【摘要】：目的研究乳源免疫調(diào)節(jié)肽（PGPIPN）對酒精性脂肪肝（AFL）動物及細胞模型的防治作用，探討乳源免疫調(diào)節(jié)肽對酒精性脂肪肝的保護作用及可能的機制。 方法 1.體內(nèi)實驗 60只昆明種雄性小鼠，隨機均分為對照組、模型組、護肝片（0.3g/kg）組、PGPIPNⅠ組、Ⅱ組和Ⅲ組。采用梯度酒精灌胃的方法建立小鼠酒精性脂肪肝（AFL）模型,造模的同時給予藥物干預，共12周。實驗結(jié)束后，處死小鼠，收集血清和肝臟。測定小鼠肝指數(shù)(LI)、脾指數(shù)(SI)、血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）及高密度脂蛋白（HDL-C）和肝組織中甘油三酯（TG）、丙二醛（MDA）含量，超氧化歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）含量和三磷酸腺苷(ATP)含量；常規(guī)HE染色和特染油紅O染色觀察肝組織脂肪變性情況。RT-PCR測各組小鼠肝組織ATPase6、ACC、PPAR-γ mRNA表達；Western Blot檢測各組小鼠肝組織PPAR-γ、ACC蛋白的表達水平。 2．體外實驗 培養(yǎng)人永生化的正常胎肝LO2細胞株，建立酒精損傷細胞模型。采用MTT法篩選酒精誘導LO2脂肪變性的適宜濃度(0.15%、0.3%、0.6%、1.2%、2.4%、4.8%)，選擇最適濃度的PGPIPN對其進行干預，光學顯微鏡觀察不同組別油紅O染色情況，全自動生化儀檢測細胞培養(yǎng)基中ALT、AST酶泄露量，以及各組細胞內(nèi)TG水平。 結(jié)果 1、PGPIPN對AFL動物模型的影響：PGPIPN各劑量組均能明顯降低AFL小鼠LI和SI水平、血清中ALT和AST的活性，減少血清中TG、TC、LDL-C及HDL-C和肝組織中TG、MDA含量，升高SOD和GSH-PX活性；同時，病理組織學檢查結(jié)果顯示，PGPIPN各劑量組小鼠肝臟中小泡性脂肪變性程度明顯減輕。與對照組比較，模型組ATPase6、PPAR-γ mRNA表達降低，ACC表達增強；與模型組比較，PGPIPN各劑量組ATPase6、PPAR-γ mRNA表達升高，ACC表達減弱。與對照組相比，模型組PPAR-γ蛋白表達顯著增強，ACC表達減弱；與模型組相比，PGPIPNⅠ組PPAR-γ蛋白表達顯著減弱，ACC表達增強。（P＜0.01or P＜0.05） 2、PGPIPN對乙醇損傷LO2細胞的影響：MTT結(jié)果顯示在一定濃度范圍PGPIPN能改善體外LO2細胞的AFL損害。用MTT法篩選出乙醇濃度0.6%為最適濃度。與模型組比較，PGPIPN各劑量組脂肪變性面積隨給藥濃度的增加而減小； ALT、AST、TG含量均減少。（P＜0.01or P＜0.05） 結(jié)論 1、PGPIPN可通過提高機體抗氧化能力抵抗AFL所致的氧化應激，維持線粒體的正常功能；抗氧化活性是PGPIPN發(fā)揮拮抗AFL的機制之一。 2、PGPIPN抗酒精性脂肪肝的作用可能與其顯著減弱ATPase6、PPAR-γ mRNA和PPAR-γ的蛋白水平，以及增強ACC mRNA與蛋白的表達水平有關。 3、PGPIPN對AFL的發(fā)生發(fā)展有一定的干預作用，對其有一定的防治功效。
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R575.5

【共引文獻】

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本文編號：2778261