發(fā)布時(shí)間：2020-08-28 19:03

　　 第一部分慢性乙型肝炎患者外周血淋巴細(xì)胞表面的PD-1表達(dá)及其影響因素的研究 目的研究慢性乙型肝炎患者外周血外周血單個(gè)核細(xì)胞、CD4+T、CD8+T淋巴細(xì)胞表達(dá)PD-1的情況以及影響PD-1表達(dá)的可能的因素。 方法密度梯度離心法分離63例慢性乙型肝炎患者(其中包括HBeAg(+)患者32例,HBeAg(一)患者31例)、35例乙肝病毒健康攜帶者、18例健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞、CD4+T、CD8+T淋巴細(xì)胞中表達(dá)PD-1的百分比,分析慢性乙型肝炎患者、乙肝病毒健康攜帶者及健康人PD-1表達(dá)的差異；觀察PD-1表達(dá)與HBV感染者ALT水平、乙肝e抗原、病毒復(fù)制指標(biāo)HBV-DNA水平之間的關(guān)系。 結(jié)果HBV健康攜帶組外周血單個(gè)核細(xì)胞、CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞表面PD-1表達(dá)率最高；CHB組次之；健康對(duì)照組最低。HBV健康攜帶組外周血單個(gè)核細(xì)胞、CD4+T淋巴細(xì)胞上PD-1表達(dá)顯著高于健康對(duì)照組及CHB組,CHB組顯著高于健康對(duì)照組(P0.05)。而CD8+T淋巴細(xì)胞上PD-1表達(dá)只在健康對(duì)照組和HBV健康攜帶組之間比較差異顯著(P0.05),其他組間比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。CHB患者外周血單個(gè)核細(xì)胞、CD4+T、CD8+T淋巴細(xì)胞上表達(dá)PD-1百分比與血清ALT及HBV-DNA水平無相關(guān)性。CHB患者eAg是否陽性對(duì)PD-1在外周血單個(gè)核細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞表面表達(dá)率有一定影響：HBeAg(+)組和HBeAg(-)組外周血單個(gè)核細(xì)胞表面表達(dá)PD-1比率分別為：25.88±20.09%和15.39±10.64%,較健康對(duì)照組(10.85±4.45%)明顯升高,HBeAg(+)組和健康對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；HBeAg(+)組PD-1表達(dá)比率顯著高于HBeAg(-)組,P0.01。HBeAg (+)組、HBeAg(-)組、健康對(duì)照組CD4+T淋巴細(xì)胞表面表達(dá)PD-1表達(dá)率分別為：9.15±6.46%、8.65±6.84%、2.37±1.16%,HBeAg(+)組及HBeAg(-)組健與康對(duì)照組CD4+T淋巴細(xì)胞表面PD-1表達(dá)率比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.01。HBeAg(+)組、HBeAg(-)組、健康對(duì)照組CD8+T淋巴細(xì)胞表面PD-1表達(dá)率分別為：3.71±2.79%、3.23±2.39%、1.40±0.31%,HBeAg(+)組及HBeAg(-)組健與康對(duì)照組CD8+T淋巴細(xì)胞表面PD-1表達(dá)率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05。 結(jié)論CHB患者外周血單個(gè)核細(xì)胞、CD4+T淋巴細(xì)胞上PD-1表達(dá)顯著高于健康人,又明顯低于HBV健康攜帶者。PD-1表達(dá)可能與HBV感染者的免疫狀態(tài)相關(guān)。血清HBeAg可以明顯影響CHB患者外周血T單個(gè)核細(xì)胞表面PD-1的表達(dá),是影響其PD-1表達(dá)的重要因素。 第二部分淋巴細(xì)胞系Molt-4細(xì)胞PD-1啟動(dòng)子區(qū)域甲基化水平和PD-1表達(dá)的關(guān)系的研究 目的以T淋巴細(xì)胞株Mo1t-4細(xì)胞為模型,探討甲基化抑制劑5-雜氮胞苷(5-Zac)對(duì)淋巴細(xì)胞表面程序性死亡受體-1(PD-1)基因啟動(dòng)子的去甲基化作用及其誘導(dǎo)的PD-1基因表達(dá)的改變,并進(jìn)一步研究去甲基化作用與PD-1基因表達(dá)之間關(guān)系。方法以不同濃度的5-Zac(0μmol·L-1、5μmol·L-1、10μmo1·L-1)作用于體外培養(yǎng)的molt-4細(xì)胞72h,流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞表面表達(dá)PD-1的Molt-4細(xì)胞比例和細(xì)胞凋亡率；反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)5-Zac作用后PD-1基因mRNA的轉(zhuǎn)錄水平；亞硫酸氫鈉處理各組Molt-4細(xì)胞DNA, PCR擴(kuò)增PD-1啟動(dòng)子基因片段,轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌,挑克隆測(cè)序,檢測(cè)擴(kuò)增的PD-1啟動(dòng)子片段甲基化狀態(tài)。 