發(fā)布時間：2020-09-29 20:45

　　 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是一個嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。全球約20億人被證明有HBV感染,其中3.5億人為HBV慢性感染,每年約有100萬人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌。近年來由于非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的發(fā)病率逐年增加,導(dǎo)致肝細(xì)胞脂肪變與慢性乙型肝炎(chronic viral hepatitis B,CHB)在同一個體中合并存在的病例明顯增多,對兩者相關(guān)性的研究逐漸受到重視。但迄今為止,HBV與非酒精性脂肪肝的關(guān)系尚未明確。流行病學(xué)調(diào)查顯示CHB患者肝脂肪變的患病率相差很大(3%~76%),已有多項研究表明HBV與脂肪肝聯(lián)系密切,且為脂肪肝的危險因素。但另有研究表明CHB患者肝細(xì)胞脂肪變的發(fā)生主要與宿主的代謝因素相關(guān)(如年齡、肥胖、血脂水平和代謝綜合征等因素),而與病毒因素(如HBeAg和HBV-DNA載量等)關(guān)系不密切。因此HBV與脂肪肝的關(guān)系有待于進一步的研究。此次研究從群體和細(xì)胞兩個角度探討HBV與肝細(xì)胞脂肪變的關(guān)系及其可能的作用機制,并確定與肝細(xì)胞脂肪變有關(guān)的HBV編碼蛋白。該研究結(jié)果不僅有助于判斷HBV感染者患非酒精性脂肪肝的風(fēng)險,加深人們對HBV致病機制的認(rèn)識,更為有效地進行脂肪肝的防治提供理論基礎(chǔ),這對HBV高發(fā)國家具有特別重要的現(xiàn)實意義。 一、HBV感染與非酒精性脂肪肝關(guān)系的病例對照研究 采用病例對照研究方法,應(yīng)用多因素統(tǒng)計學(xué)分析法控制混雜因素的影響,探討HBV感染血清標(biāo)志物、感染模式、HBV-DNA載量及病毒與宿主因素的交互作用與非酒精性脂肪肝的關(guān)系。研究結(jié)果顯示:NAFLD組中HBV總感染率(84.16%)高于對照組(69.21%)(P0.05),控制混雜因素影響后,HBV感染者發(fā)生NAFLD的風(fēng)險(OR)為3.15(95%CI:1.18~5.50);在10種感染模式,有六種感染模式與NAFLD發(fā)生密切相關(guān),其中HBsAg、Anti-HBe、Anti-HBc三項均陽性的感染模式患NAFLD的危險性最高,OR為6.47(95%CI: 2.90~14.44);其次分別為感染模式6(HBsAg、Anti-HBc二項陽性)、模式7(Anti-HBs、Anti-HBc二項陽性)、模式5(Anti-HBs、Anti-HBe、Anti-HBc三項陽性)、模式4(Anti-HBe、Anti-HBc二項陽性)和模式3(Anti-HBc單項陽性)的危險性相對較高;HBV感染與HDL-C異常存在協(xié)同致非酒精性脂肪肝的作用(P交互作用=0.034);沒發(fā)現(xiàn)HBV-DNA檢出率及平均滴度與非酒精性脂肪肝存在關(guān)聯(lián)。 二、乙型肝炎病毒對脂類代謝相關(guān)蛋白的影響 根據(jù)已有的蛋白質(zhì)組學(xué)研究結(jié)果,在HBV肝細(xì)胞系模型(pREP-HBV)的基礎(chǔ),結(jié)合瞬時轉(zhuǎn)染的方法,從蛋白和mRNA水平進一步驗證HBV對脂類代謝相關(guān)蛋白,包括載脂蛋白AI(apolipoprotein A-I,APOA1),載脂蛋白E(apolipoprotein E,APOE),錳超氧化物歧化酶(superoxide dismutase 2 ,SOD2),依賴還原型輔酶I/II:醌氧化還原酶(NAD(P)H dehydrogenase, quinone 1,NQO1),肝型脂肪酸結(jié)合蛋白(fatty acid binding protein 1,FABP1)和�；o酶A:膽固醇�；D(zhuǎn)移酶2(acetyl-Coenzyme A acetyltransferase 2,ACAT2)的影響。研究結(jié)果顯示:與對照細(xì)胞株相比,RHBV-3細(xì)胞株中ApoAI、APOE、SOD2和NQO1基因的蛋白和轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)下調(diào),FABP1基因蛋白和轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)上調(diào),變化趨勢與蛋白質(zhì)組結(jié)果一致,ACAT2表達(dá)沒明顯變化。