【摘要】：炎癥性腸病(Inflammatory Bowel Disease,IBD)是一種自身免疫性疾病,以腸道慢性非特異性炎癥為表現(xiàn),主要包括克羅恩病(Crohn's Disease,CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis,UC),近年來在我國的發(fā)病率越來越高。炎癥性腸病的發(fā)病與遺傳因素、生活習(xí)慣和環(huán)境因素相關(guān),但其具體的發(fā)病機制還不清楚。Shp2是一種在體內(nèi)呈廣泛性表達的非受體型酪氨酸磷酸酶,由PTPN11基因編碼,在多數(shù)類型的免疫細胞中高表達,并且其在免疫系統(tǒng)的重要作用近年來越來越受到關(guān)注。有研究表明PTPN11基因的SNP多態(tài)性與UC的發(fā)病相關(guān),提示Shp2可能參與了 IBD的調(diào)控過程。然而Shp2在腸道微環(huán)境中對巨噬細胞功能調(diào)控的方式,及其在IBD發(fā)病過程中對腸道免疫穩(wěn)態(tài)產(chǎn)生的影響,至今尚無研究。為了探究這一問題,我們收集了 UC和CD患者的外周血單核細胞進行Shp2表達量的檢測,發(fā)現(xiàn)相比于非IBD對照人群,UC和CD患者單核細胞中Shp2的表達呈顯著上調(diào)。為了進一步研究Shp2是否能夠通過調(diào)控巨噬細胞功能參與IBD的病理過程,我們構(gòu)建了巨噬細胞條件性Shp2敲除小鼠(Shp2MKO)。通過建立葡聚糖硫酸鈉(Dextran sulfate sodium salt,DSS)誘導(dǎo)的急性腸炎模型,結(jié)果發(fā)現(xiàn),與Shp2MWT小鼠相比,Shp2MKO小鼠的腸道炎癥較輕微,腸道屏障相對較完整,小鼠血清和腸道中TNF-α,IL-6和IL-1β等炎癥因子的水平較Shp2MWT降低,而對T細胞來源的IFN-γ,IL-17等炎癥因子的分泌沒有影響。此外,Shp2MKO小鼠中由慢性腸炎誘導(dǎo)的腸道腫瘤生成明顯較Shp2MWT小鼠少,腸道炎癥因子水平降低。但在體外的PAMPs刺激中,Shp2的缺失并不影響巨噬細胞分泌炎癥因子的水平。進一步研究發(fā)現(xiàn),IL-10能夠明顯抑制LPS等PAMPs刺激后TNF-α和IL-6的產(chǎn)生,這種抑制效應(yīng)在Shp2缺失后得到了顯著的增強。并且在進一步的機制探索中我們發(fā)現(xiàn),Shp2的敲除顯著增強了巨噬細胞中IL-10誘導(dǎo)的STAT3磷酸化,并且促進了 IL-10/STAT3信號下游靶基因SOCS3的表達。為了在體內(nèi)水平驗證Shp2參與調(diào)控IL-10對腸炎的抑制,給予腹腔注射anti-IL-10以中和IL-10的作用,結(jié)果顯示,注射anti-IL-10中和抗體的Shp2MWT和Shp2MKO小鼠腸炎引起的體重下降、結(jié)腸縮短、腸組織結(jié)構(gòu)破壞和腸道炎癥因子水平不再具有顯著性差異。本研究揭示了酪氨酸磷酸酶Shp2能夠通過抑制IL-10介導(dǎo)的巨噬細胞抗炎功能,促進炎癥性腸病的發(fā)展。我們的研究為了解炎癥性腸病的發(fā)生發(fā)展的機制提供了新的視角,并可能為炎癥性腸病的治療提供新的思路和理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R574
【圖文】：

