目的研究生長抑素對瘦素誘導大鼠肝星狀細胞(HSC)的活化增殖、蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)表達及JAK2-STAT3通路的影響,探討生長抑素抗肝纖維化的相關機制。方法以重組大鼠瘦素作用于HSC-T6細胞(100 ng/ml),同時加入各濃度的生長抑素(10-6、10-7、10-8、10-9、10-10mol/L)。在處理24 h后,采用CCK-8法檢測HSC增殖的變化,免疫細胞化學檢測p-JAK2及p-STAT3蛋白表達,RT-PCR法檢測α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)和PTP1B的mRNA表達。結果 CCK-8法顯示生長抑素可通過劑量依賴方式抑制瘦素誘導的HSC-T6細胞增殖(P0.05);免疫細胞化學檢測顯示,生長抑素組HSC-T6細胞質p-JAK2及細胞核內p-STAT3蛋白表達明顯低于瘦素對照組(P0.05);RT-PCR法檢測生長抑素干預組HSCα-SMA mRNA的表達較瘦素對照組及空白對照組明顯降低(P0.05),而PTP1B的mRNA表達量升高(P0.05)。結論生長抑素能上調PTP1B的表達,阻斷瘦素在HSC內JAK2-STAT3信號通路的轉導,并且抑制瘦素誘導HSC的活化與增殖。
【部分圖文】：

個條帶積分光密度，與對應的內參gapdh的比值作為半定量值。1．6統(tǒng)計學處理采用SPSS19．0軟件進行分析，數(shù)據以x珋±s表示。方差分析進行多組間差異統(tǒng)計及LSD法進行組間兩兩比較。2結果2．1生長抑素對細胞增殖的影響CCK-8法檢測細胞抑制率顯示:生長抑素呈劑量依賴性抑制瘦素誘導HSC-T6增殖，以400ng/ml濃度時最為明顯，其A值最大，抑制率為21.92%，各組間差異有統(tǒng)計學意義(F=28.6889，P＜0.05)。生長抑素各濃度組與瘦素對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，空白對照組顯著低于瘦素對照組(P＜0.05)。見表2，圖1。表2不同濃度生長抑素對HSC增殖的影響(n=6，x珋±s)組別生長抑素(mol/L)A值抑制率(%)空白對照00．8815±0．0256－瘦素對照(含瘦素100ng/ml)00．9556±0．0293#－生長抑素(含瘦素100ng/ml)10－100．8755±0．0307*8．3910－90．8583±0．0368*10．1810－80．8292±0．0379*13．2410－70．7942±0．0290*16．9010－60．7462±0．0233*21．92與瘦素對照組比較:*P＜0．05;與空白對照組比較:#P＜0．05圖1不同濃度生長抑素對HSC增殖的影響1:空白對照組;2:瘦素對照組;3～7:生長抑素10－10、10－9、10－8、10－7、10－6mol/L濃度組;與瘦素對照組比較:*P＜0．05;與空白對照組比較:#P＜0.05·1388·安徽醫(yī)科大學學報ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Oct;49(10)

圖2生長抑素對胞內p-JAK2和p-STAT3蛋白表達的影響二步法×400A:瘦素對照組;B:生長抑素組;C:空白對照組;1:p-JAK2;2:p-STAT32．2生長抑素對p-JAK2蛋白表達的影響p-JAK2的表達見于HSC-T6細胞的胞質，表現(xiàn)為棕黃色顆粒樣，見圖2�？瞻讓φ战MHSC-T6細胞中p-JAK2表達較少，在瘦素作用24h后濃度的增大，表達增加，OD值差異有統(tǒng)計學意義(0.0660±0.0020vs0.1269±0.0041，P＜0.05)，而生長抑素組與瘦素對照組比較表達顯著減少，OD值降低(0.0965±0.0025vs0.1269±0.0041，P＜0.05)。2．3生長抑素對p-STAT3蛋白表達的影響p-STAT3的表達見于HSC-T6細胞的胞核或核周，表現(xiàn)為棕黃色顆粒樣，見圖2�？瞻讓φ战MHSC-T6細胞中p-JAK2表達較少，在瘦素作用24h后濃度的增大，表達增加，OD值差異有統(tǒng)計學意義(0.1538±0.0065vs0.2097±0.0058，P＜0.05)，而生長抑素組與瘦素對照組比較表達顯著減少，OD值降低(0.1846±0.0034vs0.2097±0.0058，P＜0.05)。2．4生長抑素對α-SMAmＲNA表達的影響空白對照組、瘦素對照組和生長抑素組間比較差異有統(tǒng)計學意義(F=69.9969，P＜0.05)。瘦素對照組在瘦素作用HSC-T6細胞24h后α-SMAmＲNA相對內參的表達量為1.3035±0.0205，高于空白對照組的1.1284±0.0195(P＜0.05)。生長抑素組α-SMAmＲNA相對內參的表達量為1.1238±0.0234，顯著低于瘦素對照組(t=10.004，P＜0.05)，而與空白對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，見圖3。圖3α-SMAmＲNA的表達A:電泳圖;B:相對表達量;M:Marker;1:瘦素對照組;2:生長抑素組;3:空白對照組;與瘦素對照組比較:*P＜0．05;與空白對照組比較:#P＜0.052．5生長抑素對PTP1BmＲNA表達的影響空白對照組、瘦素對照組和生長抑素組間比較差異有安徽醫(yī)

長抑素組與瘦素對照組比較表達顯著減少，OD值降低(0.1846±0.0034vs0.2097±0.0058，P＜0.05)。2．4生長抑素對α-SMAmＲNA表達的影響空白對照組、瘦素對照組和生長抑素組間比較差異有統(tǒng)計學意義(F=69.9969，P＜0.05)。瘦素對照組在瘦素作用HSC-T6細胞24h后α-SMAmＲNA相對內參的表達量為1.3035±0.0205，高于空白對照組的1.1284±0.0195(P＜0.05)。生長抑素組α-SMAmＲNA相對內參的表達量為1.1238±0.0234，顯著低于瘦素對照組(t=10.004，P＜0.05)，而與空白對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，見圖3。圖3α-SMAmＲNA的表達A:電泳圖;B:相對表達量;M:Marker;1:瘦素對照組;2:生長抑素組;3:空白對照組;與瘦素對照組比較:*P＜0．05;與空白對照組比較:#P＜0.052．5生長抑素對PTP1BmＲNA表達的影響空白對照組、瘦素對照組和生長抑素組間比較差異有安徽醫(yī)科大學學報ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Oct;49(10)·1389·
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