 鄭樹森;;中國肝移植技術(shù)熱點(diǎn)與前沿探討[J];現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué);2011年07期

2 陸才德;;我國肝移植現(xiàn)狀和展望[J];現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué);2011年07期

3 俞飛虹;林紅軍;彭曉靜;葉新華;;彩色多普勒超聲對肝移植術(shù)后膽道并發(fā)癥早期預(yù)測的價(jià)值[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年09期

4 許桐林;蔡衛(wèi)華;胡進(jìn)勇;盧朝德;肖旭;邱烽;;肝移植術(shù)后患者他克莫司血藥濃度的比較[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年11期

5 楊揚(yáng);陳規(guī)劃;;肝臟移植病人術(shù)后免疫治療[J];中國實(shí)用外科雜志;2011年08期

6 張起帆;朱晨;林建華;唐彬;張國偉;王宇;周杰;;肝移植術(shù)后非吻合口膽管狹窄危險(xiǎn)因素的Logistic分析[J];中國現(xiàn)代普通外科進(jìn)展;2011年06期

7 葉志霞;;“十一五”期間上海市人體器官移植的護(hù)理進(jìn)展[J];解放軍護(hù)理雜志;2011年17期

8 ;CRTER關(guān)注“肝移植免疫用藥、影象評估、排斥反應(yīng)”內(nèi)容[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年31期

9 馬昊蕓;趙雷;;肝移植術(shù)后經(jīng)口氣管插管患者的口腔護(hù)理[J];當(dāng)代護(hù)士(�？瓢�);2011年06期

10 羅葆華;陳紅;;肝移植患者術(shù)后的臨床觀察[J];寧夏醫(yī)學(xué)雜志;2011年07期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王海梁;趨化因子CXC亞族及其受體CXCR3在肝移植急性排斥反應(yīng)中的作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

2 譚浩翔;受體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞輸注在大鼠原位肝移植中的作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2007年

3 欒曉峰;聯(lián)合多藥耐藥基因-1轉(zhuǎn)染骨髓造血干細(xì)胞移植防治肝癌肝移植術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

4 李鴻;CCL3L1，CCL4L1/CCR5基因多態(tài)性與肝移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)與乙肝復(fù)發(fā)的關(guān)系[D];浙江大學(xué);2011年

5 傅耀文;同種異體腎移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)臨床診斷及免疫耐受監(jiān)測實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2004年

6 彭勇;核因子-κB圈套協(xié)同CTLA4-Ig抗大鼠肝移植急性排斥反應(yīng)的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

7 宋維亮;活體小腸移植的臨床及基礎(chǔ)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

8 張更;激素抵抗性排斥反應(yīng)患者1型血管緊張素Ⅱ受體自身抗體的表達(dá)及其與RAS基因多態(tài)性的關(guān)系研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2007年

9 王亦斌;急性排斥反應(yīng)過程中外周血穿孔素和顆粒蛋白酶B mRNA表達(dá)的研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

10 周勇安;人IL-10和TGF-β_1基因體外共轉(zhuǎn)染對大鼠移植肺保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李軍;熱休克蛋白70在肝移植急性排斥反應(yīng)發(fā)生中的作用及預(yù)測診斷價(jià)值[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

2 黃國榮;HO-1高表達(dá)對DA到Lewis大鼠肝移植急性排斥反應(yīng)的影響[D];南京醫(yī)科大學(xué);2008年

3 甘樹杰;趨化因子Mig、IP10、I-TAC及受體CXCR3在肝移植后急性排斥反應(yīng)中的表達(dá)及意義[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

4 章玉冰;膽紅素預(yù)處理對大鼠移植肝保護(hù)作用的研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2008年

5 李潺;肝移植術(shù)后糖尿病危險(xiǎn)因素分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

6 陳康壽;肝移植術(shù)后膽道并發(fā)癥的病因分析和診治體會[D];山東大學(xué);2010年

7 羅柳平;Treg聯(lián)合imDC誘導(dǎo)大鼠肝移植免疫耐受的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

8 奚斌;肝移植術(shù)后癲癇的診治分析[D];浙江大學(xué);2010年

9 張翠紅;肝移植術(shù)后早期超聲檢查中肝動脈阻力指數(shù)增高的影響因素與意義[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2008年

10 凌琪;肝移植術(shù)后早期急性腎功能不全的預(yù)測[D];浙江大學(xué);2007年

本文編號：2857348