從免疫學(xué)角度，腸道可以看作是全身最大的外周免疫器官，包含多種高度特逡逑化的免疫學(xué)結(jié)構(gòu)，比如腸系膜淋巴結(jié)、派氏集合淋巴結(jié)、上皮間淋巴細胞、腸道逡逑固有層等［３］；以及數(shù)量龐大的各類免疫細胞（圖１），如巨噬細胞、樹突狀細胞、逡逑中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、Ｔ淋巴細胞、Ｂ淋巴細胞、固有淋巴細胞等［４，５］。腸逡逑道之所以擁有如此復(fù)雜且精密的免疫系統(tǒng)，是由于腸道每天有大量的機會接觸到逡逑環(huán)境中各類抗原成分，包括食物來源的抗原以及腸道共生菌來源的抗原等。腸道逡逑免疫細胞的功能必須受到嚴格而正確的調(diào)節(jié)，才能確保各類抗原能夠被正確處理，逡逑致病因素被及時清除，同時又不引起過度的炎癥反應(yīng)。因此，闡明腸道免疫細胞逡逑功能調(diào)節(jié)的機制，有助于深入了解ＩＢＤ的發(fā)病機理，并可能為ＩＢＤ的診斷及治療逡逑１逡逑

我們利用密度梯度離心法分離了邋ＵＣ，邋ＣＤ患者以及非ＩＢＤ人群的外周血單核細胞，逡逑并進行了邋ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ邋ＰＣＲ檢測。結(jié)果表明：Ｓｈｐ２在ＵＣ患者（ｎ＝２４）及ＣＤ患者（ｎ＝１８）逡逑外周血單核細胞中的表達顯著高于對照人群（ｎ＝３５）（圖３）。逡逑４邐＊＊＊逡逑Ｘ—Ｖ邐１邐？逡逑（Ｎ逡逑Ｔ￣逡逑ｘ邋＊逡逑：３－邐１邐１逡逑0逡逑（Ｕ邐２＇邐？逡逑－邋■一逡逑＾邐？？？邐■逡逑0Ｊ邐，邐，邐１邐逡逑ｎｏｎ－ＩＢＤ邋ＣＤ邐ＵＣ逡逑圖３邋ｒｏＤ患者單核細胞中Ｓｈｐ２的表達上調(diào)逡逑密度梯度離心法分離外周血單核細胞，ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ邋ＰＣＲ檢測ＩＢＤ患者及對照人群單逡逑核細胞中Ｓｈｐ２的表達水平。＊，戶＜０．０５；邋＊＊＊，戶＜０．００１。逡逑３０逡逑

量腸道細菌進入腸道固有層，引發(fā)急性的腸道炎癥反應(yīng)。我們發(fā)現(xiàn)相比于Ｓｈｐ２‘ｗ逡逑ＷＴ小鼠，Ｓｈｐ２ＭＫＯ小鼠的腸道炎癥引起的體重下降較少，腹瀉以及直腸出血都逡逑較輕微Ｃ圖４Ａ）。并且在高劑量ＤＳＳ邋（４％）造模的情況下，Ｓｈｐ２ＭＫＯ小鼠的致逡逑死率較Ｓｈｐ２ＭＷＴ有明顯緩解（圖４Ｂ）。另外，造模后Ｓｈｐ２ｗＫＯ小鼠結(jié)直腸的逡逑長度顯著大于Ｓｈｐ２ｗＷＴ小鼠（圖４Ｃ），脾臟重量顯著輕于Ｓｈｐ２ＭＷＴ小鼠（圖逡逑４Ｄ）。在組織損傷方面，我們通過Ｈ＆Ｅ染色發(fā)現(xiàn)，造模引起的腸道結(jié)構(gòu)破壞在逡逑Ｓｈｐ２ｗＫＯ小鼠中較輕微，腸道結(jié)構(gòu)保留相對完好（圖４Ｅ）。以上實驗結(jié)果表明，逡逑Ｓｈｐ２在巨噬細胞中的缺失減輕了小鼠腸道炎癥。逡逑Ａ邐Ｂ逡逑７邋１０５１邐．邋？邐？邐４邐４，邐．逡逑￡？邐Ｊ邋ｉ邋ｓ邐．邐0邋Ｓ？＾ｗＷＴ邐ｔ逡逑ｆ９５邋Ｕ邋Ｉ邐Ｉ邋１Ｍ邋＼Ｋ邋ｎ逡逑｜邐，邋Ｖ邋？邋［邋Ｍ邋ｌ１邋丨邋ｉ邋�。贺姡卞澹掊义希桑梗斑姡掊澹桑н姡�？邋Ｍ邋｜？；邐＇逡逑ｉ邐——＿＿邐ｃｉ，邋１１邋ｒ邋、ｊ．邋，，邋ｔ邋＾邐１０ｉ邐逡逑０１２３４５６

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