發(fā)布時間：2020-08-23 22:00

【摘要】： 肝纖維化是指肝細(xì)胞發(fā)生壞死及炎癥刺激時,肝臟中膠原蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)增生與降解失去平衡,導(dǎo)致肝臟內(nèi)纖維結(jié)締組織異常沉積的病理過程。近年來隨著肝纖維化發(fā)病機(jī)制研究有了長足進(jìn)展,肝纖維化被認(rèn)為具有可逆轉(zhuǎn)性,因此可對肝纖維化發(fā)生學(xué)的信號傳導(dǎo)通路、細(xì)胞因子基因表達(dá)、HSC激活與凋亡過程等環(huán)節(jié)進(jìn)行抗肝纖維化治療。TGF-β1是一種多功能的肽類生長因子,與調(diào)節(jié)生長、分化、細(xì)胞外基質(zhì)沉積和免疫反應(yīng)有著廣泛的潛在效應(yīng),能改變細(xì)胞外基質(zhì)的分解與合成正常平衡,增加基質(zhì)合成并相應(yīng)的減少總的ECM蛋白水解活性,結(jié)果導(dǎo)致網(wǎng)狀纖維的形成。目前被認(rèn)為是肝纖維化形成的關(guān)鍵因子。肝纖維化的一系列改變涉及到多種信號通路,直接的或者間接的,包括其它血纖維蛋白溶酶原的上調(diào)。而TGF-β1和Smads分子均參與肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展,TGF-β1主要依賴于其下游的受體和一族高度保守的胞內(nèi)信號Smad蛋白家族介導(dǎo)其信號傳遞,發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。 苦參素(oxymatrine,OM),又名氧化苦參堿,是苦參堿經(jīng)氧化合成、純化、提取而得到的有效單體,是苦參堿的N-氧化物,氧化苦參堿因具有特殊的氧結(jié)構(gòu),從而使分子極性大增,較苦參堿具有獨特的作用機(jī)理和療效。 本研究通過觀察其受體TβRI和Smads蛋白在肝纖維化組織中的動態(tài)表達(dá),初步探討苦參素對Smads蛋白及其介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在肝纖維化發(fā)生、發(fā)展過程中的作用。研究內(nèi)容主要包括以下三個部分: 1.苦參素(OM)對四氯化碳誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠的作用 動物實驗結(jié)果顯示,OM對CC14誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化具有良好的保護(hù)作用。模型組ALT、AST、HA、LN、CIV、PCIII等纖維化血清學(xué)標(biāo)志物水平較正常組明顯升高,給予OM治療后可使其顯著降低。肝纖維化的另一個重要指標(biāo)肝組織Hyp含量的檢測結(jié)果顯示,OM可顯著降低模型組的Hyp值。組織病理學(xué)結(jié)果表明OM可明顯的抑制肝纖維化程度,改善肝組織結(jié)構(gòu),減少膠原沉積。 實驗中還觀察了OM對模型大鼠血清中I型膠原和TGF-β1含量的影響。ELISA法檢測結(jié)果顯示OM治療后模型大鼠血清中I型膠原和TGF-β1含量明顯降低。RT-PCR檢測TGF -β1、smad2、Smad3、smad7的mRNA表達(dá)顯示OM可以抑制TGF -β1、smad2、Smad3mRNA的表達(dá),同時升高smad7mRNA的表達(dá)。 2.苦參素在體外實驗中對TGF -β1刺激的HSC-T6增殖的抑制作用 建立體外TGF-β1誘導(dǎo)的HSC-T6模型,OM在0.01,0.1,1,10,10mg·L-1濃度可抑制HSC-T6增殖,抑制率與OM濃度成正比,提示OM有抑制HSC增殖的作用。 3.苦參素對HSC-T6活化過程中TGF-β/smads信號通路的影響 提取轉(zhuǎn)化生長因子-β1刺激的HSC-T6細(xì)胞總蛋白。Western blot檢測TβRI , smad2 , Smad3, Smad7蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果表明,表達(dá)TβRI , smad2 , Smad3蛋白明顯增加,但抑制型Smad蛋白——Smad7則有所降低。與此同時,給予OM治療后TβRI , smad2 , Smad3蛋白水平明顯降低,同時也增加了水平Smad7的蛋白質(zhì)的表達(dá)。提示OM可能通過抑制TGF β/smads通路發(fā)揮其對HSC-T6的作用。 以上結(jié)果均表明,OM可以有效改善肝功能,減少纖維化大鼠的膠原沉積,緩解纖維化進(jìn)程,對TGF β/smads信號通路的抑制是其可能的作用機(jī)制之一。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R575.2
【圖文】：

Figure 1 Effects of OM on Pathological changes in rats’ liver by H&E staining(H&E ×100).A：Control group B：Model group C：OM（30mg·kg-1）D：OM（60 mg·kg-1） E：OM（120 mg·kg-1） F：Colchicine treated group(0.2 mg·kg-1)圖 1 HE 染色觀察 OM 對大鼠肝組織病理的影響（HE×100）A：正常組 B：CCl4 誘導(dǎo)模型組 C：OM（30 mg·kg-1）D：OM（60 mg·kg-1） E：OM（120 mg·kg-1） F：秋水仙堿陽性對照組(0.2 mg·kg-1)27

Figure 2 Effects of OM on Pathological changes in rats liver by Masson staining (Masson×100).A：Control group B：Model group C：OM（30 mg·kg-1）D：OM（60 mg·kg-1） E：OM（120 mg·kg-1） F：Colchicine treated group(0.2 mg·kg-1)圖 2 Masson 染色觀察 OM 對大鼠肝組織病理的影響（Masson×100）A：正常組 B：CCl4 誘導(dǎo)模型組 C：OM（30 mg·kg-1）D：OM（60 mg·kg-1） E：OM（120 mg·kg-1） F：秋水仙堿陽性對照組(0.2 mg·kg-1)28

3.6 OM 對纖維化大鼠肝組織中 TGF-β1，smad2，smad3，smad7 mRNA 表達(dá)的影響3.6.1 OM 對纖維化大鼠肝組織中 TGF-β1 mRNA 表達(dá)的影響RT-PCR 結(jié)果顯示，CCl4誘導(dǎo)的模型大鼠肝組織 TGF-β1mRNA 表達(dá)顯著高于正常組，OM 給藥后能顯著下調(diào) TGF-β1mRNA，見圖 3。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前9條

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本文編號：2802076