第一部分上海地區(qū)離退休高級公務(wù)員非酒精性脂肪性肝病的隊列研究【背景和目的】本研究通過對上海地區(qū)60周歲以上離退休高級公務(wù)員進(jìn)行5年隊列隨訪,研究非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)在老年人群中的臨床特征,發(fā)病危險因素及死亡原因。【方法】于2012年納入在上海新華醫(yī)院醫(yī)院老年科的856名就診者(男性697名,女性159名),完善病史及臨床資料的收集,通過超聲診斷NAFLD,并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行5年隨訪。2017年6月對所有人群進(jìn)行復(fù)測,對所有死亡病例進(jìn)行死亡原因調(diào)查。根據(jù)此兩組資料分析老年人中NAFLD的自然病程以及發(fā)病危險因素�！窘Y(jié)果】NAFLD在大于60歲的老年人群中患病率為28.27%,在60-74歲人群中達(dá)到最高峰。5年隨訪期間共39人新確診NAFLD,達(dá)6.35%。校正年齡、性別以及代謝綜合征各組分后,BMI(22.5-25.0)仍是老年人中NAFLD發(fā)病的危險因素,相對危險度(95%置信區(qū)間)為1.393(1.201-1.581)。在BMI小于25.0的老年人中,血糖水平升高以及血壓增高為其NAFLD發(fā)病的危險因素,相對危險度(95%置信區(qū)間)分別為1.446(1.209-1.779)和6.270(1.846-20.939)。NAFLD組全因死亡率為5.79%。5年隨訪期間NAFLD及非NAFLD組中心血管疾病發(fā)病率無顯著差異(16.61%vs 19.83%,p=0.061),但NAFLD組心血管疾病相關(guān)死亡率顯著高于非NAFLD組(36.59%vs 64.28%,p=0.037)。NAFLD的前三位死亡原因分別為:心血管疾病、肺部感染以及肝外惡性腫瘤。【結(jié)論】NAFLD發(fā)病高峰集中于60-75歲年齡段。BMI介于22.5-25kg/m~2是離退休高級公務(wù)員中NAFLD發(fā)病的危險因素,獨立于血糖、血壓等代謝綜合征相關(guān)因素之外。盡管全因死亡率無顯著差異,NAFLD組心血管疾病相關(guān)病死率顯著增高,心血管疾病是NAFLD患者的首要死亡原因。第二部分非酒精性脂肪性肝病中外周血白細(xì)胞DNA甲基化位點的改變。【背景和目的】衰老使人體處于慢性炎癥狀態(tài),可進(jìn)一步加重表觀遺傳修飾紊亂。近年來老年人群中NAFLD患病率逐漸升高。除代謝因素外,表觀遺傳學(xué)改變也是導(dǎo)致NAFLD發(fā)病的因素之一。本研究的目的探討DNA甲基化在NAFLD無創(chuàng)診斷中的應(yīng)用價值�！痉椒ā勘狙芯考{入35名經(jīng)肝穿刺檢查確診NAFLD的患者和30名正常對照組,取外周血DNA進(jìn)行甲基化芯片檢測。甲基化結(jié)果用β值表示,通過多因素分析檢驗甲基化與肝酶和血脂譜的相關(guān)性。存在顯著相關(guān)性的甲基化位點進(jìn)一步用于分析其與NAFLD組織學(xué)特征包括肝臟脂肪樣變、肝細(xì)胞氣球樣變、小葉內(nèi)炎癥以及肝纖維化的相關(guān)性�！窘Y(jié)果】通過肝活檢確診17例NASH,18例單純性脂肪肝(NAFL)。NASH組、NAFL組白細(xì)胞DNA甲基化普遍呈低甲基化水平。甲基化芯片數(shù)據(jù)分析篩選出65個外周血甲基化位點與NAFLD相關(guān),及119個與單純性脂肪肝相關(guān)的位點。多因素分析發(fā)現(xiàn)42個位點與ALT水平相關(guān),而32個位點與血脂水平相關(guān)。這些位點表現(xiàn)出與肝脂肪樣變及小葉性炎癥的強(qiáng)相關(guān)性。其中ACSL4,CTP1A,CRSL1,SIGIRR,SSBP1和ZNF622顯示作為生物標(biāo)志物診斷NASH良好診斷價值。其中SIGIRR和SSBP1的ROC曲線下面積分別達(dá)到0.882和0.817�！窘Y(jié)論】循環(huán)中白細(xì)胞DNA甲基化芯片的檢測顯示其在NAFLD患者中普遍低甲基化改變?yōu)橹?與肝酶、血脂譜以及NAFLD病理學(xué)特征呈顯著相關(guān)性。ACSL4,CTP1A,CRSL1,SIGIRR,SSBP1和ZNF622可為NAFLD臨床表型的分層提供幫助。第三部分GLP-1對ob/ob小鼠脂代謝及肝臟病理學(xué)變化的影響【背景和目的】衰老狀態(tài)導(dǎo)致表觀遺傳修飾紊亂,前期研究表明NAFLD患者中DNA甲基化與肝臟小葉間炎癥存在強(qiáng)相關(guān)性。胰血糖素樣肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)在減重、改善胰島素抵抗及抗炎的作用正逐漸受到認(rèn)識。本研究擬通過重組慢病毒靶向?qū)雘b/ob小鼠體內(nèi),借助持續(xù)提高GLP-1的分泌,觀察其對小鼠脂代謝、肝臟病理學(xué)變化的影響�！痉椒ā�50-55克的ob/ob小鼠40只,隨機(jī)分配為四組:GLP-1組、空病毒(EV)組、高脂喂養(yǎng)(HFD)組和對照組。對照組給予普通飼料喂養(yǎng),其余三組給予高脂飼料。飼養(yǎng)16周時對小鼠行PET/CT全身掃描。隨后GLP-1組給予重組慢病毒LV-GLP-1注射,EV組注射空病毒對照,維持原飼養(yǎng)方法至24周,再次進(jìn)行小鼠全身掃描,測量皮下脂肪及肝臟面積,行血清學(xué)檢驗并取肝臟標(biāo)本進(jìn)行組織學(xué)檢查�！窘Y(jié)果】GLP-1組ob/ob小鼠注射后血清GLP-1水平較其它三組均顯著升高,達(dá)到6.00±1.42pmol/L。EV組、HFD組、對照組的GLP-1水平為5.28±1.18pmol/L,5.27±1.11pmol/L,及5.10±0.64pmol/L(與GLP-1組相比p均0.05)。GLP-1組ob/ob小鼠中,其L1-L2皮下脂肪組織體積在注射后明顯降低(1228.69±237.58mm3 vs 857.10±101.54 mm3,p=0.020);甘油三酯水平在注射后降低,為0.61±0.14mmol/l,與EV組和HFD組相比存在顯著差異(p=0.041和p=0.044),但肝臟甘油三酯含量為0.12±0.03 mmol/g prot,與對照組相比未見統(tǒng)計學(xué)差異。病理學(xué)檢查中,GLP-1組ob/ob小鼠的肝細(xì)胞氣球樣變和小葉內(nèi)炎癥的平均評分最低,與對照組存在統(tǒng)計學(xué)差異(p=0.020以及p=0.010)。四組中脂肪樣變及肝纖維化評分無顯著差異�！窘Y(jié)論】通過建立體內(nèi)持續(xù)GLP-1分泌,可以顯著減少ob/ob小鼠皮下脂肪體積,同時改善小鼠肝臟氣球樣變及小葉間炎癥。但GLP-1水平增高未見使脂肪樣變有所改善,且對肝纖維化作用未見明顯差異。
【學(xué)位單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R575.5
【部分圖文】：

