【摘要】：目前我國(guó)乙肝患者人數(shù)眾多,由乙肝病毒所致的慢性肝病及終末期肝病嚴(yán)重危害人們健康。而有效的抗病毒治療則可以顯著減少肝硬化、肝癌的發(fā)生。乙型肝炎的抗病毒治療已成為國(guó)內(nèi)、外專(zhuān)家的研究熱點(diǎn)。目前乙型肝炎抗病毒藥物主要以核苷類(lèi)似物和干擾素為主。干擾素具有廣譜抗病毒,免疫調(diào)節(jié)等作用。體外研究發(fā)現(xiàn),干擾素與細(xì)胞表面干擾素受體結(jié)合,激活經(jīng)典的JAK-STAT途徑,并激活多種信號(hào)分子,從而誘導(dǎo)多種抗病毒蛋白而發(fā)揮抗病毒作用,其中以2,5寡腺苷酸合成酶(2’,5’-OAS),抗粘蛋白(Mx)等最為重要。Mx蛋白是干擾素誘導(dǎo)產(chǎn)生的分布于細(xì)胞質(zhì)中的蛋白質(zhì),具有廣譜的抗病毒活性,對(duì)正黏病毒、副黏病毒、布尼亞病毒、棒狀病毒、小RNA病毒及乙肝病毒均有敏感的抗病毒作用。而2’,5’-OAS可以啟動(dòng)核酸水解酶,通過(guò)選擇性地降解病毒mRNA發(fā)揮抑制病毒的作用。關(guān)于干擾素在慢性乙型肝炎患者體內(nèi)發(fā)揮抗病毒及免疫調(diào)節(jié)作用的分子機(jī)制目前尚不十分清楚,且在臨床治療過(guò)程中存在干擾素抵抗或治療無(wú)效的情況。為了深入研究干擾素信號(hào)通路和抗病毒效應(yīng)分子,本文分別采用細(xì)胞模型和難治性慢性乙型肝炎患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞,檢測(cè)干擾素刺激后不同時(shí)間點(diǎn)干擾素信號(hào)分子和抗病毒蛋白表達(dá)情況,以進(jìn)一步明確干擾素抗病毒作用機(jī)制。 我們選取HBV復(fù)制的肝癌細(xì)胞系HepG 2.2.15作為細(xì)胞模型,同時(shí)采用無(wú)病毒復(fù)制的肝癌細(xì)胞系HepG2細(xì)胞作為對(duì)照,用Real Time-PCR檢測(cè)干擾素刺激后不同時(shí)間點(diǎn)(基線(xiàn)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí))這兩種細(xì)胞干擾素抗病毒蛋白表達(dá)情況。臨床研究患者的入組標(biāo)準(zhǔn)為已使用恩替卡韋治療9-36個(gè)月,HBV DNA陰性但未發(fā)生HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換。按照隨機(jī)分組的原則將患者分到A組和B組。A組使用長(zhǎng)效干擾素PEG-IFNα-2a規(guī)范治療一年,B組繼續(xù)使用恩替卡韋治療一年。兩組分別選取20名患者進(jìn)行干擾素信號(hào)途徑研究。我們?cè)诨�(xiàn)、4周、12周、24周采集外周血并提取PBMC。將PBMC分別提取蛋白和RNA,使用Real Time-PCR方法和Western-Blot方法研究相關(guān)信號(hào)分子和抗病毒蛋白的表達(dá)。 在細(xì)胞模型中,無(wú)HBV復(fù)制的肝癌細(xì)胞系HepG2和有HBV復(fù)制的肝癌細(xì)胞系HepG2.2.15細(xì)胞在干擾素刺激后6小時(shí)、12小時(shí)和24小時(shí)的Mx和2,5-OAS表達(dá)量與基線(xiàn)相比均有明顯升高,峰值均在6小時(shí)。兩種細(xì)胞相比較,HepG2細(xì)胞較HepG2.2.15細(xì)胞其抗病毒蛋白的增高幅度更為顯著。在慢性乙肝患者中,A組在采用干擾素治療后PBMC中相關(guān)信號(hào)分子和Mx,2’,5’-OAS的mRNA和蛋白水平均有增高。而使用核苷類(lèi)似物治療的B組患者的PBMC中干擾素信號(hào)分子STAT1和STAT2及其抗病毒蛋白Mx和2’,5’-OAS表達(dá)沒(méi)有明顯變化。 本研究說(shuō)明在干擾素刺激后,HepG2和HepG2.2.15細(xì)胞干擾素介導(dǎo)的抗病毒蛋白的表達(dá)明顯激活,但程度有一定差異,提示病毒復(fù)制是影響干擾素誘導(dǎo)有效抗病毒蛋白產(chǎn)生的因素。在NA治療取得了病毒學(xué)完全應(yīng)答,血清學(xué)應(yīng)答不佳的慢性乙肝患者,聯(lián)合/序貫干擾素治療可以激活I(lǐng)FN信號(hào)通路并促進(jìn)抗病毒蛋白Mx和2’,5’-OAS的表達(dá)而發(fā)揮重要的抗病毒作用,其深入的機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。本研究結(jié)果為此類(lèi)難治性慢性乙肝患者的治療策略的制訂提供了新的理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類(lèi)號(hào)】：R512.62
【圖文】：

ealtimePCR方法檢測(cè)HepG2和HepG2.2.15細(xì)胞中Mx的表達(dá)*表示P<0.05，**表示P<0.01ealtimePCR方法檢測(cè)HepG2和HepG2.2.15細(xì)胞中2’,5’-OAS的表達(dá)*表示P<0.05，**表示P<0.01

realtimePCR方法檢測(cè)HepG2和HepG2.2.15細(xì)胞中2’,5’-OAS的表達(dá)注：*表示P<0.05，**表示P<0.01

realtime PCR方法檢測(cè)臨床研究A組和B組患者PBMC中STAT1的表達(dá)* 表示P<0.05realtime PCR方法檢測(cè)臨床A組和B組研究患者PBMC中STAT2的表達(dá)

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2781630