慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,CP)是一種進(jìn)展性、不可逆的胰腺外分泌及內(nèi)分泌組織損毀性病變,最終導(dǎo)致胰腺顯著的外分泌功能損害(消化不良)和糖尿病。在西方國家,酗酒是慢性胰腺炎的最常見病因,占全部慢性胰腺炎的70%～90%。其他病因包括基因突變、熱帶性慢性胰腺炎,胰管梗阻,高甘油三脂血癥,高鈣血癥及自身免疫性胰腺炎等等。一部分無明確病因者稱為特發(fā)性慢性胰腺炎(idiopathic chronic pancreatitis,ICP)。 近年來,隨著人們對(duì)于基因及環(huán)境因素的深入分析研究,特發(fā)性慢性胰腺炎的病例正逐漸減少。因此,進(jìn)行陽離子胰蛋白酶原基因(cationic trypsinogen gene,PRSS1)、絲氨酸轉(zhuǎn)肽酶抑制劑Kazal type 1(serine protease inhibitor Kazal type 1,SPINK1)等基因的測序?qū)τ谏钊肓私馕覈砸认傺谆颊卟∫蚣鞍l(fā)病機(jī)制有著重大作用。 我們首先對(duì)慢性胰腺炎患者進(jìn)行PRSS1及SPINK1測序以尋找中國大陸漢族人群慢性胰腺炎的常見突變位點(diǎn),并試圖從基因組學(xué)層面探討其發(fā)病機(jī)制。雖然Y-T Chang等人通過基因測序后的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出:早發(fā)型特發(fā)性胰腺炎患者較晚發(fā)者有著更高的SPINK1基因突變率,但是在我們的實(shí)驗(yàn)中卻發(fā)現(xiàn)存在同一基因突變的特發(fā)性胰腺炎也有晚發(fā)的情況,并且具有同一突變的同卵雙生子之間發(fā)病時(shí)間也可相差30年以上。這些問題僅憑之前的研究無法解釋,因此,本研究針對(duì)這一問題進(jìn)行了深入的基因組學(xué)以及調(diào)控組學(xué)研究。 我們首利用ELISA對(duì)突變進(jìn)行功能驗(yàn)證。并進(jìn)一步利用雙向差異凝膠電泳及生物信息學(xué)方法對(duì)早發(fā)型特發(fā)性胰腺炎患者及晚發(fā)型特發(fā)性胰腺炎患者進(jìn)行血漿差異蛋白質(zhì)篩選及其相關(guān)microRNA預(yù)測,結(jié)合芯片篩選到的早發(fā)型及晚發(fā)型特發(fā)性胰腺炎患者血漿差異microRNA,通過體外實(shí)驗(yàn)最終揭示可能參與特發(fā)性胰腺炎早發(fā)的因素。 通過TIGAR-O系統(tǒng)對(duì)中國大陸漢族慢性胰腺炎患者進(jìn)行分類,并結(jié)合基因檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn):遺傳性胰腺炎符合既往國外研究結(jié)果,特發(fā)性胰腺炎的c.194+2TC突變位點(diǎn)與中國臺(tái)灣人群相似,且突變率很高(46.6%),并傾向早發(fā)。 我們通過對(duì)一對(duì)發(fā)病時(shí)間相差30年又具有c.194+2TC突變的同卵雙生子的血漿進(jìn)行雙向差異凝膠電泳,結(jié)果表明:早發(fā)者與晚發(fā)者血漿中存在差異蛋白,其中包括血漿谷胱甘肽過氧化物酶(Plasma glutathione peroxidase,GPx3),早發(fā)者血漿GPx3表達(dá)量明顯低于晚發(fā)者。我們的研究中發(fā)現(xiàn)早發(fā)型ICP血漿人8-羥基脫氧鳥苷(8-hyohoxydeoxyguanosine,8-OHdG)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)較晚發(fā)型ICP明顯上調(diào),并且早發(fā)型ICP與晚發(fā)型ICP較正常人群均明顯上調(diào)檢測結(jié)果表明早發(fā)者的氧化損傷程度較晚發(fā)者及正常人群均嚴(yán)重。因此我們推測:早發(fā)型ICP患者GPx3的低表達(dá)降低了其對(duì)于機(jī)體氧化損傷的保護(hù)作用,而這可能是特發(fā)性胰腺炎早發(fā)的一個(gè)重要原因。 miRNA芯片結(jié)果表明:早發(fā)型特發(fā)性胰腺炎與晚發(fā)型特發(fā)性胰腺炎患者血漿中hsa-miR-453有明顯差異,早發(fā)型患者血漿hsa-miR-453表達(dá)量高于晚發(fā)型。通過生物信息學(xué)預(yù)測發(fā)現(xiàn),hsa-miR-453可能參與GPx3的調(diào)節(jié)。因此我們進(jìn)行了體外實(shí)驗(yàn),通過熒光素酶報(bào)告基因分析發(fā)現(xiàn):hsa-miR-453的上調(diào)的確可以導(dǎo)致GPx3的低表達(dá)。 基于以上結(jié)果,我們認(rèn)為:hsa-miR-453上調(diào),導(dǎo)致其血漿谷胱甘肽過氧化物酶表達(dá)量降低,引發(fā)機(jī)體抗氧化保護(hù)機(jī)制的減弱,從而參與了特發(fā)性胰腺炎的早發(fā)。 因此,本實(shí)驗(yàn)中,我們提出了SPINK1基因上c.194+2TC突變并非特發(fā)性胰腺炎的早發(fā)的唯一原因,hsa-miR-453的上調(diào)所引發(fā)的GPx3低表達(dá)使得抗氧化保護(hù)機(jī)制降低也可能是參與ICP早發(fā)的因素之一。 由于慢性胰腺炎病因復(fù)雜,發(fā)病的確切機(jī)制尚未完全闡明,因此慢性胰腺炎的治療仍是目前的難題之一。慢性胰腺炎的內(nèi)鏡治療原則是以胰液流出梗阻所造成的胰管高壓和胰腺實(shí)質(zhì)壓力增高而導(dǎo)致的腹痛為前提。狹窄,結(jié)石及胰管中斷是造成慢性胰腺炎胰管梗阻的三大主要原因。以往,對(duì)于經(jīng)內(nèi)鏡逆行胰膽管造影(Encoscopic Retrograde Cholangio-Pancreatography, ERCP)失敗或無法行ERCP治療的患者來說,只能行外科手術(shù)或保守治療。但是我們對(duì)于復(fù)雜的慢性胰腺炎的介入治療做了大膽嘗試:率先為一名胰十二指腸切除術(shù)后出現(xiàn)嚴(yán)重胰管擴(kuò)張并發(fā)癥的患者進(jìn)行了超聲內(nèi)鏡引導(dǎo)下經(jīng)胃壁胰管穿刺置管引流術(shù),并取得了明顯療效。 論文主要分為以下四個(gè)部分:第一章對(duì)中國大陸漢族人群慢性胰腺炎進(jìn)行了基因分析;第二章分析了中國大陸人群特發(fā)性胰腺炎的發(fā)病早晚可能與GPx3及hsa-miR-453的表達(dá)有關(guān);第三章講述了我們首次嘗試在EUS引導(dǎo)下經(jīng)胃壁胰管穿刺置管引流治療Whipple術(shù)后慢性胰腺炎胰管高壓患者;最后為文獻(xiàn)綜述,介紹了慢性胰腺炎病因構(gòu)成、治療研究進(jìn)展及慢性胰腺炎與胰腺癌的關(guān)系。
【學(xué)位單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2011
【中圖分類】：R576
【部分圖文】：

