發(fā)布時間：2020-10-18 16:20

　　 目的：探討骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)通過誘導肝星狀細胞(hepatic stellate cell, HSCs)分泌尿激酶型纖溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator, uPA)及抑制其活性特異性抑制劑一纖溶酶激活物抑制劑-1(type-1plasminogen activator inhib-itor,PAI-1),調(diào)節(jié)星狀細胞凋亡的機制。 方法：BMSCs分離、培養(yǎng)、傳代至第4代,大鼠原代HSCs系及纖維原細胞系凍融后傳代使用。應(yīng)用6孔朔料培養(yǎng)板,建立上下雙層細胞共培養(yǎng)體系。實驗分為5組：①正常共培養(yǎng)組：BMSCs與HSCs共培養(yǎng)；②HSCs空白對照組：HSCs單獨培養(yǎng)；③HSCs陰性對照組：纖維原細胞與HSCs與共培養(yǎng)；④uPA特異性抑制劑干預(yù)組：C17H13N3O2· CF3CO2H(UK122)干預(yù)后BMSCs與HSCs共培養(yǎng)組；⑤BMSCs空白對照組：BMSCs單獨培養(yǎng)。以上體系培養(yǎng)觀察24h、48h、72h,各時間段于倒置相差顯微鏡下動態(tài)觀察HSCs細胞形態(tài)學改變；采用ELISA、熒光定量PCR檢測uPA及PAI-1質(zhì)量濃度及mRNA相對表達量,用MTT法檢測各組的細胞增殖抑制率,并確定UK122的最佳干預(yù)濃度；應(yīng)用流式細胞儀Annexin-V-FITC/PI雙染法檢測HSCs細胞凋亡情況；Western blot檢測肝細胞生長因子重鏈(α-chain in Hepatocyte growth factor, HGF-α)蛋白表達。 結(jié)果：1.RT-PCR檢測共培養(yǎng)后各組HSCs uPA和PAI-1mRNA表達：正常共培養(yǎng)組HSCs的PAI-1mRNA表達量(24,48,72h：0.42±0.01,0.54±0.01,0.82±0.01)明顯低于相應(yīng)時段的HSCs空白對照組(24,48,72h：1.07+0.01,1.09±0.04,1.41±0.03)(P0.01)；正常共培養(yǎng)組uPAmRNA表達量(24,48,72h：1.55±0.06,1.96±0.05,2.95±0.03)則較HSCs空白對照組(24,48,72h：1.07±0.06%,1.17±0.06,1.28±0.02)增加(P0.01),且呈現(xiàn)時間依賴性。2.與HSCs空白對照組(24,48,72h：4.46±0.47%,5.35±0.36%,6.09±0.49%)相比,正常共培養(yǎng)組的HSCs在與BMSCs細胞共培養(yǎng)24h后開始表現(xiàn)明顯增殖抑制(24,48,72h：10.95±0.44%,31.39±2.31%,46.1±2.77%)(P0.01),且呈現(xiàn)時間依賴性；加入UK122后HSCs增殖抑制減少,以1μg/ml為UK122最佳干預(yù)濃度；Western blotting及流式細胞儀Annexin-V-FITC/PI雙染法檢測發(fā)現(xiàn)BMSCs與HSCs共培養(yǎng)24h后,BMSCs促進HGF-α的蛋白表達及HSCs凋亡,與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。UK122干預(yù)后HGF-α表達下降,HSCs凋亡減少。與正常共培養(yǎng)組比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。 結(jié)論：BMSCs可通過促進星狀細胞分泌uPA,抑制PAI-1分泌,使HGF-α表達增加,從而促進星狀細胞凋亡。
【學位單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2012
【中圖分類】：R575.2
【文章目錄】：
英文縮略語表
摘要
ABSTRACT
前言
材料和方法
結(jié)果
討論
小結(jié)
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
發(fā)表文章

【共引文獻】

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本文編號：2846529