本研究（圖1）最終入組856例受試者，其中男性697人，女性159人，平均年齡79.05±11.29歲。圖1. 研究人群Figure 1. Study Population.在基線時肝臟超聲檢查發(fā)現(xiàn)242人符合NAFLD診斷（28.27%）。其中男性232人，占總?cè)藬?shù)的27.10%。NAFLD患者平均年齡76.12±11.63歲，非NAFLD患者平均年齡為80.28±10.69歲（p=0.027）。NAFLD患者的體重、BMI均顯著高于無NAFLD患者。在生化各項指標(biāo)中，NAFLD組的各項肝酶水平均顯著升高（AST,ALT, GGT, AKP, M-AST）；在血脂譜中，除了LDL-C以外，NAFLD患者也顯示了

圖2 NASH的診斷路徑Figure2. The diagnostic path of NASH.1.5 統(tǒng)計所有資料先經(jīng)正態(tài)分布檢驗，正態(tài)分布的計數(shù)資料和計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，或者個數(shù)及百分比表示。使用 R 軟件中的 IMA 包進(jìn)行甲基化數(shù)據(jù)預(yù)處理，隨后完善 t-test 檢驗。P 值通過 Benjamini and Hochberg 法計算錯誤發(fā)現(xiàn)率即 falsdiscovery rate (FDR) 進(jìn)行校正。在這次的研究中，F(xiàn)DR 低于 5%被視作存在顯著差異。使用多因素線性回歸分析檢驗甲基化位點與肝酶、血脂譜的相關(guān)性，結(jié)果用性別、年齡及BMI進(jìn)行校正。甲基化位點與各個組織學(xué)特點相關(guān)性使用Pearso相關(guān)系數(shù)檢驗。最后，經(jīng)篩選后的甲基化位點進(jìn)行 ROC 曲線分析。診斷效應(yīng)通過曲線下面積（AUC）表示。所有統(tǒng)計分析均使用 SPSS 17.0 software，制圖采用 Graphpad Prism 6.0(GraphPad, La Jolla, CA, USA)。Medcalc 15.8(MedcalSoftware bvba, Ostend, Belgium) 用于 ROC 檢驗。P 值低于 0.05 表示有統(tǒng)計學(xué)意

我們首先對 NAFLD 患者的整體基因組甲基化進(jìn)行分析。在通過芯片探測的 418913 個位點中，我們發(fā)現(xiàn) NASH 組、NAFL 組及正常對照組中CpG 位點甲基化水平都相接近，各組間均不存在顯著差異。根據(jù)與基因位置的關(guān)系，甲基化位點分別位于 CpG 島、N shore、N shelf 和 S shore、S shelf 區(qū) 5大部位（圖 3A）。另外，根據(jù)功能分組，甲基化位點又分位于轉(zhuǎn)錄起始點(TSS)上游200bp和 1500bp 區(qū)域(TSS200 和TSS1500)，5 UTR 和第一外顯子(1st Exon)區(qū)，gene body和 3 -UTR 區(qū)域（圖3）。其中，轉(zhuǎn)錄起始點(TSS)上游200bp和1500bp區(qū)域(TSS200 和 TSS1500)，5 UTR 和第一外顯子(1st Exon)區(qū)，定義為啟動子區(qū)(promoter)。通過對各個部分的 β 值統(tǒng)計，無論是 NASH、NAFL 還是正常對照組，CpG 島或啟動子區(qū)的位點均整體呈低甲基化水平。
【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：2842015