為了進一步驗證HBV對脂類代謝相關(guān)蛋白的影響,將含HBV全基因組的重組質(zhì)粒pRep-HBV和對照質(zhì)粒pRepsal分別轉(zhuǎn)染HepG2、Huh7和YY細(xì)胞。結(jié)果顯示,HBV對HepG2、Huh7和YY細(xì)胞SOD2、NQO1和FABP1三個基因的蛋白和轉(zhuǎn)錄水平均有影響,其中SOD2、NQO1基因的蛋白和轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)下調(diào),FABP1基因的蛋白和轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)上調(diào),變化趨勢與蛋白質(zhì)組結(jié)果一致;HBV可使HepG2細(xì)胞的ApoAI蛋白水平表達(dá)下調(diào),但對ApoAI轉(zhuǎn)錄水平?jīng)]有影響;HBV對HepG2、Huh7和YY細(xì)胞的ApoE和ACAT2基因蛋白表達(dá)水平均沒有影響,但HBV可使三株細(xì)胞的ApoE基因轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)下調(diào)及ACAT2基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平上調(diào),變化趨勢與蛋白組學(xué)結(jié)果一致。比較細(xì)胞株和瞬時轉(zhuǎn)染實驗的分析結(jié)果,發(fā)現(xiàn)在上述六個脂類代謝相關(guān)蛋白中,SOD2,NQO1和FABP1瞬時轉(zhuǎn)染實驗分析結(jié)果與細(xì)胞株實驗分析結(jié)果完全一致,且mRNA表達(dá)變化趨勢與其翻譯產(chǎn)物(蛋白質(zhì))表達(dá)變化趨勢相同。上述研究結(jié)果表明HBV整體水平對脂類代謝相關(guān)蛋白表達(dá)具有影響,特別是對SOD2,NQO1和FABP1三個蛋白表達(dá)的影響尤為明顯,該結(jié)果為HBV致肝細(xì)胞脂肪變作用機制的深入研究打下良好基礎(chǔ)。 三、乙型肝炎病毒蛋白對SOD2,NQO1和FABP1表達(dá)的影響 應(yīng)用AdEasy XL System構(gòu)建HBV編碼蛋白的重組腺病毒Ad-X、Ad-S、Ad-MS、Ad-LS、Ad-C、Ad-E、Ad-P和空病毒(Ad0),從蛋白和mRNA水平探討HBV編碼蛋白與特定宿主細(xì)胞中SOD2,NQO1和FABP1表達(dá)的對應(yīng)關(guān)系。研究結(jié)果如下:成功構(gòu)建可分別表達(dá)HBV X、CORE、E、S、MS、LS、P蛋白的重組腺病毒;與空病毒Ad0感染組相比,HBx可導(dǎo)致HepG2細(xì)胞SOD2和NQO1的轉(zhuǎn)錄和蛋白水平表達(dá)下調(diào),FABP1的轉(zhuǎn)錄和蛋白水平表達(dá)上調(diào);HBV主蛋白(S)可使HepG2細(xì)胞FABP1的轉(zhuǎn)錄和蛋白水平表達(dá)上調(diào),SOD2和NQO1的轉(zhuǎn)錄水平下調(diào);HBV中蛋白(MS)可使HepG2細(xì)胞SOD2的蛋白水平表達(dá)下調(diào),但三個基因的轉(zhuǎn)錄水平?jīng)]有明顯變化;HBV大蛋白(LS)可使HepG2細(xì)胞FABP1蛋白表達(dá)水平上調(diào),但三個基因轉(zhuǎn)錄水平均沒有明顯變化;HBV聚合酶(polymerase,P)蛋白對HepG2細(xì)胞三個基因的蛋白表達(dá)水平均沒有明顯影響,但可使SOD2和NQO1轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)下調(diào);HBV CORE蛋白對HepG2細(xì)胞三個基因的蛋白和轉(zhuǎn)錄水平均無影響;HBV E蛋白使HepG2細(xì)胞SOD2的蛋白和轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)下調(diào)及NQO1轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)下調(diào)。上述結(jié)果提示,在HBV 7個蛋白中,HBx蛋白及主蛋白對SOD2,NQO1和FABP1表達(dá)的影響尤其明顯,因此,HBx和主蛋白可能在HBV相關(guān)的肝細(xì)胞脂肪變發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。
【學(xué)位單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R512.6;R575.5
【部分圖文】：

