【摘要】：目的： 膽管結(jié)扎致膽道完全梗阻,梗阻性黃疸(obstructive jaundice, OJ)形成,由于膽固醇排泄完全堵塞,高脂血癥形成。貝特類藥物通常用于血脂障礙的治療,可顯著調(diào)節(jié)高甘油三酯、膽固醇水平。因此推測(cè)非諾貝特有可能對(duì)梗阻性黃疸肝損傷起保護(hù)作用。為了進(jìn)一步觀察非諾貝特是否對(duì)梗阻性黃疸肝損傷起保護(hù)作用,以便用于臨床,本研究探討了膽管結(jié)扎后大鼠用不同劑量非諾貝特治療后,梗阻性黃疸大鼠血清肝功、細(xì)胞因子、肝細(xì)胞凋亡、肝糖原及其肝組織膠原纖維含量的變化情況。 研究方法： 1.大鼠OJ模型的建立與分組 用膽總管結(jié)扎法建立大鼠0J模型。雄性Wistar大鼠,隨機(jī)分為4組(每組12只)：空白對(duì)照組(A)、OJ模型組(B)、低劑量非諾貝特處理組(C)、高劑量非諾貝特處理組(D)。除A組外,其余各組均行膽總管結(jié)扎術(shù)。手術(shù)過程：剖腹術(shù)后游離總膽管,用5/0線結(jié)扎,最后關(guān)腹。C組每天經(jīng)口灌胃非諾貝特30mg/kg,D組每天經(jīng)口灌胃非諾貝特60mg/kg。 2.各種生化指標(biāo)的檢測(cè) 各組大鼠乙醚吸入麻醉后剖腹取腹主動(dòng)脈血。全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清ALT、AST、ALP, GGT、TBA。放射免疫分析試劑盒檢測(cè)血清IL-1β和TNF-α。 3.肝組織細(xì)胞凋亡、膠原纖維、糖原檢測(cè) 各組大鼠放血處死后取肝組織,制作石蠟切片。TUNEL法檢測(cè)肝細(xì)胞凋亡,PAS染色檢測(cè)肝糖原含量,Masson染色檢測(cè)膠原纖維含量。 結(jié)果： 1.大鼠一般情況觀察 大鼠膽管結(jié)扎24h內(nèi),即可出現(xiàn)大便陶白色,小便黃染,精神萎靡,活動(dòng)遲鈍,飲食減少等癥狀。C組、D組膽管結(jié)扎后通過給予不同劑量的非諾貝特藥物,其病情進(jìn)展延緩。各組大鼠體重變化如下：A組大鼠實(shí)驗(yàn)后體重較實(shí)驗(yàn)前顯著升高(P0.01),B組大鼠實(shí)驗(yàn)后體重較實(shí)驗(yàn)前顯著降低(P0.01),C、D組大鼠實(shí)驗(yàn)后體重較實(shí)驗(yàn)前無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。 2.大鼠血清生化指標(biāo)分析 2.1 OJ大鼠與正常大鼠血清生化指標(biāo)的比較 膽管結(jié)扎7d后,B、C、D組大鼠各血清指標(biāo)與A組相比：ALT、AST、ALP、GGT的活性均顯著高于A組(P0.01)；TBA、TNF-α的含量明顯高于A組(P0.01)；B、C組IL-1β顯著高于A組(P0.01),D組較A組無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。 2.2藥物處理后各組大鼠血清生化指標(biāo)的比較 藥物處理后,D組ALT、AST、ALP、GGT、TBA、IL-1β、TNF-α顯著低于B組(P0.01),D組AST、ALP、GGT、TBA、IL-1β顯著低于C組(P0.01),D組ALT、TNF-α較C組無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。C組IL-1β顯著低于B組(P0.01),而ALT、AST、ALP、GGT、TBA、TNF-α較B組無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。 3.肝組織細(xì)胞凋亡、糖原檢測(cè)、膠原纖維 3.1各組大鼠肝組織細(xì)胞凋亡數(shù)目比較 TUNEL染色顯示紫藍(lán)色顆粒為凋亡陽(yáng)性細(xì)胞。鏡下可見B組肝細(xì)胞凋亡多于A、C、D組,肝細(xì)胞分布欠佳,大小較一致；C組肝細(xì)胞凋亡少于B組,肝細(xì)胞分布欠佳,大小較一致；D組肝細(xì)胞凋亡少于B、C組,肝細(xì)胞分布較均勻,大小較一致,偶見肝細(xì)胞增大；A組無或偶見肝細(xì)胞凋亡,其數(shù)目明顯低于B、C、D組,肝細(xì)胞分布較均勻,大小較一致,可見數(shù)個(gè)肝細(xì)胞增大。 定量分析顯示：膽總管結(jié)扎后,B組、C組、D組肝細(xì)胞凋亡數(shù)目顯著高于A組(P0.01)。給予不同劑量非諾貝特藥物處理后,C組、D組肝細(xì)胞凋亡數(shù)目顯著低于B組(P0.01),D組肝細(xì)胞凋亡顯著低于C組(P0.01) 3.2各組大鼠肝組織糖原顆粒數(shù)目檢測(cè) PAS染色顯示肝糖原顆粒呈亮紅色。鏡下可見A組細(xì)胞結(jié)構(gòu)致密完整,排列較整齊,無裂隙,細(xì)胞間、細(xì)胞內(nèi)PAS染色為彌漫強(qiáng)著色；B組細(xì)胞形態(tài)尚完整,間質(zhì)細(xì)胞顯著增生,裂隙大,排列欠規(guī)則,以匯管區(qū)為著,細(xì)胞間、細(xì)胞內(nèi)PAS染色少且相對(duì)均勻性差；C組細(xì)胞形態(tài)排列尚好,間質(zhì)顯著增生,裂隙小,以匯管區(qū)為著,細(xì)胞間、細(xì)胞內(nèi)PAS染色相對(duì)單薄,呈不均勻樣,但好于B組；D組細(xì)胞形態(tài)致密較完整,間質(zhì)增生明顯減少,裂隙較小,排列較規(guī)則,以匯管區(qū)為著,細(xì)胞間、細(xì)胞內(nèi)PAS染色較多且相對(duì)均勻性好。 定量分析顯示：膽總管結(jié)扎后,B組、C組、D組大鼠肝組織陽(yáng)性顆粒數(shù)目顯著低于A組(P0.01)。給予不同劑量非諾貝特藥物處理后,C組、D組大鼠肝組織陽(yáng)性顆粒數(shù)目顯著高于B組(P0.01),D組大鼠肝組織陽(yáng)性顆粒數(shù)目顯著高于C組(P0.01) 3.3各組大鼠肝組織膠原纖維面積比較 Masson染色顯示膠原纖維呈藍(lán)色。鏡下可見A組僅在中央靜脈以及小膽管周圍出現(xiàn)少量的膠原纖維,其分布均勻,排列整齊；B組膠原纖維顯著增多,大量分布于增生小膽管周圍,排列紊亂；C組膠原纖維較B組明顯減少,圍繞在增生小膽管周圍,分布較均勻；D組膠原纖維較B、C組均明顯減少,主要分布于增生小膽管周圍,相鄰小膽管間膠原纖維排列整齊。 定量分析顯示：膽總管結(jié)扎后,B組、C組、D組膠原纖維面積顯著高于A組(P0.01)。給予不同劑量非諾貝特藥物處理后,C組、D組肝細(xì)胞凋亡數(shù)目顯著低于B組(P0.01),D組大鼠肝組織膠原纖維面積顯著低于C組(P0.01)。 結(jié)論： 本次實(shí)驗(yàn)通過OJ動(dòng)物模型建立,從生化和組織學(xué)角度初步探討了非諾貝特在OJ肝損害發(fā)病中的作用,提示短期應(yīng)用非諾貝特可明顯減輕膽道梗阻肝損害,且具有一定的劑量依賴性,其機(jī)制可能與其抑制炎癥反應(yīng)、抑制細(xì)胞凋亡、抗肝組織纖維化等有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R575
【圖文】：

