發(fā)布時間：2020-08-05 13:44

【摘要】：目前我國乙肝患者人數(shù)眾多,由乙肝病毒所致的慢性肝病及終末期肝病嚴(yán)重危害人們健康。而有效的抗病毒治療則可以顯著減少肝硬化、肝癌的發(fā)生。乙型肝炎的抗病毒治療已成為國內(nèi)、外專家的研究熱點。目前乙型肝炎抗病毒藥物主要以核苷類似物和干擾素為主。干擾素具有廣譜抗病毒,免疫調(diào)節(jié)等作用。體外研究發(fā)現(xiàn),干擾素與細(xì)胞表面干擾素受體結(jié)合,激活經(jīng)典的JAK-STAT途徑,并激活多種信號分子,從而誘導(dǎo)多種抗病毒蛋白而發(fā)揮抗病毒作用,其中以2,5寡腺苷酸合成酶(2’,5’-OAS),抗粘蛋白(Mx)等最為重要。Mx蛋白是干擾素誘導(dǎo)產(chǎn)生的分布于細(xì)胞質(zhì)中的蛋白質(zhì),具有廣譜的抗病毒活性,對正黏病毒、副黏病毒、布尼亞病毒、棒狀病毒、小RNA病毒及乙肝病毒均有敏感的抗病毒作用。而2’,5’-OAS可以啟動核酸水解酶,通過選擇性地降解病毒mRNA發(fā)揮抑制病毒的作用。關(guān)于干擾素在慢性乙型肝炎患者體內(nèi)發(fā)揮抗病毒及免疫調(diào)節(jié)作用的分子機(jī)制目前尚不十分清楚,且在臨床治療過程中存在干擾素抵抗或治療無效的情況。為了深入研究干擾素信號通路和抗病毒效應(yīng)分子,本文分別采用細(xì)胞模型和難治性慢性乙型肝炎患者的外周血單個核細(xì)胞,檢測干擾素刺激后不同時間點干擾素信號分子和抗病毒蛋白表達(dá)情況,以進(jìn)一步明確干擾素抗病毒作用機(jī)制。 我們選取HBV復(fù)制的肝癌細(xì)胞系HepG 2.2.15作為細(xì)胞模型,同時采用無病毒復(fù)制的肝癌細(xì)胞系HepG2細(xì)胞作為對照,用Real Time-PCR檢測干擾素刺激后不同時間點(基線、6小時、12小時、24小時)這兩種細(xì)胞干擾素抗病毒蛋白表達(dá)情況。臨床研究患者的入組標(biāo)準(zhǔn)為已使用恩替卡韋治療9-36個月,HBV DNA陰性但未發(fā)生HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換。按照隨機(jī)分組的原則將患者分到A組和B組。A組使用長效干擾素PEG-IFNα-2a規(guī)范治療一年,B組繼續(xù)使用恩替卡韋治療一年。兩組分別選取20名患者進(jìn)行干擾素信號途徑研究。我們在基線、4周、12周、24周采集外周血并提取PBMC。將PBMC分別提取蛋白和RNA,使用Real Time-PCR方法和Western-Blot方法研究相關(guān)信號分子和抗病毒蛋白的表達(dá)。 在細(xì)胞模型中,無HBV復(fù)制的肝癌細(xì)胞系HepG2和有HBV復(fù)制的肝癌細(xì)胞系HepG2.2.15細(xì)胞在干擾素刺激后6小時、12小時和24小時的Mx和2,5-OAS表達(dá)量與基線相比均有明顯升高,峰值均在6小時。兩種細(xì)胞相比較,HepG2細(xì)胞較HepG2.2.15細(xì)胞其抗病毒蛋白的增高幅度更為顯著。在慢性乙肝患者中,A組在采用干擾素治療后PBMC中相關(guān)信號分子和Mx,2’,5’-OAS的mRNA和蛋白水平均有增高。而使用核苷類似物治療的B組患者的PBMC中干擾素信號分子STAT1和STAT2及其抗病毒蛋白Mx和2’,5’-OAS表達(dá)沒有明顯變化。 本研究說明在干擾素刺激后,HepG2和HepG2.2.15細(xì)胞干擾素介導(dǎo)的抗病毒蛋白的表達(dá)明顯激活,但程度有一定差異,提示病毒復(fù)制是影響干擾素誘導(dǎo)有效抗病毒蛋白產(chǎn)生的因素。在NA治療取得了病毒學(xué)完全應(yīng)答,血清學(xué)應(yīng)答不佳的慢性乙肝患者,聯(lián)合/序貫干擾素治療可以激活I(lǐng)FN信號通路并促進(jìn)抗病毒蛋白Mx和2’,5’-OAS的表達(dá)而發(fā)揮重要的抗病毒作用,其深入的機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。本研究結(jié)果為此類難治性慢性乙肝患者的治療策略的制訂提供了新的理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R512.62
【圖文】：

ealtimePCR方法檢測HepG2和HepG2.2.15細(xì)胞中Mx的表達(dá)*表示P<0.05，**表示P<0.01ealtimePCR方法檢測HepG2和HepG2.2.15細(xì)胞中2’,5’-OAS的表達(dá)*表示P<0.05，**表示P<0.01

realtimePCR方法檢測HepG2和HepG2.2.15細(xì)胞中2’,5’-OAS的表達(dá)注：*表示P<0.05，**表示P<0.01

realtime PCR方法檢測臨床研究A組和B組患者PBMC中STAT1的表達(dá)* 表示P<0.05realtime PCR方法檢測臨床A組和B組研究患者PBMC中STAT2的表達(dá)

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2781630