結(jié)果0μmol·L-I、5μmol·L-1、10μmol·L-1的5-氮雜胞苷作用于molt-4細(xì)胞72h后,PD-1在細(xì)胞表面的表達(dá)率分別為：1.13±0.01%；18.96±1.87%；63.09±6.25%,并呈現(xiàn)濃度依賴性；PD-1基因mRNA表達(dá)量顯著增加；細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果顯示與未處理組相比,加5μmol·L-1、10μmo1·L-1的5-氮雜胞苷處理72h后molt-4細(xì)胞的凋亡率顯著增加,三組凋亡率分別為：1.9%+0.06%；8.98%+1.36%；24.5%+3.68%,有顯著性差異(P0.01)；三組DNA亞硫酸氫鈉測(cè)序結(jié)果表明,加入甲基化抑制劑5-Zac處理后,PD-1啟動(dòng)子上-601bp和d-553bp CG點(diǎn)去甲基化程度明顯增高。 結(jié)論甲基化抑制劑5-Zac可導(dǎo)致體外培養(yǎng)的T淋巴細(xì)胞系Molt-4細(xì)胞表面程序性死亡受體-1(PD-1)表達(dá)顯著增加,PD-1基因mRNA表達(dá)增加,細(xì)胞凋亡率增高,這種增高可能與PD-1基因啟動(dòng)子區(qū)域出現(xiàn)的低甲基化有關(guān)。 第三部分慢性乙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞PD-1基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化狀態(tài)及影響因素 目的探討慢性乙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞上程序性死亡受體-1表達(dá)和PD-1啟動(dòng)子區(qū)域甲基化水平的關(guān)系,以及HBeAg對(duì)慢性乙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞表面PD-1基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化狀態(tài)的影響 方法篩選健康對(duì)照組10例、慢性乙型肝炎患者HBeAg陽性者10例、慢性乙型肝炎患者HBeAg陰性者10例,實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-time RT-PCR)檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞中PD-1基因的mRNA表達(dá)水平；亞硫酸氫鈉處理PBMCs細(xì)胞DNA, PCR擴(kuò)增PD-1啟動(dòng)子基因片段,轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌,挑克隆測(cè)序,檢測(cè)擴(kuò)增的PD-1啟動(dòng)子片段甲基化狀態(tài)。 結(jié)果與正常對(duì)照組(0.10±0.023)比較,慢性乙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中PD-1mRNA表達(dá)水平明顯升高。在慢性肝炎患者中,外周血單個(gè)核細(xì)胞上PD-1表達(dá)在HBeAg陽性患者(0.44±0.046)中顯著高于HBeAg陰性患者(0.18±0.014)。PD-1啟動(dòng)子上多個(gè)CpG點(diǎn)(-601、-553、-538、-483、-463、-317)甲基化程度與PD-1在單個(gè)核細(xì)胞上的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)；PD-1啟動(dòng)子上-553bp、-538、-483CpG位點(diǎn)甲基化程度與血清中e抗原可能存在相關(guān)性。 結(jié)論P(yáng)D-1基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化水平可能影響慢性乙肝患者外周血單個(gè)核細(xì)胞上PD-1表達(dá)；其基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)可能受到乙肝病毒e抗原影響。
【學(xué)位單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2012
【中圖分類】：R512.62

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10 蘇麗;周曉榮;汪曉鶯;湯偉;;慢性乙型肝炎患者樹突狀細(xì)胞與CD_4~+Th細(xì)胞分化的關(guān)系(英文)[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2009年14期

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本文編號(hào)：2808022