結(jié)果見表2、圖l和圖2。各組大鼠血清中ALT、AST、ALP、GGT、TBA含量的結(jié)果比較(x土s)mParisonofresultsofALT，AST，ALP，GGTandTBAinserumofrats(龍比)ALT(U/L).0士153AST(U/L)125.9士27.9ALP(U/L)115.6士23.8GGT(U/L)4.6士1.9TBA(pmol/ml)1.8士0.72.7士18.3’)371.8士39.9”588.7士53.9’)71.8士18.5”52.6士14.9士11.7”2)士15.6”藝，:‘，353.1士15.0”2)562.7士28.1”“，65.1士14.6”2，54.8士10.6298.5士20.3”2)‘，)448.7士37.4‘’2，:‘，51.0士7.6’)2):，，34.0士7.9”“，成U勺‘.86100200.3440.000401.4360.00071.6350.00072.6680.000:P<0.01，vsA組;2):P(0.01，vSB組;3):P<0.01，vsC組

D組之間大鼠血清中ALT含量的差異無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(尸>0.01);B組、C組之間大鼠血清中ALT、AST、ALP、GGT、TBA含量的差異無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(尸)0.01)。結(jié)果見表2、圖l和圖2。表2各組大鼠血清中ALT、AST、ALP、GGT、TBA含量的結(jié)果比較(x土s) TabZComParisonofresultsofALT，AST，ALP， GGTandTBAinserumofrats(龍比)ALT(U/L)A組(n=12)B組(n=12)C組(n=12)D鄉(xiāng)尺(n=12)尸值尸值57.0士 153AST(U/L)125.9士27.9ALP(U/L) 115.6士23.8GGT(U/L) 4.6士 1.9TBA(pmol/ml) 1.8士0.7132.7士18.3’)371.8士39.9”588.7士53.9’) 71.8士18.5”52.6士14.9’)士 11.7”2)士 15.6”藝，:‘，353.1士15.0”2)562.7士28.1”“，65.1士14.6”2，54.8士10.6’)2)298.5士20.3”2)‘

組大鼠血清中TNF一a含量顯著高于B組(尸<0.01)，D組大鼠血清中TNF一a含量顯著低于B組(尸<0.01)，B組、C組之間和C組、D組之間大鼠血清中TNF一a含量的差異無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(尸>0.01)，見表3、圖3和圖4。表3各組大鼠血清IL一lp、TNF一Q含量的比較(x士s) Tab3ComParisonofresultsofIL一lp，TNF一 ainserumofrats(義土，)IL一lp(Pg/ml)TNF一a(ng/ml)A組 5.10士 1.021.78士0.62(n=12)B組18.86士6.32，，3.33士0.84，)(n=12)C組 9.32士3.28，，，，，2.92士0.91‘，月，(n=12)D組 5.97士 1.60‘，，2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2801655