【摘要】：目的研究乳源免疫調(diào)節(jié)肽（PGPIPN）對(duì)酒精性脂肪肝（AFL）動(dòng)物及細(xì)胞模型的防治作用，探討乳源免疫調(diào)節(jié)肽對(duì)酒精性脂肪肝的保護(hù)作用及可能的機(jī)制。 方法 1.體內(nèi)實(shí)驗(yàn) 60只昆明種雄性小鼠，隨機(jī)均分為對(duì)照組、模型組、護(hù)肝片（0.3g/kg）組、PGPIPNⅠ組、Ⅱ組和Ⅲ組。采用梯度酒精灌胃的方法建立小鼠酒精性脂肪肝（AFL）模型,造模的同時(shí)給予藥物干預(yù)，共12周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，處死小鼠，收集血清和肝臟。測定小鼠肝指數(shù)(LI)、脾指數(shù)(SI)、血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）及高密度脂蛋白（HDL-C）和肝組織中甘油三酯（TG）、丙二醛（MDA）含量，超氧化歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）含量和三磷酸腺苷(ATP)含量；常規(guī)HE染色和特染油紅O染色觀察肝組織脂肪變性情況。RT-PCR測各組小鼠肝組織ATPase6、ACC、PPAR-γ mRNA表達(dá)；Western Blot檢測各組小鼠肝組織PPAR-γ、ACC蛋白的表達(dá)水平。 2．體外實(shí)驗(yàn) 培養(yǎng)人永生化的正常胎肝LO2細(xì)胞株，建立酒精損傷細(xì)胞模型。采用MTT法篩選酒精誘導(dǎo)LO2脂肪變性的適宜濃度(0.15%、0.3%、0.6%、1.2%、2.4%、4.8%)，選擇最適濃度的PGPIPN對(duì)其進(jìn)行干預(yù)，光學(xué)顯微鏡觀察不同組別油紅O染色情況，全自動(dòng)生化儀檢測細(xì)胞培養(yǎng)基中ALT、AST酶泄露量，以及各組細(xì)胞內(nèi)TG水平。 結(jié)果 1、PGPIPN對(duì)AFL動(dòng)物模型的影響：PGPIPN各劑量組均能明顯降低AFL小鼠LI和SI水平、血清中ALT和AST的活性，減少血清中TG、TC、LDL-C及HDL-C和肝組織中TG、MDA含量，升高SOD和GSH-PX活性；同時(shí)，病理組織學(xué)檢查結(jié)果顯示，PGPIPN各劑量組小鼠肝臟中小泡性脂肪變性程度明顯減輕。與對(duì)照組比較，模型組ATPase6、PPAR-γ mRNA表達(dá)降低，ACC表達(dá)增強(qiáng)；與模型組比較，PGPIPN各劑量組ATPase6、PPAR-γ mRNA表達(dá)升高，ACC表達(dá)減弱。與對(duì)照組相比，模型組PPAR-γ蛋白表達(dá)顯著增強(qiáng)，ACC表達(dá)減弱；與模型組相比，PGPIPNⅠ組PPAR-γ蛋白表達(dá)顯著減弱，ACC表達(dá)增強(qiáng)。（P＜0.01or P＜0.05） 2、PGPIPN對(duì)乙醇損傷LO2細(xì)胞的影響：MTT結(jié)果顯示在一定濃度范圍PGPIPN能改善體外LO2細(xì)胞的AFL損害。用MTT法篩選出乙醇濃度0.6%為最適濃度。與模型組比較，PGPIPN各劑量組脂肪變性面積隨給藥濃度的增加而減�。� ALT、AST、TG含量均減少。（P＜0.01or P＜0.05） 結(jié)論 1、PGPIPN可通過提高機(jī)體抗氧化能力抵抗AFL所致的氧化應(yīng)激，維持線粒體的正常功能；抗氧化活性是PGPIPN發(fā)揮拮抗AFL的機(jī)制之一。 2、PGPIPN抗酒精性脂肪肝的作用可能與其顯著減弱ATPase6、PPAR-γ mRNA和PPAR-γ的蛋白水平，以及增強(qiáng)ACC mRNA與蛋白的表達(dá)水平有關(guān)。 3、PGPIPN對(duì)AFL的發(fā)生發(fā)展有一定的干預(yù)作用，對(duì)其有一定的防治功效。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R575.5

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2778261