發(fā)布時(shí)間：2020-08-08 04:17

【摘要】： 目的:肝纖維化是多種慢性肝損傷的共同后果,進(jìn)一步則發(fā)展為肝硬化甚至肝癌,是一類(lèi)世界性的嚴(yán)重危害人們健康的主要疾病�，F(xiàn)已知肝纖維化是一個(gè)可逆性病變,而肝硬化是不可逆的�；罨母涡菭罴�(xì)胞(hepatic stellate cell ,HSC)是肝纖維化發(fā)生的核心環(huán)節(jié)�；罨腍SC通過(guò)旁分泌與自分泌作用合成分泌多種細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrixes, ECM),同時(shí)合成、釋放大量基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制物(tissue inhibitors of metalloproteinases ,TIMPs),抑制膠原酶、明膠酶等基質(zhì)金屬蛋白酶( matrix metalloproteinases ,MMPs)活性,減少ECM降解,導(dǎo)致ECM合成大于降解,最終過(guò)量積聚在肝內(nèi)形成肝纖維化。過(guò)氧化物酶體增殖物活化受體γ(peroxisome proliferators-activated receptor gamma,PPARγ)是一種配體激活的核受體轉(zhuǎn)錄因子,與肝纖維化之間關(guān)系的研究主要集中于PPARγ與HSC激活之間的關(guān)系上。研究證實(shí),靜止?fàn)顟B(tài)HSC表達(dá)PPARγ,而活動(dòng)狀態(tài)的HSC表達(dá)PPARγ明顯減少,PPARγ在維持HSC作為靜止?fàn)顟B(tài)的表型上具有重要作用,PPARγ表達(dá)減少與HSC激活密切相關(guān)。PPARγ及其配體在肝纖維化形成中的作用已成為肝纖維化研究領(lǐng)域里的一個(gè)新熱點(diǎn),但其具體機(jī)制尚不完全清楚。目前認(rèn)為PPARγ配體作為PPARγ的激動(dòng)劑,可抑制HSC的增殖,減少肝內(nèi)膠原積聚和增加肝內(nèi)膠原酶活性。本研究旨在探討不同濃度的PPARγ特異配體羅格列酮對(duì)HSC合成基質(zhì)金屬蛋白酶、金屬蛋白酶組織抑制物及膠原的影響,以期進(jìn)一步證實(shí)PPARγ對(duì)HSC生物學(xué)特性的影響,對(duì)研究肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制及臨床治療具有重要的意義。 方法:①細(xì)胞培養(yǎng):用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)HSC-T6,傳4-5代后接種于塑料細(xì)胞培養(yǎng)瓶,換用無(wú)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞貼壁后分組。分為A組:空白對(duì)照組;B組:5umol/L羅格列酮組;C組:10umol/L羅格列酮組;D組:15umol/L羅格列酮組;E組:20umol/L羅格列酮組。分別于培養(yǎng)24h后收取細(xì)胞。每組均培養(yǎng)6瓶。 ②檢測(cè)不同濃度組MMPs、TIMPs及膠原的改變。用TR-izol試劑盒,參照說(shuō)明抽提細(xì)胞的總RNA。利用半定量RT-PCR測(cè)定MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2、COLⅠ、COLⅢmRNA水平的表達(dá)。瓊脂糖凝膠電泳后使用Quantity One圖像分析系統(tǒng)分析。 ③數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析:檢測(cè)值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行方差分析,P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果:實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:TIMP-1的含量ABCDE; TIMP-2:ABCDE;COLⅠ:ABCDE;COLⅢ:ABCDE;MMP-2:ABCDE;MMP-9:ABCDE。PPARγ特異配體羅格列酮可以增強(qiáng)HSC對(duì)MMP-2、MMP-9的表達(dá),抑制HSC表達(dá)TIMP-1、TIMP-2、COLⅠ、COLⅢ(P0.01),并在一定范圍內(nèi),呈劑量依賴(lài)性(P0.01)。 結(jié)論:羅格列酮通過(guò)上調(diào)PPARγ可以抑制HSC的增殖與活化,下調(diào)TIMPs的表達(dá),增強(qiáng)MMPs的活性,從而增加ECM的降解,促進(jìn)HSC凋亡,逆轉(zhuǎn)肝纖維化。因此,PPARγ對(duì)HSC活化的分子調(diào)節(jié)在肝纖維化發(fā)生中起著重要作用,隨著對(duì)PPARγ在肝纖維化中調(diào)節(jié)作用的深入研究,將為肝纖維化的治療提供新的治療策略。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類(lèi)號(hào)】：R575.2

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本文編號(hào)：2785037