目的：探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)通過誘導(dǎo)肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cell, HSCs)分泌尿激酶型纖溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator, uPA)及抑制其活性特異性抑制劑一纖溶酶激活物抑制劑-1(type-1plasminogen activator inhib-itor,PAI-1),調(diào)節(jié)星狀細(xì)胞凋亡的機(jī)制。 方法：BMSCs分離、培養(yǎng)、傳代至第4代,大鼠原代HSCs系及纖維原細(xì)胞系凍融后傳代使用。應(yīng)用6孔朔料培養(yǎng)板,建立上下雙層細(xì)胞共培養(yǎng)體系。實(shí)驗(yàn)分為5組：①正常共培養(yǎng)組：BMSCs與HSCs共培養(yǎng)；②HSCs空白對照組：HSCs單獨(dú)培養(yǎng)；③HSCs陰性對照組：纖維原細(xì)胞與HSCs與共培養(yǎng)；④uPA特異性抑制劑干預(yù)組：C17H13N3O2· CF3CO2H(UK122)干預(yù)后BMSCs與HSCs共培養(yǎng)組；⑤BMSCs空白對照組：BMSCs單獨(dú)培養(yǎng)。以上體系培養(yǎng)觀察24h、48h、72h,各時(shí)間段于倒置相差顯微鏡下動態(tài)觀察HSCs細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；采用ELISA、熒光定量PCR檢測uPA及PAI-1質(zhì)量濃度及mRNA相對表達(dá)量,用MTT法檢測各組的細(xì)胞增殖抑制率,并確定UK122的最佳干預(yù)濃度；應(yīng)用流式細(xì)胞儀Annexin-V-FITC/PI雙染法檢測HSCs細(xì)胞凋亡情況；Western blot檢測肝細(xì)胞生長因子重鏈(α-chain in Hepatocyte growth factor, HGF-α)蛋白表達(dá)。 結(jié)果：1.RT-PCR檢測共培養(yǎng)后各組HSCs uPA和PAI-1mRNA表達(dá)：正常共培養(yǎng)組HSCs的PAI-1mRNA表達(dá)量(24,48,72h：0.42±0.01,0.54±0.01,0.82±0.01)明顯低于相應(yīng)時(shí)段的HSCs空白對照組(24,48,72h：1.07+0.01,1.09±0.04,1.41±0.03)(P0.01)；正常共培養(yǎng)組uPAmRNA表達(dá)量(24,48,72h：1.55±0.06,1.96±0.05,2.95±0.03)則較HSCs空白對照組(24,48,72h：1.07±0.06%,1.17±0.06,1.28±0.02)增加(P0.01),且呈現(xiàn)時(shí)間依賴性。2.與HSCs空白對照組(24,48,72h：4.46±0.47%,5.35±0.36%,6.09±0.49%)相比,正常共培養(yǎng)組的HSCs在與BMSCs細(xì)胞共培養(yǎng)24h后開始表現(xiàn)明顯增殖抑制(24,48,72h：10.95±0.44%,31.39±2.31%,46.1±2.77%)(P0.01),且呈現(xiàn)時(shí)間依賴性；加入U(xiǎn)K122后HSCs增殖抑制減少,以1μg/ml為UK122最佳干預(yù)濃度；Western blotting及流式細(xì)胞儀Annexin-V-FITC/PI雙染法檢測發(fā)現(xiàn)BMSCs與HSCs共培養(yǎng)24h后,BMSCs促進(jìn)HGF-α的蛋白表達(dá)及HSCs凋亡,與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。UK122干預(yù)后HGF-α表達(dá)下降,HSCs凋亡減少。與正常共培養(yǎng)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 結(jié)論：BMSCs可通過促進(jìn)星狀細(xì)胞分泌uPA,抑制PAI-1分泌,使HGF-α表達(dá)增加,從而促進(jìn)星狀細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2012
【中圖分類】：R575.2
【文章目錄】：
英文縮略語表
摘要
ABSTRACT
前言
材料和方法
結(jié)果
討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
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致謝
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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2846529