V 總感染率與非酒精性脂肪肝的關(guān)系非酒精性脂肪組和對照組的五項 HBV 感染血清標(biāo)志物進行了酒精性脂肪肝組中 HBV 總感染率（HBsAg、HBeAg、Anti-HBe任一項陽性）為 84.16%，高于對照組的 69.21%，差異具有.05）。進一步采用非條件 Logistic 回歸分析，控制年齡、性食生活習(xí)慣及臨床特征等因素的影響后，結(jié)果顯示 HBV 感染發(fā)病的危險因素，其調(diào)整 OR 值為 3.15(95%CI:1.18~5.50)。表 1.4 HBV 感染與非酒精性脂肪肝的關(guān)系ble 1.4 The relationship between HBV infection and NAFLD脂肪肝組 對照組n % n %2χP 粗 OR 及 95%C324 84.16 571 69.2161 15.84 254 30.7930.44 0.00 2.36(1.73~3.2284.16 %%

0 20 40 60 80 100 120脂肪肝組對照組Type1Type2Type3Type4Type5Type6Type7Type8Type9Type10*15.03%15.76%7.03%3.15%20.73%2.55%24.61%8.12%2.91%0.12%圖3 病例組和對照組HBV感染模式的比較7.53%8.31%9.35%5.19%18.96%1.56%33.25%14.03%0.52%1.03%圖 1.2 病例組和對照組 感染模式構(gòu)成的比較Fig 1.2 Distribution of HBV serum models among caseswith NAFLD and controls

模式2χ P 值 粗 OR 及 95%CI 調(diào)整 OR 值及 95%1 - - 1（reference） 1（reference）2 0.26 0.61 1.16 (0.66~2.02) 1.56(0.69~3.56)3 12.38 0.00 2.83(1.59 ~5.06 ) 2.90(1.24~6.79)*4 11.73 0.00 3.45(1.70 ~7.00 ) 3.31(1.19~9.24)*5 6.82 0.01 1.91(1.18 ~3.11 ) 3.43(1.66~7.09)*6 0.16 0.69 1.22(0.46 ~3.28 ) 4.92(1.26~19.21)7 19.66 0.00 2.83(1.79 ~4.47 ) 3.46(1.74~6.87)*8 21.82 0.00 3.61(2.11 ~6.19 ) 6.47(2.90~14.44)9 0.02 0.90 0.93(0.33 ~2.65 ) 0.36(0.05~2.37)10 3.12 0.08 8.97(0.79 ~102.24 ) 4.48(0.18~114.17

【引證文獻】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 陳娟;HBx對HepG2細(xì)胞脂代謝的影響及可能的機制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

2 饒紫蘭;乙型肝炎表面抗原主蛋白改變HepG2細(xì)胞脂代謝基因表達(dá)[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

本文編號：2830236