【摘要】： 目的:在乙型肝炎病毒的分子流行病學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床治療的研究中,基因分型技術(shù)作為一種重要的研究手段,受到越來越多的重視。乙型肝炎病毒不同基因型的核苷酸的差異可以作為乙型肝炎病毒的傳播途徑、傳染源,流行情況的研究依據(jù)。本研究利用序列測(cè)定及進(jìn)化樹的繪制的分析方法初步確定了新疆地區(qū)乙型肝炎病毒的基因型和血清亞型,S基因變異以及基因型與臨床表現(xiàn)之間的關(guān)系。 方法:在新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院體檢中心、門診和病房采集血清,利用雙抗體夾心ELISA篩查HBsAg陽性血清,提取核酸并進(jìn)行PCR擴(kuò)增,獲得HBV S基因序列。利用ATGC及DNASTAR軟件將樣本HBV S基因的測(cè)序結(jié)果與GeneBank中的25株HBV參考株進(jìn)行核苷酸同源性比對(duì),初步確定新疆地區(qū)乙型肝炎病毒的基因型,繪制系統(tǒng)發(fā)生樹,并且由核苷酸序列推導(dǎo)出氨基酸序列,由此確定乙型肝炎病毒血清亞型以及S基因的變異情況。 結(jié)果:(1)新疆地區(qū)乙型肝炎病毒基因型以C基因型居多,D基因型其次,此外還有少數(shù)B基因型。(2)新疆地區(qū)乙型肝炎病毒的血清亞型多數(shù)為ayw型,少數(shù)為adr型。(3)HBV S基因序列每100個(gè)nt突變的頻數(shù)為2.17。在S基因的兩個(gè)關(guān)鍵位點(diǎn)發(fā)現(xiàn)了有意義的a.a.突變:Q129H和M133L,兩個(gè)位點(diǎn)都位于α抗原決定簇的第一個(gè)莖環(huán)結(jié)構(gòu)內(nèi)。(4)乙型肝炎病毒患者各種臨床表現(xiàn)均以C基因型感染為主,肝硬化及肝癌患者中大部分為C基因型和D基因型,B、C、D三種基因型在乙型肝炎病毒攜帶者中均有分布,在慢性肝炎患者中,B基因型比例較大。 結(jié)論:本研究初步確定了新疆地區(qū)的乙型肝炎病毒的基因型和血清亞型,基因變異以及基因型與臨床表現(xiàn)的基本關(guān)系情況,為制定針對(duì)新疆地區(qū)的乙型肝炎預(yù)防控制策略和指導(dǎo)臨床治療提供了一定的參考依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R512.62
【圖文】：

因比野生型 X 基因具有更強(qiáng)的反式激活作用。HbxAg 與 P53 可以結(jié)合，從而使細(xì)胞生長(zhǎng)失控。組中還有一些調(diào)控元件，包括 4 個(gè)不同的啟動(dòng)子及 2 個(gè)增19-2780）和 SP（2nt2509-3152）分別調(diào)控轉(zhuǎn)錄 2.4kb mRNA蛋白，后者編碼中蛋白或主蛋白。C 基因啟動(dòng)子 CP（鍵調(diào)節(jié)因子，指導(dǎo) 3.4kb 前基因組 mRNA 和 3.5kb 前 C nt1742-1849）和上游調(diào)控序列（nt1643-1742）兩部分構(gòu)作用。X 基因啟動(dòng)子 XP（nt1235-1374）調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄 0.8k種增強(qiáng)子皆位于 ORF 中，十分保守，其中 EnhⅠ(nt974-，能夠明顯促進(jìn) SP1、SP2、C 和 X 啟動(dòng)子所啟動(dòng)的所有627-1774）位于 X 基因中，末端含 CP，能激活全長(zhǎng)基因[2]。

（Lys/Arg 為 w/r 抗原決定簇），將各樣本分為不同的血清型。 DNASTAR 軟件中的 MegAlign 工具里的 Clustal W 對(duì)測(cè)序結(jié)果和 C對(duì)，將堿基置換和氨基酸突變點(diǎn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，對(duì)樣本 HBV S 基因突變分析，計(jì)算 S 基因突變的頻率。結(jié)果V S 基因的擴(kuò)增、序列測(cè)定及分析驗(yàn)通過核酸提取和巢式 PCR 擴(kuò)增，獲得新疆地區(qū) 254 份 HBV S 基因疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院是一所三甲醫(yī)院，其患者來自全疆各地，因在一定程度上能代表新疆 HBV 基因型的流行情況。BV S 基因的 PCR 擴(kuò)增式PCR方法擴(kuò)增出了與預(yù)期大小相同，約700bp的HBV S基因片段（

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2777944