慢性胰腺炎發(fā)病的遺傳學(xué)基礎(chǔ)及防治研究Kazal type 1 ，SPINK1）的突變與慢性胰腺炎的發(fā)病有關(guān)[35]。SPINK1 是在胰腺腺泡中合成的 56 個(gè)氨基酸的多肽，它與糜蛋白酶原同時(shí)合并成糜蛋白酶原共同包裹在酶原顆粒中。它是一種有效的蛋白酶抑制劑，可以在胰管內(nèi)滅活胰蛋白酶的活性，起到保護(hù)腺泡的作用，是胰腺腺泡的第一道內(nèi)在防御線[35-38]。SPINK1 常見突變是N34S。這種突變是主要在特發(fā)性慢性胰腺炎患者中存在。進(jìn)一步研究顯示 SPINK1的突變與酒精性慢性胰腺炎和熱帶性慢性胰腺炎也有關(guān)聯(lián)[39-43]。PRSS1 與 SPINK1基因突變參與慢性胰腺炎發(fā)病機(jī)制示意圖如圖 1.1 所示：9期 孫暢：慢性胰腺炎發(fā)病的遺傳學(xué)基礎(chǔ)及防治研究 E064

二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文因此人們不得不注意到遺傳背景在這類疾病發(fā)生中的作用[19]。于是，人們逐現(xiàn)其他病因的慢性胰腺炎（如熱帶性胰腺炎、酒精性慢性胰腺炎）也與某些基如 SPINK1、PRSS2、CFTR 突變[45-48]有關(guān)�？赡苷腔蛲蛔兣c環(huán)境因素如飲酒煙等的共同作用導(dǎo)致了慢性胰腺炎的發(fā)生[49-52](圖 1.2)。學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 2011年 第09期 醫(yī)藥衛(wèi)生科技輯

第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文- 18 -圖1.7 家系1測序結(jié)果：圖A所示為II-1的突變位點(diǎn)：PRSS1基因2號(hào)外顯子92A>T(N29I)突變;圖B所示為II-1的父親I-1也存在上述突變。相關(guān)博士學(xué)位論文 2011年 第09期 醫(yī)藥衛(wèi)生科技輯 E064-19-18
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2847564