背景與目的 幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,HP)是螺旋狀、微需氧的革蘭氏陰性細菌,定植在胃上皮細胞和胃粘膜層。研究表明:約50%的世界人口感染有HP,盡管這些感染者中的大多數(shù)沒有癥狀,但HP的長期感染明顯增加消化性潰瘍和遠端胃腺癌發(fā)生的危險。已有越來越多的證據(jù)表明HP是慢性胃炎、消化性潰瘍、胃腺癌和胃粘膜相關淋巴組織(mucosa-associated lymphoid tissue,MALT)淋巴瘤的重要致病因素。因此,深入探討HP的致病機制對尋求更新、更好的治療靶點有重要意義。 研究表明HP感染后患者胃粘膜中炎癥細胞因子TNF-α、IL-8、IFN-γ等和非感染患者相比顯著增加,并且認為這些炎性細胞因子的增高和HP激活核因子kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-κB)有關。然而,啟動細菌與受體相互作用并激活下游信號事件的受體并未完全闡明。 Toll樣受體(Toll-like receptors,TLRs)是一類進化上高度保守的Ⅰ型跨膜蛋白家族,通過識別微生物成分在宿主第一線防御中起重要作用。TLRs識別表達于病原體上保守的與致病相關的分子—病原相關分子模式(pathogen associatedmolecular pattern,PAMP)。TLRs通過識別PAMP激活NF-κB、活化蛋白-1(activatorprotein-1,AP-1)等,啟動一系列的炎癥信號轉導的級聯(lián)反應,誘發(fā)炎癥反應,引起宿主主動和被動免疫,在機體抗感染免疫中發(fā)揮重要作用。 研究表明表達于胃上皮細胞系的TLR2、TLR5對HP激活NF-κB是必需的,已經(jīng)證實TLRs基因表達的差異與感染的臨床結局有關,以往多以人胃上皮細胞AGS細胞系、胃癌MKN45細胞系及荷蘭豬胃小凹細胞表達的TLRs做為研究對象。至今鮮有TLR2、TLR5在人胃粘膜上皮細胞表達情況的文獻報道。故本實驗應用SYBR GreenⅠ實時逆轉錄-聚合酶鏈反應(reverse transcription-polymerasechain reaction,RT-PCR)方法,半定量檢測12例HP感染患者和12例非HP感染患者的胃粘膜組織中TLR2mRNA及TLR5mRNA的表達,以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)作為內參照;采用S-P免疫組織化學染色檢測35例HP感染患者和33例非HP感染患者胃粘膜組織中TLR5蛋白的表達水平。 本研究的目的是檢測HP感染患者胃粘膜組織中TLR2及TLR5的表達情況及臨床病理意義,并分析其與HP感染之間的關系及可能機制。 材料和方法 HP感染患者胃鏡活檢標本(實驗組)35例,非HP感染患者胃鏡活檢標本(對照組)33例,取自鄭州大學第一附屬醫(yī)院消化內鏡室2008年8月至10月間行電子胃鏡檢查患者活檢標本。均經(jīng)~(14)C呼氣試驗和快速尿素酶試驗證實。標本取出后迅速置于液氮冷凍待用。 按天根生物公司提供的RNAprep pure Tissue Kit試劑盒操作程序分別抽提實驗組、對照組活檢組織總RNA,瓊脂糖凝膠電泳檢測總RNA的28S和18S比例,以評估總RNA的完整性;用分光光度計在260/280nm測定總RNA吸光度,以計算總RNA的純度;按天根生物公司提供的RealMasterMix(SYBR Green)試劑盒操作程序進行SYBR GreenⅠ實時熒光定量PER。ABI 7700熒光定量PCR儀自動生成Ct值和熔解曲線,擴增產物進一步用2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定�；顧z標本采用SP法進行免疫組織化學檢測,由兩位觀察者在雙盲條件下對結果進行評判,用顯微掃描成像系統(tǒng)拍照、儲存圖片。 mRNA相對定量采用比較Ct法(ΔΔCt法);計數(shù)資料采用x~2檢驗;計量資料采用t檢驗;以a=0.05為檢驗水準;統(tǒng)計分析采用SPSS10.0軟件。 結果 1.TLR5mRNA在實驗組和對照組均有表達,實驗組TLR5mRNA表達水平明顯低于對照組,相對表達量是對照組的0.5倍,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 2.TLR2mRNA在實驗組和對照組均有表達,兩組間TLR2mRNA的表達差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 3.實驗組35例患者中有21例TLR5蛋白呈陽性表達,陽性率為60%;對照組中有28例表達為陽性,陽性率為84.8%,兩者差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 結論 1.胃粘膜上皮細胞在mRNA水平表達有TLR2和TLR5,故表達于胃上皮細胞的TLRs可能和HP相互作用,引起胃粘膜的炎癥,造成靶器官的損害。 2.在mRNA和蛋白水平,HP感染可下調胃粘膜上皮細胞TLR5的表達,可能是HP感染長期存在的原因之一。 3.TLR2可能在機體對HP感染的免疫反應中不起主要作用。
【學位單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2009
【中圖分類】：R573
【部分圖文】：

TLRS在胃粘膜組織中的表達:陽性細胞定位于胞膜和/或胞質中，呈棕黃褐色(圖A:SP

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 ;Cellular and Molecular Immunopathogenesis of Ulcerative Colitis[J];Cellular & Molecular Immunology;2006年01期

2 郭云蔚;文卓夫;鄭豐平;;TLR2與TLR4在大腸癌組織中的表達特點[J];廣東醫(yī)學;2007年09期

3 郭秋莎,夏冰;Toll樣受體研究進展與胃腸疾病[J];國外醫(yī)學(消化系疾病分冊);2003年02期

4 鄧樂;謝勇;;幽門螺桿菌感染與Toll樣受體[J];國際消化病雜志;2007年05期

5 劉日明;Toll樣受體與Th1/Th2的應答[J];國外醫(yī)學(免疫學分冊);2005年02期

6 華開羅;夏冰;李春;郭秋莎;夏華向;;Toll樣受體4基因多態(tài)性與消化性潰瘍和幽門螺桿菌感染的相關性研究[J];胃腸病學;2006年07期

7 陳勝;鄒開芳;楊天;譚琰;丁炎波;錢偉;;Toll樣受體(TLR)2、TLR4和TLR9在大鼠結腸炎模型結腸組織中的表達及其意義[J];胃腸病學;2007年06期

8 唐深;TLR家族及其功能研究進展[J];微生物學免疫學進展;2004年02期

9 金伯泉;人類白細胞分化抗原CD命名的最新進展[J];細胞與分子免疫學雜志;2005年02期

10 金伯泉;;固有免疫中模式識別受體及其信號轉導——當代免疫學中最偉大的發(fā)現(xiàn)之一[J];細胞與分子免疫學雜志;2006年01期

本文編號：2825074