發(fā)布時間：2020-08-22 13:39

【摘要】： 免疫相關(guān)的肝損傷參與多種肝病發(fā)生。刀豆蛋白A(concanavalin A, ConA)所致小鼠肝炎(CIH)是研究免疫性肝損傷發(fā)生機制及藥物篩選的經(jīng)典模型之一。 脂氧素(lipoxin, LX)是花生四烯酸代謝經(jīng)脂加氧酶途徑生成的代謝產(chǎn)物,具有抗炎、促炎癥消退等功效。近年發(fā)現(xiàn),LX也具有免疫調(diào)節(jié)功能。BML-111是人工合成的脂氧素受體激動劑,其保留了LXA4功能所必需的重要基團。體內(nèi)外實驗證實,BML-111具有多種生物學(xué)效應(yīng),但尚未見將其應(yīng)用于治療免疫性肝損傷的報道。 本課題研究目標為：建立ConA誘導(dǎo)的小鼠肝損傷模型,觀察BML-111對肝損傷的保護作用,并探討該效應(yīng)的機制。 (一)實驗分組 *PBS對照組：尾靜脈注射PBS(同ConA注射量)。 *ConA對照組：PBS稀釋ConA貯液至合適的工作濃度,尾靜脈注射,動物半致死劑量為25μg／g體重,其他為15μg／g體重。 *BML-111對照組：PBS稀釋BML-111貯液至合適工作濃度,按1μg／g進行腹腔注射。 *BML-111治療組：BML-111(1μg/g)腹腔注射；約半小時后尾靜脈注射ConA(劑量同ConA組)。 (二)BML-111對ConA所致小鼠肝損傷的影響 1.血清轉(zhuǎn)氨酶(ALT)檢測：與PBS對照組相比,BML-111組ALT水平無差異,而ConA組ALT水平明顯升高；與ConA組相比,BML-111治療組ALT水平顯著降低。 2.組織學(xué)檢測 (1)HE染色結(jié)果：PBS組和BML-111組肝組織結(jié)構(gòu)完整；ConA組肝組織大片壞死和大面積肝細胞變性,紅細胞和炎性細胞浸潤；BML-111治療組可見點狀壞死區(qū),以肝細胞變性為主,可見紅細胞和炎性細胞浸潤。 (2)TUNEL檢測結(jié)果：PBS組和BML-111組未見凋亡病灶；ConA組可見大片細胞凋亡區(qū)；BML-111治療組可見點狀分布的凋亡細胞。 (三)BML-111對小鼠存活時間的影響給予半致死劑量ConA,與ConA組相比,BML-111治療組可顯著提高小鼠存活率。 結(jié)論：上述研究結(jié)果顯示,BML-111自身對肝臟沒有毒性；BML-111對ConA所致小鼠肝損傷具有保護效應(yīng)。 (一)實驗分組 *PBS對照組：尾靜脈注射PBS(同ConA注射量)。 *ConA對照組：PBS稀釋ConA貯液至合適工作濃度,按15μg/g／g體重進行尾靜脈注射。 *BML-111對照組：PBS稀釋BML-111貯液至合適工作濃度,按1μg/g劑量進行腹腔注射。 *BML-111治療組：BML-111(1μg/g)腹腔注射：約半小時后尾靜脈注射ConA(同ConA注射量)。 (二)BML-111保護ConA所致小鼠肝損傷的效應(yīng)機制 1.肝組織勻漿總SOD、MDA檢測：與ConA組相比,BML-111治療組能顯著提高肝組織總SOD、降低MDA水平。 2.肝組織勻漿MPO檢測：與ConA組相比,BML-111治療組能顯著降低MPO水平。 3.血清細胞因子檢測：與PBS對照組相比,BML-111對照組血清TNF-a、IFN-γ水平無差異；BML-111與ConA組相比,BML-111治療組能顯著降低血清TNF-a水平,但對IFN-γ水平無影響。 4.肝組織EMSA檢測NF-κB:與PBS組相比,ConA組NF-κB活性升高；與ConA組相比,BML-111治療組NF-κB活性明顯降低。 5.肝組織淋巴細胞亞群檢測：PBS組、BML-111組、ConA組和BML-111治療組NK細胞、NKT細胞及T細胞所占總細胞比例無明顯差異。 6.肝組織活化T細胞比例：PBS組、BML-111組、ConA組和BML-111治療組活化T細胞(CD3+CD69+)比例無差異。 結(jié)論：BML-111保護ConA所致肝組織的機制可能為：抗氧化損傷；減少中性粒細胞浸潤；抑制NF-κB活化及血清TNF-α水平；對血清IFN-γ水平及淋巴細胞亞群比例及T細胞活化無影響。 (一)實驗分組 分為空白組、BML-111組(1μg／ml)、ConA組(巨噬細胞：10μg／ml；T細胞：5μg／ml)、BML-111+ConA組。 (二)BML-111對ConA所致巨噬細胞活化的影響 BML-111能明顯降低ConA誘導(dǎo)巨噬細胞所分泌TNF-α、Rantes水平。 (三)BML-111對ConA所致T細胞活化的影響 通過檢測細胞培養(yǎng)上清IFN-γ水平和T細胞表面CD69、CD25表達,發(fā)現(xiàn)BML-111對ConA所致T細胞活化無影響。 結(jié)論：BML-111能顯著降低ConA所致巨噬細胞活化,而對ConA所致的T細胞活化無影響。 1.BML-111能顯著抑制ConA所致小鼠肝損傷。 2.BML-111的保護效應(yīng)與其抗氧化、抑制中性粒細胞浸潤、抑制NF-KB活化和降低血清TNF-a水平相關(guān),但不影響血清IFN-γ水平、淋巴細胞亞群比例及T細胞活化。 3.BML-111能顯著影響ConA所致巨噬細胞活化,而對ConA所致T細胞活化無影響。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R575
【圖文】：

實驗結(jié)果ML一111能抑制conA誘導(dǎo)的小鼠肝損傷.血清轉(zhuǎn)氨酶ALT活性細胞內(nèi)含豐富的轉(zhuǎn)氨酶(如ALT)，肝細胞破壞后被釋放入血，檢測映肝細胞損傷程度。小鼠經(jīng)不同處理12小時后，檢測血清轉(zhuǎn)氨酶A圖所示:與PBs組相比，BML一nl單獨作用組對血清轉(zhuǎn)氨酶ALT無n=6一8);與CO叭組相比，BML一111治療組血清轉(zhuǎn)氨酶ALT下降性(*P<0.05，n=6一8)。

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【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前8條

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本文編號：2800748